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       【摘要】 
       目的研究清胃散拆方中盐酸小檗碱和阿魏酸的含量及其变化规律。方法采用HPLC测定清胃散拆方中盐酸小檗碱和阿魏酸的含量。结果黄连中盐酸小檗碱的溶出与其他生药存在相互影响；而配方中各生药对阿魏酸的溶出影响较小。结论 该实验结果可对该复方在临床上的合理运用提供参考。
       【关键词】  高效液相色谱法； 清胃散； 盐酸小檗碱； 阿魏酸
       基金项目：国家自然科学基金资助项目（No.30460154）
        
       Study on the Contents of Berberine Hydrochloride and Ferulic Acid in Different Compatibility about Qingwei San
       SHAO Jinming, CAO Peixue，LIANG Guangyi*，XU Bixue
       (The Key Laboratory of Chemistry for Natural Products of Guizhou Province and Chinese Academy of Sciences, Guiyang, 550002，China; Guiyang College of Traditional Chinese Medicine,Guiyang 550002，China)
       Abstract：ObjectiveTo investigate the contents and variation of berberine hydrochloride and ferulic acid in different compatibility about Qingwei San ［composed of Coptis chinensis Franch, Angelica sinensis (Oliv.) Diels, Rehmannia glutinosa Libosch, Paeonia suffruticosa Andr and Cimicifuga foetida L.］ by HPLC. MethodsThe contents of berberine hydrochloride and ferulic acid in different compatibility about Qingwei San were determined by HPLC. ResultsThe other traditional medicine affected the devolution of berberine hydrochloride in coptis, but affected the devolution of ferulic acid lightly. ConclusionThe result of this experiment provided reference to clinic use in reason about Qingwei San.
       Key words：HPLC;   Qingwei San;  Berberine hydrochloride;   Ferulic acid
       
       中药复方汤剂在煎煮过程中, 各药味的成分相互影响, 产生助溶或沉淀等现象, 使中药复方汤剂中有效成分的提取率产生变化, 直接影响中药复方汤剂在临床上的疗效。因此, 研究中药复方汤剂有效成分含量的变化, 是中药复方研究的一个重要内容。清胃散出自《脾胃论》,由黄连、当归、生地、丹皮、升麻等5味中药组成，主治胃火牙痛等疾病。该经方的主要有效成分为盐酸小檗碱和阿魏酸等，盐酸小檗碱来源于黄连，阿魏酸主要来源于当归、升麻和牡丹皮，研究报道盐酸小檗碱和阿魏酸均有抗菌消炎的作用［1，2］。本实验对在不同的拆方配伍中，有效成分盐酸小檗碱和阿魏酸的转移率变化，探讨了引起它们变化的因素，其结果对该处方在临床上合理运用提供一些参考。
       1  处方与器材
       1.1  处方［3］黄连6 g，当归6 g，生地6 g，丹皮9 g，升麻9 g。
       1.2  仪器  美国惠普HP1100型高效液相色谱仪，HP1100/ WIND3D 化学工作站。DAD 检测器。
       1.3  药品与试剂黄连为毛茛科黄连Coptis chinensis Franch.根茎，产地四川；当归为伞形科当归Angelica sinensis (Oliv.) Diels根，产地甘肃；生地为玄参科生地Rehmannia glutinosa Libosch.块根，产地河南；丹皮为毛茛科牡丹Paeonia suffruticosa Andr.根皮，产地安徽；升麻为毛茛科升麻Cimicifuga foetida L.根茎，产地辽宁；经贵阳中医学院何顺志教授鉴定且符合2005版《中国药典》Ⅰ部收载。盐酸小檗碱对照品（批号07139906），阿魏酸对照品(批号7739001)，购于中国药品生物制品检定所。乙腈(色谱纯)，水(重蒸)，其余试剂为分析纯。
       2  方法
       2.1  单味药中盐酸小檗碱、阿魏酸的含量测定［4］按照2005版《中国药典》Ⅰ部测定黄连生药中盐酸小檗碱的含量为6.53%，当归、丹皮、升麻中阿魏酸的含量分别为0.063 0%，0.006 37%，0.092 1%。
       2.2  样品的制备方法［5］   按所需拆方比例分别称取鉴定好的药材饮片，加8.5倍水，浸泡30 min，煎煮保持微沸20 min，倒出煎液；药渣再加4.5倍量的水煎煮15 min，药渣用50 ml水水洗3次，合并所有药液，减压回流至近干，再真空减压干燥得干膏，研成细粉，称量，得出膏率。
       2.3  色谱条件  选用Hypersil C18色谱柱，流速为1.0 ml·min-1，盐酸小檗碱的流动相为乙腈-0.08%磷酸二氢钾水溶液（30∶70），后者含0.08%三乙胺，7% 四氢呋喃，以磷酸调 pH 至3，检测波长：346 nm，柱温：25 ℃；阿魏酸的流动相为乙腈-0.04%磷酸水溶液（17∶83），检测波长：316 nm，柱温：35 ℃。
       2.4  各拆方中盐酸小檗碱和阿魏酸的样品溶液的制备  根据各拆方干膏的出膏率计算，分别精密称取相当于相等生药量的干膏粉末，置25 ml量瓶中 ,在测定盐酸小檗碱时，加20 ml盐酸-甲醇(1∶100)超声15 min，放至室温，超声后以盐酸甲醇(1∶100)定容至刻度；在测定阿魏酸时精密加入70%甲醇, 摇匀，过0.45 μm滤膜，滤液备用。
       2.5  标准曲线制备  精密称取适量盐酸小檗碱对照品，以盐酸-甲醇(1∶100) 溶解并配制成浓度为42.1 μg·ml-1；同时精密称取适量阿魏酸对照品, 以70%甲醇溶解并配制成348 μg·ml-1的溶液，再分别稀释成6个不同浓度，不同浓度的同种对照品溶液取相同体积进样，按相应色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值（A）对含量（C）作线性回归。结果见表1。
       表1  线性关系测定结果（略）
       2.6  精密度实验  在各自色谱条件下，分别精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液10 μl及阿魏酸对照品溶液1 μl，并分别重复进样6 次,盐酸小檗碱、阿魏酸峰面积的RSD分别为0.56%，0.28%。
       2.7  稳定性实验  按各自合煎饮样品含量测定方法制备样品供试液，精密吸取同一样品供试液，每隔一定时间进样，按相应色谱条件测定盐酸小檗碱、阿魏酸含量，各测6次，RSD分别为0.74%，1. 89%；表明盐酸小檗碱和阿魏酸分别在18 h ，11 h 内稳定性良好。
       2.8  重复性实验  取同一批干膏，按各自样品含量测定方法制备样品供试液，分别平行制备并测定6份样品液，分别用外标法计算盐酸小檗碱和阿魏酸百分含量，其RSD分别为 0.98%，0.13%。
       2.9  回收率实验   精密称取已知含量的合煎液干膏，分别加入样品中对应成分总含量的80%，100%，120 %的对照品，按各自含量测定方法制备样品供试液，同法测定。盐酸小檗碱平均回收率为98.19%，RSD = 1.22%。阿魏酸平均回收率为98.59%，RSD = 0.45%。
       3  各拆方中盐酸小檗碱和阿魏酸的转移率结果
          
