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       【摘要】 
       目的以绿原酸含量为指标，比较不同产地加工的金银花品质。方法采用高效液相色谱法，使用Diamonsil TM C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm)色谱柱；以乙腈-0.4%磷酸溶液（15∶85）为流动相；检测波长为327 nm；柱温30℃；流速1.0 ml/min。结果蒸制后干燥的产地加工法优于直接干燥的加工方法。结论不同产地加工方法的金银花中绿原酸含量有较大差异。
       【关键词】  金银花； 绿原酸； 产地加工； 高效液相色谱法
       Comparison on the Chlorogenic Acid Content in Flos Lonicerae Processed in Different Producing Areas
       BAO Weihua
       （Department of Pharmaceutical Science, Jinhua College of Profession and Technology, Jinhua 321007, China）
       Abstract：ObjectiveTo compare the quality of Flos Lonicerae processed in different producing areas.Methods The content of chlorogenic acid in Flos Lonicerae was determined by HPLC. DiamonsilTM C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm) was used and the mobile phase was Acetonitrile-0.4% Phosphoric acid (15∶85). The wavelength of detector was 327 nm,the column temperature was 30℃ and the flow rate was 1.0 ml/min.ResultsSteaming and oven drying were better than direct drying.ConclusionThe content of chlorogenic acid is different in the Flos Lonicerae processed by different processing in producing areas.
       Key words：Flos Lonicerae;  Chlorogenic acid;  Processing in producing areas;  HPLC
       
       金银花具有广泛的药用价值，可以清热解毒、凉血化淤，主治外感风热、瘟病初起、疮疡疔毒、红肿热痛、便脓血、增强免疫功能等。金银花的常见药用制品有银翘解毒丸、栀子金花丸、银翘解毒片、银翘散、五味消毒饮、祛感灵胶囊、咽炎冲剂、外阴洗剂等［1，2］，另外金银花也能够起到防风固沙、保持水土、改良土壤、改善生态、绿化环境的多重效用。金银花其药用价值主要由其所含化学成分来体现。通过研究得知，金银花化学成分复杂，已鉴别出的就有60多种，其中具有生物活性，并已搞清楚结构的化合物主要有：绿原酸、异绿原酸、黄酮类的木犀草素和挥发油类的芳樟醇等［3～5］。
       
       中药的使用注重产地加工及炮制，不同的加工炮制方法对中药的使用有着不同的意义。而金银花在《中国药典》2000年版Ⅰ部及《浙江省中药炮制规范1994年版》中均未提及产地加工中应蒸制后再干燥［1，2］，翻阅以往文献也未有所获；但在民间采收过程中常有蒸制后再干燥的加工习惯。由于在金银花各化学成分中绿原酸具有抗菌、抗病毒、止血、抗肝炎等特殊作用，因此普遍把绿原酸含量的高低作为衡量金银花质量的标准［5］。本论文的主要内容就是以金银花中绿原酸的含量为指标，以HPLC法为手段，比较两种不同产地加工的金银花的品质。
       1  材料
       1.1  仪器Waters 510色谱系统，490E紫外检测器。HS色谱数据工作站V4.0+（杭州英谱科技开发有限公司）。
       1.2  试药 对照品：绿原酸（chlorogenic acid）购自中国药品生物制品检定所，批号为753-200111；高纯水，其他试剂均为色谱纯。
       1.3  样品取自金华琅琊，经鉴定为忍冬科植物金银花Lonicera confusaDC.的干燥花蕾或带初开的花。1号样品采收后直接干燥，2号样品采收后经蒸制再干燥。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件与系统适用性实验色谱柱为DiamonsilTM C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液（15∶85），流速1.0 ml·min-1，检测波长327 nm，柱温30℃，AUFS0.3；进样量20 μl；理论板数按绿原酸峰计算不低于5 000。
       2.2  供试品溶液的制备分别取1号和2号样品研成细粉，精密称取细粉各约0.5 g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密取续滤液5 ml，置25 ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀即得。
       2.3  对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品0.010 6 g，置棕色容量瓶中加50%甲醇溶解并稀释至50.0 ml，即为对照品溶液。
       2.4  线性关系考察精密吸取对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml，置棕色量瓶中加50%甲醇稀释至10.0 ml，摇匀，按上述色谱条件测定绿原酸的峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，得回归方程Y＝2.19×108X－1.52×105，r=0.999 6，绿原酸进样浓度在21.20～106.0 μg·ml-1内峰面积积分值与浓度呈线性关系。
       2.5  进样精密度实验精密吸取对照品溶液2.0 ml，置棕色量瓶中加50%甲醇稀释至10.0 ml，摇匀，作为对照液，连续进样5次，测定峰面积，RSD=0.71%。
       2.6  稳定性实验精密吸取2．4项下对照液，每隔1 h进样1次，测定绿原酸峰面积积分值，RSD=0.77%，结果表明在5 h内稳定性较好。
       2.7  加样回收实验分别取样品适量，精密加入对照品溶液2.0 ml(0.212 mg·ml-1)，按2．2项下方法制备供试品溶液，测定并计算回收率。结果见表1。
       表1  样品中绿原酸回收率测定结果（略）
       2.8  样品测定  分别精密吸取2．2项下对照液与1号和2号供试品溶液各20 μl分别进样测定。用外标法计算样品中绿原酸的百分含量。结果见图1及表2。
       A.对照品    B.药材      a.绿原酸
       图1  药材和对照品的HPLC（略）
       表2  不同产地加工金银花中绿原酸的含量测定结果（略）
       3  讨论
       
       绿原酸的50%甲醇溶液应避光阴凉处保存，否则峰面积会有所改变而影响测定的准确性。
       
       从表2可见，不同产地加工成的金银花样品中绿原酸含量差别较大，产地加工中经蒸制后再干燥的样品含量要比直接干燥的样品高出5倍多。建议产地加工方法写入标准中，以确保绿原酸的含量。
       
       通过对不同产地加工的金银花中绿原酸的含量测定的比较，未经蒸制直接干燥的金银花中绿原酸含量仅为1.0%，而蒸后干燥的则有5.7%，就绿原酸的含量来说，蒸制后干燥的产地加工方法优于直接干燥的加工方法。
       
       本课题还需对不同产地加工的金银花进行指纹图谱研究、谱效关系的研究等，进一步从更全面的角度说明产地加工的优劣。
       【参考文献】
         　　［1］ 国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：177.
       
       ［2］ 浙江省卫生厅.浙江省中药炮制规范［S］.杭州：浙江省科技出版社，1994：278.
       
       ［3］ 徐炳声.中药金银花原植物研究［J］.药学学报，1979，14(1)：23.
       
       ［4］ 徐国钧，徐珞珊，牛燕珍，等.中药金银花的鉴定研究Ⅰ［J］.南京药学院学报，1979，(1)：82.
       
       ［5］ 柯铭清.中草药有效成分理化与药理特性［M］.长沙：湖南省科技出版社，1982：225.