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       【摘要】 
       目的建立清脑降压片的质量控制标准。方法采用薄层色谱法鉴别制剂中当归、决明子；采用高效液相色谱法测定制剂中黄芩苷含量。结果当归、决明子薄层图谱斑点清晰，空白无干扰；黄芩苷在0.076～1.52 mg范围内呈线性关系，回归方程Y=52.585X-0.294 2，r=0.999 9，平均回收率为100.36%。RSD为1.67%（n=9）。结论 所建立的方法简便、准确、快速、稳定、可靠，可作为该制剂的质量控制标准。
       【关键词】  清脑降压片； 薄层色谱法； 质量标准； 黄芩苷
       Investigation of Quality Standard in Qingnao Jiangya Tablet
       ZENG Huifang， CAI Dake， HOANG Xiaoqi， HE Yaohui， HOU Shaozhen， PENG Shaozhong
       （The First Affiliated Hospital of Guangzhou University of TCM, Guangzhou, Guangdong 510405, China；Guangzhou University of TCM, Guangzhou, Guangdong 510405,China）
       Abstract:ObjectiveTo establish the quality standard of Qingnao Jiangya Tablet.MethodsTo identify Radix Angelica Sinensis and Semen Clssiae by TLC. Determine baicalin by HPLC.ResultsRadix Angelica Sinensis and Semen Clssiae had a sharp chromatogram by TLC. The standard curve of baicalin was Y=52.585X-0.294 2，r=0.999 9，linear range was 0.076～1.52 mg，average recovery rate of baicalin was 100.36%，RSD was 1.67%.ConclusionThe method is simple，accurate and can be used for the quality control of the granules．
       Key words:Qingnao Jiangya;  Tablet；  TLC；  Quality standard；  Baicalin
       
       清脑降压片的标准收载于《中国药典》2005年版，处方由黄芩、当归、决明子等13味中药组成，具有平肝潜阳、清脑降压的功效。用于肝阳上亢，血压偏高，头昏头晕，失眠健忘等。目前《中国药典》所记载的标准只对方中当归和决明子进行薄层鉴别，尚未对其进行含量测定［1］，清脑降压片为临床上降血压的常用药，且有较大的开发前景［2］，该药品需要更确切的质量标准对其质量进行有效的控制。黄芩为本方要药，黄芩苷为其活性成分，具有清热泻火、降压止咳等作用，用于高热烦渴、高血压、肺热咳嗽等疾病，与本品的功能主治有密切关系，是本制剂的主要有效成分之一。因此，本研究运用TLC对制剂中的当归和决明子进行定性检测，并采用高效液相色谱法对制剂中黄芩苷进行含量测定，现报道如下。
       1  仪器与试药
       
       高效液相色谱仪∶Dionex Summit (P680 HPLC Pump, ASI100 Automated Sampled Injector,UVD170U,STH585 Column Oven) Chromeleon数据处理系统，超声波清洗机（SB-5200,宁波新芝科器研究所），实验室专用超纯水机(重庆利迪现代水技术设备有限公司)。
       
       甲醇为色谱纯试剂（Merck公司），水为超纯水，其它试剂均为分析纯。黄芩苷（批号∶110715200212）对照品均购自中国药品生物制品检定所。清脑降压片(批号20041201，20041202，20041203)，由广州中医药大学新药研究开发中心提供；其它试剂均为分析纯。
       2  方法与结果
       2.1  薄层色谱鉴别
       2.1.1  当归的薄层鉴别取本品10片，研细，加正己烷20ml，超声处理30 min，滤过，滤液浓缩至0.5 ml,作为供试品溶液。另取当归对照药材0.1 g，加正己烷10 ml，同法制成对照药材溶液。按不含当归的处方，采用制剂工艺及上述供试品制备方法，制成缺当归阴性样品溶液。按照薄层色谱法（《中国药典 》2005年版Ⅰ部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液5～10 μl及对照药材溶液1 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷醋酸乙酯(9∶1) 为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm) 下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；缺当归样品溶液未见上述斑点。结果见图1。
       2.1.2   决明子的薄层鉴别取本品10片，研细,称取粉末1.5   g，加甲醇10 ml，浸渍1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 ml使溶解，再加盐酸1 ml,置水浴上加热30 min，立即冷却，用乙醚分2 次提取，20 ml/次,合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿1 ml 使溶解，作为供试品溶液。另取决明子对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。另取大黄素、大黄酚对照品，加甲醇制成每毫升各含1m g的混合溶液，作为对照品溶液。按不含决明子的处方，采用制剂工艺及上述供试品制备方法，制成缺决明子的阴性样品溶液。照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各2 μl，分别点于同一以羧甲基纤维钠为黏合剂的硅胶Ｈ薄层板上，以正己烷醋酸乙酯甲酸(10∶1∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为红色。结果见图2。
       2.2  黄芩苷的含量测定
       2.2.1  色谱条件 色谱柱为Kromasil C18(4.6 mm×250 mm，5μm)；流动相甲醇水磷酸（47∶53∶0.2）；检测波长280 nm；流速1.0 ml/min；柱温25℃。
       2.2.2  线性关系考察  精密称取黄芩苷对照品3.8 mg，置50 ml容量瓶中，用70%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每毫升中含黄芩苷76 μg）。分别精密吸取对照品溶液1，2，4，8，14，20 μl进行色谱测定，按上述色谱条件测定峰面积，以进样量（Y）对峰面积（X）进行线性回归，得标准曲线。结果显示，进样量在0.076～1.52 mg范围呈线性关系，回归方程为Y = 52.58 5X -0.294 2，相关系数r=0.999 9。
       2.2.3  专属性考察  分别精密吸取线性考察项下对照品溶液、清脑降压片供试品溶液、清脑降压片缺黄芩苷供试品溶液各10 μl进行色谱测定。色谱图见图3。结果显示，在该色谱条件下，方中其他成分与黄芩苷分离良好，其他成分对黄芩苷含量测定无干扰。
       图1  清脑降压片中当归的TLC图谱（略）           
       图2  清脑降压片中决明子的TLC图谱（略）   
       