       见图1。
       4  讨论
       4.1  盐酸小檗碱的转移率变化  从图1中可看出，黄连单煎时盐酸小檗碱的转移率最高；黄连与生地，黄连与升麻，黄连、当归和生地、黄连、当归和丹皮次之；整个复方相对较低；而其他拆方与复方比较则不太明显。说明盐酸小檗碱的溶出与其他生药存在相互影响，可能既有物理作用又有化学作用，而盐酸小檗碱的水溶性较差，其他生药的加入阻碍了它的溶出，可能是酸性成分产生沉淀导致其下降。同时它与升麻和当归单独配伍时较其他配方中盐酸小檗碱转移率又较高，说明该两味中药是否含有其他有利于它溶出的化学成分，这些还需要进一步的研究。
       图1   盐酸小檗碱和阿魏酸在清胃散各拆方配伍中的转移率（略）
       4.2  阿魏酸的转移率变化  从图1中可看出，阿魏酸的转移率很高，大多数都在90%以上，复方中各生药对其影响较小。但是从转移率小于80%的5个配方来看，其中有3个配方缺了黄连与含阿魏酸的生药配伍，另外有两个配方缺了含阿魏酸的生药，这可能与黄连中碱性成分的影响和含相同成分的生药的影响有关。
       【参考文献】
         　　［1］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅱ部［S］.北京：人民卫生出版社,1995：567.
       
       ［2］ 胡慧娟, 王朋书，杭秉茜，等.阿魏酸的抗炎作用［J］.中国药科大学学报, 1990, 21(5)：279.
       
       ［3］ 段富津.方剂学［M］.上海：上海科学技术出版社,1995：87.
       
       ［4］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社,2005：89, 213.
       
       ［5］ 程磐基.宋元明清药物剂量的考证与研究［J］.上海中医药杂志，2004，38（7）：6.