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       【摘要】 
       目的探讨参麦注射液对急性心肌梗塞（AMI）大鼠血浆及心肌组织中心房钠尿肽（ANP）含量的影响。方法通过结扎冠状动脉前降支建立AMI模型大鼠，AMI后24 h存活的48只大鼠随机分为4组：AMI后1周模型组、AMI后参麦注射液治疗1周组、AMI后2周模型组、AMI后参麦注射液治疗2周组。另设1周、2周假手术组各8只。治疗组腹腔注射参麦注射液1次/d，AMI模型组和假手术组大鼠腹腔注射等量的生理盐水。测量各组血浆及心肌组织中ANP含量。结果与假手术组比较，AMI后1周时，血浆及心肌组织中ANP含量明显增高（P＜0.01）；到梗塞后2周时，虽有所降低，但明显高于模型组，有显著性差异（P＜0.01）。参麦注射液治疗组血浆及心肌组织中ANP含量降低，与相应模型组相比差异显著（P＜0.05）。结论 心肌梗塞后，不论血液循环还是局部心肌组织中ANP都显著性增高，参麦注射液能明显降低ANP的作用。
       【关键词】  参麦注射液； 急性心肌梗塞； 心房钠尿肽
       基金项目：河北省中医药管理局资助项目（No.05019）
        
       Effects of Shenmai Injection on ANP  in the Blood Plasma and Cardiac Muscle after Acute Myocardial Infarction in Rats
       JIAO Hong,CHEN Yanjing*,MA Jianwei, ZHANG Xiaoyun, LI Jiandong
       (Department of Physiology ,  Hebei North University ,  Zhangjiakou  075029,  China)
       Abstract：ObjectiveTo evaluate the effects of Shenmai injection on ANP  in the blood plasma and cardiac muscle after acute myocardial infarction(AMI) in rats.MethodsAMI model was established by ligation of the anterior descending coronary artery in male SD rats. Twentyfour hours after the procedure, the 48 surviving rats were grouped randomly as AMI a week group, AMI two weeks group、Shenmai injection treatment a week and two weeks group (n=12). A week shamoperated group and two weeks sham-operated group were taken randomly as non-infarction control. A week or two weeks after treatment with the drug and placebo by intraperitoneally(IP) , the ANP  in the blood plasma and cardiac muscle was assessed. ResultsCompared with sham-operated group ,ANP in the blood plasma and cardiac muscle increased significantly in AMI group after a week（P＜0.01）；ANP decreased in AMI group after two weeks ,but higher than AMI group（P＜0.01）. In comparison with AMI group , ANP decreased significantly in Shenmai injection treatment group after two weeks（P＜0.05）.ConclusionANP  in the blood plasma and cardiac muscle after acute myocardial infarction(AMI) in rats increase  significantly, ANP decrease significantly in Shenmai injection treatment group.
       Key words：Shenmai injection ;   Acute myocardial infarction ;   Atrial natriuretic peptide
       
       参麦注射液源自古方生脉散，具有益气复脉、养阴生津的功效，临床上广泛用于治疗心脑血管疾病。近年来的研究发现，参麦注射液具有扩张冠状动脉、增加冠脉血流量、促进损伤的DNA合成、加速心肌修复的作用，还可以改善心肌缺氧，增加心肌收缩力。关于参麦注射液在急性心梗后对血浆及心肌组织中AngⅡ及ANP影响的研究较少，尤其对心肌梗塞后早期血浆及心肌组织中AngⅡ及ANP影响。因此本实验着重研究参麦注射液对心肌梗塞后早期血浆及心肌组织中AngⅡ及ANP影响特点，探讨参麦注射液改善心肌梗塞的机制，为其更广泛深入地临床应用提供科学的实验依据。
       1  材料和方法
       1.1  器材
       1.1.1  动物健康雄性10～12周龄SD大鼠76只，体重250～280 g，由中国科学院动物研究所维通利华实验动物中心提供。
       1.1.2  药品和试剂参麦注射液（杭州正大青春保药业有限公司，10 ml/支，含红参、麦冬各1 g）；氨基甲酸乙酯（北京化学试剂公司）；青霉素注射液（华北制药股份有限公司）；AngⅡ放免试剂盒（解放军总医院东亚免疫技术研究）；ANP放免试剂盒（解放军总医院东亚疫技术研究）。
       1.1.3  仪器超低温冰箱（日本三洋）；高速冷冻离心机；DPC-10道放免测定仪；眼科手术器械一套。
       1.2  方法
       1.2.1  动物模型建立按照Olivetti等［1～3］方法稍加改良，结扎大鼠左冠状动脉前降支（LAD）建立急性心肌梗塞（AMI）模型：SD大鼠用0.07 ml·kg-1氨基甲酸乙酯溶液麻醉后，固定于鼠板。手术部位脱毛，碘酒、酒精消毒，沿左侧胸骨旁斜行切口，上界为两前肢后缘连线，下界为第5肋间，依次切开皮肤浅筋膜和深筋膜，并用止血钳钝性分离胸大肌和前锯肌交界处，在靠胸骨缘处用止血钳钝性分离第3，4肋间进胸，打开胸腔，剪开心包膜，挤压出心脏，在左心耳与肺动脉圆锥之间找到冠状动脉，在动脉起始点下方2～3 mm处，用6～0号丝线结扎冠状动脉，迅速将心脏放回胸腔，逐层缝合肌肉和皮肤，局部消毒抗菌。
       
       术中肉眼观察，结扎冠脉左前支后，其血液供应区心脏表面颜色由红变为灰白，青紫。手术前后均记录体表心电图，以Ⅱ导ST段弓背向上抬高0.2 mV以上为结扎成功的标志。参照AMIlavetz方法［4］，选择符合标准者进入实验。
       