       图3  清脑降压片中黄芩苷的HPLC图谱（略）
       2.2.4  提取方法的考察
       
       提取方法的选择：取同一批号（20041201）样品3份各1.5 g，精密称定，各加入70%乙醇50 ml，分别超声提取30 min，水浴回流3 h，考察不同提取方法对提取结果的影响。结果见表1。结果显示，由于回流提取方法的温度较高，加热时间长，使黄芩苷水解，影响提取效果，超声提取方法提取的黄芩苷含量较水浴回流提取的高，而且从操作简便角度考虑，确定提取方法为超声提取。
       
       提取时间的考察：取同一批号（20041201）样品3份各1.5 g，精密称定，各加入70%乙醇50 ml，超声提取，提取时间分别为30，60，90 min，后处理同供试品制备方法，考察超声时间对提取效果的影响。结果见表2。结果显示，样品采用提取时间30，60，90 min的各成分含量相差不大，从节省时间方面考虑，确定提取时间为30 min。
       表1  不同提取方法试验结果（略）
       表2  不同提取时间试验结果（略）
       2.2.5  供试品溶液制备方法  取本品10片，研细，取1.5 g, 精密称定，精密加入70%乙醇50 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液5 ml，置10 ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，摇匀，即得。
       2.2.6  精密度实验  精密吸取3.2项下对照品溶液4 μl重复进样6次，测得峰面积积分值，平均值为32.24 mg/g,RSD＝1.99%。
       2.2.7  稳定性实验精密吸取3.5项下供试品溶液，分别在0，2，4，6，12 h吸取10 μl进样，测得峰面积积分值，平均值23.40%，RSD=1.27%。
       2.2.8  重复性实验取清脑降压片样品（批号20041202），按照3.5项下供试品溶液制备方法操作，吸取10 μl进样，重复进样6次，测得峰面积积分值，外标法计算含量，平均值为29.19 mg/g，RSD=1.50%。
       2.2.9  加样回收率实验取已知含量的同一批样品（批号20041202）0.5 g，精密稳定，精密加入一定浓度的黄芩苷对照品溶液（28 mg·ml-1）0.8，1.0，1.2 ml，依法制备供试品溶液，HPLC测定峰面积，外标法计算含量。结果表明，黄芩苷的平均回收率为100.36%，RSD为1.67%。结果见表3。
       表3   黄芩苷回收率测定结果（略）
       2.2.10  样品含量测定  取清脑降压片样品（批号20041201，20041202，20041203），按供试品溶液制备方法制备，吸取10 μl进样，测定峰面积，计算含量。结果见表4。
       表4  样品含量测定结果（略）
       3  讨论
         
       本研究在查阅文献的基础上，对样品制备中提取条件（提取方法［3］、提取时间［4］）进行考查，其中较完善的提取方法为超声提取；一方面说明了超声提取技术作为一项比较先进、方便的提取方法，特别适用于实验室研究。另一方面说明了本方法的耐用性和稳定性，在长时间提取中仍然不影响黄芩苷的含量。
       
       该药品为薄膜衣片，其处方中黄芩、当归、决明子是该药品的重要组成，而《中国药典》2005年版只对决明子做了薄层鉴别，因此，本研究在此基础上再对当归进行薄层鉴别，并采用HPLC对黄芩苷进行含量测定。结果显示，该方法用于该品种有良好的检测结果，HPLC对黄芩苷的响应值灵敏；对当归薄层鉴别的研究成熟，实验结果理想；最后确定的方法稳定、可行，可以为质量标准的制定提供参考。
       【参考文献】
         　　［1］ 国家药典委员会.中国药典［S］.北京：化学工业出版社，2000：620.
       
       ［2］ 郭玉红.自拟清脑降压汤对高血压胰岛素抵抗的影响［J］.中医药信息，2003,1(20)：48.
       
       ［3］ 戚雪勇，傅海珍，戴恩达，等.HPLC法测葛根芩连微丸中黄芩苷含量［J］.江苏大学学报（医学版），2006,16(1)：53.
       
       ［4］ 陈珍兰，黄文峰，许则省，等. HPLC测定复方银黄片中黄芩苷的含量［J］.现代食品与药品杂志，2006，16(1)：40.