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       【摘要】 
       目的探讨不同产地益母草不同部位水苏碱含量的差异。方法采用野外收集和实验室分析相结合的方法。水苏碱的含量采用薄层色谱扫描法测定。结果水苏碱质量百分浓度线性范围为2～20μg，峰面积回归方程为： y=5 381x-7 724.6，r=0.999 2 (n=6)，平均回收率为97.4%，RSD为2.70%(n=8)。 结论我国北方不同地区所产益母草中水苏碱差异显著，其中以北京、河南和山东产益母草品质较好。益母草不同部位水苏碱含量高低顺序为：繁殖部位>叶>茎。
       【关键词】  益母草； 水苏碱； 不同地区； 不同部位
       基金项目：国家发改委北京中药材良种选育基地建设系统工程（8）
       Comparison of the Contents of Stachydrine in Leonurus japonicus Houtt. from Different Regions and its Different Parts
       ZHANG Yan，WANG Wenquan*，WEI Ju，ZHANG Hui, YANG Quan,BAI Yin
       (Beijing University of Chinese Traditional Medicine, Beijing 100102,China)
       Abstract：ObjectiveTo find out the differences of stachydrine content in Leonurus japonicus Houtt.  from different regions and its different parts. MethodsField investigation and laboratory analysis were made on Leonurus japonicus Houtt. The stachydrine content was determined by TLC-scanning. ResultsThe calibration curve of stachydrine was linear over the range of 1～20μg. The regression equation was y=5 381x-7 724.6，r=0.999 2(n=6). The average recovery and RSD were 97.4% and 2.70%(n=8) respectively. ConclusionThere existed significant differences in the stachydrine content from different regions. Among them, Leonurus japonicus Houtt. from Beijing, Henan and Shandong are better. The differences of stachydrine content in the different part of Leonurus japonicus Houtt. is significant, and that in progenitive part is better than in leaf, which in the stem is the lest.
       Key words：Leonurus japonicus Houtt.;  Stachydrine;  Different regions;  Different parts
       
       益母草Leonurus japonicus Houtt.，为唇形科益母草属一年生或二年生草本植物，传统上以开花的地上部分入药，具有活血调经，利尿消肿等作用，临床应用非常广泛［1］。益母草的主要有效成分是生物碱，而水苏碱的含量占其所含的十几种生物碱总含量的80％左右，2005年版《中国药典》也以水苏碱含量来控制益母草的质量。
       
       益母草属植物全球分布约23种，我国12种和2个变种，广泛分布于全国各地［2］，据了解，因益母草为全国广布种，各地均就近收购本地产益母草入药，而对于药材是否因产地不同而具有品质差异仅有1999年的一篇报道［3］，且测的是总生物碱的含量，由于当时方法的限制（比色法先给样品脱色，会带走一部分生物碱），测得的总生物碱的含量较低。
       
       另外，益母草属于地上部分用药的药材，当年生益母草只长叶片，第二年开始长直立的茎，并且开花结果，对于益母草不同部位水苏碱含量的差异目前尚无报道。
       
       本文采用薄层扫描的方法［1］，样品提取测定过程中叶绿素对水苏碱的含量没有影响，方法简单准确，用此方法测定了全国12个省市益母草不同部位的水苏碱含量，讨论了产地对药材质量的影响。
       1  材料与方法
       1.1  器材
       1.1.1  供试药材 自2001年起，北京中医药大学中药资源研究室开始进行常用中药材药用植物种质资源的调查、收集、评价和保存，收集的材料包括种子、无性繁殖材料、药材质量分析样品、植物标本、遗传多样性分析样品、土壤分析样品等，其中益母草在三十余种收集种中属于重点收集品种，截至200608，调查范围遍及全国22个省市自治区的100多个县（市），有73人次参加了外业工作，其中收集到益母草3个种的26份种质资源。考虑到样品的平行性，本文只采用2005-07底至8月初采到的野生药材。
       
