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       【关键词】  补骨脂素；,,异补骨脂素；,,补肾酒；,,高效液相色谱法
       摘要：目的：建立补肾酒中补骨脂素与异补骨脂素的含量测定方法。方法：采用高效液相法，选用Zorbax SB－C18分析柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为甲醇－0.01%磷酸(40∶60)；检测波长246 nm；柱温40℃。结果：补骨脂素在0.046 9～0.233 1 μg范围内线性良好，r＝0.999 9；异补骨脂素均在0.046 6～0.232 8 μg范围内有较好的线性关系，r＝0.999 9；补骨脂素加样回收率平均为98.44%，RSD为1.19%(n＝5)；异补骨脂素平均回收率为99.70%，RSD为1.99%。结论：该法简便，快速，可用于补肾酒的质量控制。
       关键词：补骨脂素；  异补骨脂素；  补肾酒；  高效液相色谱法
       Determination of Psoralen and Isopsoralen in Bushen Wine by High Performance Liquid Chromatography
       WU Ningqi, YONG Ge
       (Eerduosi Institute for Drug Control,Inner Mongolia 017000, China; Clinic of Galutu, Eerduosi, Inner Mongolia Autonomous Rogion 017000, China)
       Abstract:Objective:To establish a method for the determination of psoralen and isopsoralen in Bushen Wine by high performance liquid chromatography (HPLC). Methods:The Zorbax SB－C18 was used as the stationary phase. The mobile phase consisted of methanol－0.01% phosphatic acid (40∶60) and detective wave was 246 nm.Results:The calibration curves of psoralen and isopsoralen were linear respectively at the range of 0.046 6～0.232 8 μg(r＝0.999 9), 0.046 6～0.232 8 μg(r＝0.999 9).Conclusion:This method is reliable and accurate, the method can be applied to separate and determine the Bushen Wine.
       Key words:Psoralen；  Isopsoralen;  Bushen Wine;  HPLC
   
　　补肾酒为新研制的内服纯中药制剂，由补骨脂，黄芪等二十几味中药组成，主要用于肾虚气亏引起的性功能障碍。补骨脂是处方中君药，其有效组分补骨脂素，异补骨脂素为主要有效组分，在质量标准的研究制订中，采用高效液相色谱法测定补肾酒中补骨脂的有效成分补骨脂素和异补骨脂素的含量，结果表明实验的重现性好，准确度高，为补肾酒的质量控制提供了可靠的方法。
       　　1  仪器与试剂
       仪器 HP1050高效液相色谱仪。
       试剂 甲醇色谱纯；磷酸 优级纯；对照品:补骨脂素；批号0739－9907，异补骨脂素；批号0738－9907；供含量测定用，由中国药品生物制品检定所提供。
       　　2  方法与结果
       2.1  色谱分析条件色谱柱：Zorbax SBC18(250 mm×4.60 mm，5 μm)；流动相甲醇0.01%磷酸(40∶60)；柱温为40℃；检测波长246 nm；流速1.0 ml/min。
       2.2  供试品溶液的制备精密量取装量项下的本品10 ml，浓缩至约4 ml，加水10 ml，混匀，用乙醚振摇提取4次(20,15,15,15 ml)，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇适量使溶解，并定量转移至10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，通过已处理好的中性氧化铝柱(100～200目，2 g，内径1.0 cm)上，收集药液，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，即得。
       2.3  对照品溶液的制备精密称取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加甲醇溶解，制成每毫升中含补骨脂素、异补骨脂素各10 μg的溶液，即得。
       2.4  空白实验按处方中药味的比例，自配不含补骨脂的群药，按其工艺制成空白制剂，再按供试品溶液制备方法制备并测定，结果空白溶液与补骨脂素与异补骨脂素对照相同保留时间处未显色谱峰，认为无干扰(见图1)。
       2.5  线性关系考察分别精密量取补骨脂素对照品的甲醇溶液(0.117 1 mg/ml)、异补骨脂素对照品的甲醇溶液(0.116 4 mg/ml)各1，2，3，4，5 ml，分别置25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10 μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，以补骨脂素、异补骨脂素对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明补骨脂素在0.046 9～0.233 1 μg范围内线性良好，其回归方程为Y＝74 768.04X100.40，r＝0.999 9，异补骨脂素在0.046 6～0.232 8 μg范围内线性良好，其回归方程为Y＝74 939.86X＋243.40，r＝0.999 9。
       2.6  样品溶液的稳定性实验精密量取同一供试品溶液(批号040106)，进样10 μl，分别于配制后0，2，4，8，17，26 h，依法测定，结果表明，在26 h内基本稳定，补骨脂素RSD为1.16%，异补骨脂素RSD为1.70%。
       a对照品  b样品  c色谱图
       1.补骨脂素  2.异补骨脂素
       图1  色谱图（略）
       2.7  精密度实验精密量取同一供试品溶液(批号040106)，进样10 μl，重复进样5次，求得相对标准偏差RSD为0.42%，异补骨脂素相对标准偏差RSD为0.39%。
       2.8  重复性实验按正文方法，对同一批号(批号为040106)样品5份进行测定，求得补骨脂素平均含量0.013 6 mg/ml，相对标准偏差RSD为1.98%；异补骨脂素平均含量0.014 1 mg/ml，相对标准偏差RSD为1.63%。
       2.9  回收率实验采用加样回收法，精密量取已知含量的同一批号样品(批号040106，含量补骨脂素为0.013 6 mg/ml，异补骨脂素为0.014 1 mg/ml)5 ml，精密加入补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，按正文供试品溶液的制备方法制备及上述色谱条件测定，结果见表1～3。
       表1  补骨脂素回收率（略）
       表2  补骨脂素回收率（略）
       2.10  样品测定按正文方法，测定十批样品，结果见下表。
       表3  样品中补骨脂素与异补骨脂素含量测定结果（略）
       　　3  讨论
       3.1  流动相的确定曾采用甲醇水(80∶20)，(70∶30)，(60∶40)，补骨脂素与异补骨脂素峰为一个峰，无法分离，采用甲醇－水(40∶60)，可将二峰分离，但有拖尾现象，加入少量磷酸，以甲醇0.01%磷酸(40∶60)为流动相，分离效果好，且无拖尾现象。
       3.2  本实验采用HPLC法测定补肾酒中补骨脂素与异补骨脂素的含量，其提取方法简单，分析快速，精密度高，重现性好，且空白无干扰。
       　　参考文献：
       ［1］  国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：411411.
       ［2］  孙文基，谢世昌.天然药物成分定量分析［M］.北京：中国医药科技出版社，2002：200200.
       (内蒙古鄂尔多斯市药品检验所  017000；  内蒙古鄂尔多斯市乌审旗嘎鲁图卫生院  017000)