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       【摘要】 
       目的观察复方银杏叶片对大鼠长期毒性影响。方法复方银杏叶片88.44， 17.69 mg /kg（为临床日剂量的50倍和10倍）给大鼠连续灌服13周，停药2周，分别测量大鼠体重，计算脏器系数，测定血液学和血液生化学指标，并作组织病理学检查。结果复方银杏叶片高、低剂量组大鼠的外观体征、行为活动、体重、脏器系数、血液学和血液生化学指标，与空白对照组比较，均无明显差异；病理检查未见与药物毒性相关的明显病变，停药后也未见药物延迟性毒性反应。结论复方银杏叶片长期用药对大鼠无明显毒性，推论临床拟用剂量应是安全的。
       【关键词】  复方银杏叶片； 大鼠； 长期毒性实验
       基金项目：广西壮族自治区科学基金项目（No.0342003-1）
       The Long-term Toxicity Study of Compound Ginkgo Biloba Tablets in Rats
       PAN Hongping，WEI Hualing，CHEN Ying，ZHONG Zhengxian，CHEN Xuefen，LI Yanjing，LU Mei
       (People"s Hospital of Guangxi Autonomous Region,Nanning 530021，Guangxi，China；Guangxi Institute of Traditional Chinese Medical and Materia Medica,Nanning 530022，China)
       Abstract：ObjectiveTo observe the effects of compound Ginkgo biloba Tablets on rats.Methods60 rats were randomly divided into 3 groups, each group was given compound Ginkgo biloba tablets intragastrically in dose of 88.44,17.69 mg/kg (50 and 10 times of clinic dose) for 13 weeks. Half of the animals were killed immediately after the last administration, and another half of rats were observed for 2 weeks after medicine withdraw. Parameters were examining including general condition, body weight, food intake, blood cell, blood biochemistry, organ index, and histopathological examination.ResultsThe outer appearance and behavior, weights, organ coefficient, the indexes of haematology and biochemistry in rats had no significant difference by comparing with control group.The pathological examination did not discover significant pathological changes related to drug toxicity and the delayed toxicity reaction after drug administration.ConclusionCompound Ginkgo biloba Tablets has no significant toxicity for long-term administration to rats. It infers that the drawing up doses in clinic will be safe.
       Key words：Compound Ginkgo biloba Tablets;   Rats;  Long-term Toxicity
       
       复方银杏叶片主要由银杏提取物和广西野葛根提取物等制成的复方中药制剂。葛根素及黄酮类化合物是其主要活性成分，具有活血化淤，降低血脂，清除自由基和抗衰老等功效和作用［1，2］。临床适应症主要为心脑血管病和老年病。本实验的目的是观察药物对动物所产生的毒性反应，其首先可能出现的症状和严重程度，可能针对的靶器官及其恢复和发展情况，确定无毒反应剂量，为拟订临床使用安全剂量提供实验依据，现将大鼠长期毒性实验结果报道如下。
       1  器材
       1.1  药物复方银杏叶片，含14.15 mg葛根素/片,批号：20051030，由广西区人民医院制剂室提供。使用时加蒸馏水配制成不同药物浓度供实验应用。
       1.2  动物 Wistar种大鼠，体重100～135 g，由广西医科大学动物实验中心提供，合格证：SCXK桂2003-0003。动物按性别分笼饲养于有空调的实验动物室内，室温(22±1)℃,相对湿度(60±5)%。自由饮水和喂标准颗粒饲料。
       1.3  仪器7170A型日立生化自动分析仪，日本东亚公司；NIHON KOHDEN 血细胞分析仪（日本产）（MEK-6318K）。
       2  方法［3，4］
       