       另设1周、2周假手术（Sham , SH）组，各8只。假手术组除不结扎冠状动脉外，其余操作与AMI模型组动物相同。于术后给予青霉素4万U，肌肉注射，1次/d，共3 d。动物清醒后按常规饲养。
       1.2.2  分组术后24 h存活的48只心肌梗塞大鼠随机分为：①AMI 1周组：急性心肌梗塞（AMI）后1周模型组；②SM 1 周组：AMI后参麦注射液治疗1周组；③AMI 2周组：AMI后2周模型组；④SM 2 周组：AMI后参麦注射液治疗2周组。每组12只。
       1.2.3  动物给药方案各组给药时间皆自造模当日开始，参麦注射液给药量是依据人正常用量的5倍［4］量确定的。腹腔注射1次/d，连续给药至取材时为止；模型组和假手术组大鼠腹腔注等量的生理盐水。
       1.2.4  标本采集与处理 待血流动力学指标测定完成后，留取非梗塞区心肌组织、从腹主动脉取血，严格按AngⅡ、ANP放免试剂盒说明分别作相应的处理，待测。
       1.2.5  指标测定
       
       血浆ANP含量测定：ANP用平衡竞争放射免疫分析法测定：腹主动脉取血1 ml，注入低温抗凝管中(含0.27 mol/L的EDTA·Na220 μl和抑肽酶10 μl)，混匀，离心(3 000 r/min)10 min，分离血浆，-20℃保存待测。
       
       心肌组织ANP含量测定 ：取非梗塞区心肌组织150～200 mg，尽快放入1 ml生理盐水中研磨制成匀浆，4℃离心3 000 r/min，15 min，取上清液-20℃以下保存待测。
       1.3  统计学分析使用SPSS11.5统计软件系统，所测数据以平均值±标准(±s)差表示，多组比较采用方差分析，并做两组间两两比较，P＜0.05为有显著性差异。
       2  结果
       2.1  动物一般情况 AMI组大鼠均出现进食量减少，精神状况差，活动减少，口鼻及肢体远端紫绀，1周时一般情况稍有好转，但仍不及假手术组和参麦注射液治疗组，1周、2周取材时体重均明显降低。
       
       实验过程中，所有因手术、麻醉意外等原因死亡的以及术后存活时间未达取材时间要求的动物，均不列入实验观察项目内 。最终获得完整实验资料的大鼠46只，其中AMI 1 周 组8只，SM 1 周 组9只，AMI 2 周 组6只，SM 2 周 组8只，假手术1周（SH 1 周）组7只，假手术2周（SH 2 周）组8只。
       2.2  参麦注射液对心肌梗塞后大鼠血浆及心肌组织中ANP含量的影响结果见图1～2。
       图1  心肌梗塞大鼠后血浆中ANP水平及参麦注射液治疗后的变化（略）
       
       由图1可以看出，心肌梗塞后1周时，血浆中ANP的含量明显高于假手术组，有非常显著性差异（P＜0.01）；2周时虽然有所降低，但仍明显高于模型组，有显著性差异（P＜0.01），与模型1周组相比增高无统计学意义；参麦注射液治疗组血浆中ANP的含量降低，与相应的模型组相比差异显著（P＜0.05或P＜0.01）。
       
       由图2来看，模型组心肌非梗塞组织ANP的含量明显高于假手术组，有非常显著性差异（P＜0.01）；2周时虽然有所降低，但仍明显高于模型组，有显著性差异（ P＜0.05），参麦注射液治疗组心肌非梗塞组织ANP的含量降低，与相应的模型组相比差异显著（P＜0.01或P＜0.05）。
       
       总体来看，心肌梗塞后，不论血液循环还是局部心肌组织中，AngⅡ和ANP都显著性增高，但ANP升高更明显，而AngⅡ升高后持续的时间较长；另外，参麦注射液降低ANP的作用不及对AngⅡ作用明显。
       图2  心肌梗塞大鼠心肌组织中ANP水平及参麦注射液治疗后的变化（略）
       3  讨论
       
       ANP由心脏分泌，具有舒血管、抑制RAA系统、抑制交感神经活动、减少水钠潴留等作用，因而对改善心衰的病理变化有益。ANP主要由心房分泌,但心衰较严重时心室亦可分泌ANP，分泌量随着心衰的恶化而增加［5］。近来的研究表明，心衰代偿期和失代偿期心肌ANP mRNA的表达均增高,而BNPmRNA仅在心衰失代偿期表达增高［6］，因此ANP和BNP可作为判断心衰严重程度的指标。
       
       心功能的改善，钠水潴留的减少，心房肌牵张的减轻，心肌细胞膜构型的改善等均可降低血浆ANP的含量，也是心梗后心室重构得以抑制的表现。
       
       本研究表明，在心肌梗塞后，不论血液循环还是局部心肌组织中，ANP都显著性增高，似乎更甚于AngⅡ的升高。及时给予参麦注射液治疗，可以降低循环和局部心肌组织中ANP的作用，虽然与模型组相比显著性降低，但仍处于较高的水平。已有研究显示，心肌肥厚、心肌梗塞及心力衰竭时循环和局部组织ANP升高，我们的结果与之相符［6～8］。新近资料显示，ANP通过MAPK途径对抗AngⅡ的作用［9，10］，随着血浆AngⅡ水平的下降，ANP浓度应随之降低。
       
       神经内分泌调节复杂，总体而言，参麦注射液有益于AMI后心室重构和心功能障碍的改善，具体机制有待深入探讨。
       【参考文献】
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