       收集到的益母草药材运回到实验室后，统一净制编号，并且分成叶、茎、繁殖部位（包括花、种子和种苞）3个部分，在55℃烘箱中烘干，然后用粉碎机打成细粉，过60目筛，置干燥器中备用。
       1.1.2  仪器与试剂FW-100粉碎机，DHG-9140A型电热恒温鼓风箱，BP211D型分析天平，KQ-500DE型数控超声清洗器，HH-6型数显恒温水浴箱，RE-52型旋转蒸发器，SHB-3型真空泵。日本岛津CS-900型薄层扫描仪，玻璃喷雾瓶（华西医科大学仪器厂），定量毛细管（迪马公司），硅胶G板(青岛海洋化工厂分厂)，展开缸。
       1.1.3  试剂盐酸水苏碱(中国药品生物制品检定所，批号110712-200508)，95%乙醇（分析纯），正丁醇，醋酸乙酯，盐酸，三氯化铁，碱式硝酸铋，碘化钾，冰醋酸，娃哈哈纯净水。
       1.1.4  稀碘化铋钾试液取碱式硝酸铋0.85 g,加冰醋酸10 ml与水40 ml溶解后，即得。临用前取5 ml,加碘化钾溶液5 ml,再加冰醋酸20 ml。用水稀释至100 ml，即得。
       1.1.5  碘化钾溶试液取碘化钾16.5 g，加水使溶解成100 ml,即得。本液应临用新制。
       1.2  方法
       1.2.1  供试品溶液的制备干品取本品粉末约1 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加乙醇50 ml,加热回流1.5 h，放冷，滤过，滤渣及其容器用50 ml乙醇分次洗涤，滤过，合并滤液，旋转蒸发，蒸干溶剂，残渣加乙醇溶解，转移自10 ml离心管中，静置一夜，取上清液做供试品液。
       1.2.2  对照品溶液的制备另精密称取在105℃干燥3 h的盐酸水苏碱对照品，加乙醇制成每毫升含2 mg的溶液，作为对照品液。
       1.2.3  薄层色谱条件照薄层色谱法实验，精密吸取供试品液8 μl,对照品液3 μl与8μl，分别交叉点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯正丁醇盐酸（1∶8∶3）为展开剂，展开，取出，凉干，在105℃加热15 min，放冷，喷以稀碘化铋钾试液-1%三氯化铁乙醇溶液（10∶1）混合溶液至斑点显色清晰，凉干，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定。
       1.2.4  扫描对以上Rf值相同的斑点照薄层色谱法（附录VIB薄层色谱扫描法）进行扫描，波长：λ=510 nm,测定供试品吸光度积分值与对照品吸光度积分值，计算，即得。
       1.2.5  方法学考察样品精密度RSD为2.70% (n=8)，色斑稳定性2 h内RSD分别为1.85% (n=8)，线性范围为2～20μg,峰面积回归方程为:y=5 381x-7 724.6，r=0.999 2(n=6)，加样回收率平均为97.4%, RSD=4.5%(n=5)。
       2  结果
       
       益母草水苏碱含量测定表明（表1），各地区产益母草中水苏碱含量有很大差别，其中以北京、山东、河南产水苏碱含量最高，其次是甘肃、陕西和黑龙江部分地区，而东北地区产水苏碱含量偏低。在采到的山东和黑龙江各3个地区的益母草水苏碱含量相近，同时说明益母草的地域性强。
       表1  12省市益母草不同部位水苏碱含量（略）
       从测得的12份不同种源益母草不同部位的水苏碱含量中可以看出，益母草生殖器官花和种子中含的水苏碱最高，其次是营养器官叶片，茎作为输导组织，其内所含有效成分水苏碱最少。其高低顺序为：繁殖部位>叶>茎。
        经方差分析得出（表2），不同地区益母草水苏碱含量差异达到显著水平（sig=0.013），益母草不同部位的水苏碱含量差异达到极显著水平（sig=0.005）。
       表2  不同产区和不同部位对益母草水苏碱含量影响的方差分析（略）
       *sig.＜0.05表示差异显著  ** sig.＜0.01 表示差异极显著
       3  讨论
       
       本文采用薄层分析的方法，测定了我国北方12个省市益母草中水苏碱的含量，经spss分析检验后得出，不同产地的益母草水苏碱含量差异很大。由于本文所收集益母草都在2005年7月底到8月初，采集时间一致，加工、测定方法相同，而水苏碱又比较稳定，所以可以得出，我国北方益母草药材质量差异显著。建议药厂在选用药材时应考虑到产地的因素，选用质量稳定可控的生药，才能达到更好的临床应用效果。关于不同地区益母草的药理作用差异，有待进一步试验验证。
       
       另外，益母草属于地上部分用药的药材，当年生益母草只长叶片，第二年开始长直立的茎，并且开花结果，益母草不同部位水苏碱含量高低顺序为：繁殖部位>叶>茎。益母草其它成分含量在不同部位的差异还需通过对大量样品中多指标成分的定量测定和指纹图谱的定性测定来进行深入分析，这对以后的益母草定向培育具有指导意义。
       【参考文献】
         　　［1］ 国家药典委员会．中国药典，Ⅰ部［S］．北京：化学工业出版社，2005∶203．
       
       ［2］ 晁 志，王厄舟，周秀佳．益母草药材中生物碱含量与产地生态环境的关系［J］．第一军医大学学报，2000，20（6）：504 .
       
       ［3］ 可 燕，车生泉．不同产地益母草总生物碱含量的比较［J］．中草药，1999，30（4）：270．