       选取6～8周龄大鼠60只，体重(120±15)g，雌雄各半，随机分成3组，每组20只。 每组大鼠分笼饲养，每笼5只。设空白对照组，复方银杏叶片高剂量（88.44 mg/kg）和低剂量(17.69 mg/kg)组。给药各组分别以临床人日剂量的 50倍、10倍剂量的复方银杏叶片给大鼠灌胃给药，空白对照组给予等体积蒸馏水，1次/d，给药体积为1.0 ml/100 g体重,连续13周。每日观察记录大鼠一般状况如进食，行为活动，粪便等。每周称体重1次，并及时调整用药剂量。末次给药24 h后，每组选取10只大鼠（雌雄各半），腹腔注射10%水合氯醛麻醉，从腹主动脉采血，采集的血样于血细胞分析仪上检测红细胞(RBC)、白细胞 (WBC)、血红蛋白(HGB)、血小板(PLT)、淋巴细胞系(LY)、单核细胞系(MO)、凝血时间（CT）等血液学指标。另外取血分离血清，于生化自动分析仪上测定血清中的总胆红素（T-Bil）、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、 谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、总胆固醇(TC)、葡萄糖(GLU)等生化学指标。并对主要脏器进行全面尸检，取心、肝、脾、 肺、肾、肾上腺、胸腺等脏器称重，计算脏器系数。然后对上述主要脏器及胃、小肠、子宫、卵巢、睾丸、脑等脏器用10%甲醛固定，进行常规病理学检查。各组余下大鼠停药观察两周后，同法处理，并检测上述指标。所得结果作统计学处理，用t检验比较组间差异显著性。
       3  结果
       3.1   对动物一般情况的影响 在给药期间，复方银杏叶片各剂量组及空白对照组大鼠的外观体征、行为活动、进食量及粪便等状况正常，动物无一死亡。停药观察两周后，亦无明显变化。
       3.2  对动物体重的影响连续用药13周和停药两周，复方银杏叶片高、低剂量组大鼠体重正常增长，与空白对照组比较，体重变化无明显差异。结果见表1。
       表1  复方银杏叶片对大鼠体重增长的影响（略）
       3.3  对动物脏器系数的影响给大鼠连续用药13周和停药2周后，复方银杏叶片高、低剂量组和空白对照组大鼠的心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺等主要脏器系数比较，无明显差异（P>0.05），表明给大鼠长期灌服复方银杏叶片，对大鼠主要脏器重量无明显影响。结果见表2～3。   
       3.4  对大鼠血液学指标的影响 给大鼠连续用药13周，复方银杏叶片高、低剂量组和空白对照组大鼠血液的白细胞 (WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、血小板(PLT)、淋巴细胞系(LY)、单核细胞系(MO)、凝血时间（CT）等指标，与空白对照组比较, 除了高剂量组PLT值有所升高外，其他各剂量组的各项指标与空白对照组比较，均无显著性差异。停药14 d测定结果，各剂量组的各项指标与空白对照组比较，均无显著性差异。结果见表4～5。 
       3.5  对大鼠血液生化学指标的影响给大鼠连续用药13周，测定复方银杏叶片高、低剂量组和空白对照组大鼠在末次给药24 h后的血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、尿素氮（BUN）、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、葡萄糖(GLU) 、总胆红素（T-Bil）、肌酐（Cr）、总胆固醇（TC）的结果，高低剂量组和低剂量组的TB值有所降低，但均在正常范围内，无实际意义，其余各剂量组的各项指标与对照组比较，均无显著性差异。停药14 d的测定结果，低剂量组AST值有所降低，但在正常范围内，无实际意义，其余各剂量组的各项指标与对照组比较，均无显著性差异。结果见表6～7。
       3.6  病理学检查   给大鼠连续用药13周和停药2周后，分别处死动物，剖取各组大鼠的心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺等脏器，首先进行肉眼尸检，主要脏器外形、体积、色泽均属正常，无充血、肿胀、坏死等异常现象。然后，各脏器用10%甲醛溶液固定48 h后，按常规方法做病理切片，光镜下检查。结果表明，复方银杏叶片高、低剂量组大鼠的心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、脑、睾丸、卵巢、子宫等脏器进行全面肉眼尸检，用药组和对照组均未见异常。病理组织学检查，大鼠心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、脑、睾丸、卵巢、子宫、胃、小肠等脏器组织形态学均为正常，与空白对照组比较，未明显见到由于药物毒性引起的病理改变。因此，证明给大鼠长期灌胃复方银杏叶片不影响动物器官组织形态学。
       表2  复方银杏叶片用药13周后对大鼠主要脏器系数的影响（略）
       表3  复方银杏叶片停药2周后对大鼠主要脏器系数的影响（略）
       表4  复方银杏叶片用药13周后对大鼠血液学指标的影响 （略）
       与空白对照组比较，1）P<0.05；n=10
       表5  复方银杏叶片停药2周后对大鼠血液学指标的影响（略）
       表6  复方银杏叶片用药13周后对大鼠血液生化学指标的影响（略）
       与空白对照组比较，1）P<0.05，2）P<0.01；n=10
       4   讨论
       
       有文献报道［1］，给狗每天静注银杏叶黄酮2～8 mg·kg-1，其血常规和肝功能均未见异常。银杏叶黄酮对兔、豚鼠、大鼠、小鼠等动物的亚急性实验表明,其对心、肝、脾、肾、动脉等器官组织的影响均未见形态学改变。
       
       慢性毒性实验发现，给大鼠肌注葛根素10，50 mg/kg-1·d-1共3个月,狗静脉注射10，30 mg/kg-1·d-1共4周,动物的体重、血象、心电图、肝肾功能及重要器官组织学检查未见异常。给大鼠灌胃葛根总黄酮剂量为2.50，1.66及0.83 g/kg,1次/d,连续90 d。动物一般情况良好,对血小板、血色素、肝肾功能及各主要脏器病理组织学均无明显影响。提示长期应用本品可能不产生蓄积性毒性［2］。
       表7  复方银杏叶片停药2周后对大鼠血液生化学指标的影响（略）
       与空白对照组比较，1）P<0.05；n=10
           
       上述文献报道表明，复方银杏叶片中的主要有效成分银杏叶黄酮及葛根素的毒性均较低。
       
       本实验结果表明，复方银杏叶片以88.44和17.69 mg/kg体重，相当于人临床日剂量( 1.77 mg/kg)的50倍和10倍剂量，连续给大鼠灌胃给药13周及停药2周，与空白对照组比较，动物的一般状况、体重、主要脏器系数无明显差异；血液学指标、血液生化学指标检查，各剂量组的大多数检测项目与空白对照组比较，虽有个别检测指标存在一定差异，但其测定值仍在正常值范围内，故无实际意义。主要脏器的病理检查表明，组织形态学正常，未见与药物毒性相关的明显病变，说明复方银杏叶片对大鼠未出现严重的毒副反应，也未显示明显的中毒靶器官，停药两周后也未见药物延迟性毒性反应。表明复方银杏叶片毒性很小，临床拟用剂量应是安全的。
       【参考文献】
         　　［1］ 潘洪平. 银杏叶制剂药理作用和临床应用研究进展［J］.中国中药杂志，2005，30（2）：93.
       
       ［2］ 潘洪平. 葛根总黄酮和葛根素的药理作用和临床应用研究进展［J］.广西医学，2003，25（10）：1941.