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       【摘要】 
       目的优选出秦艽中龙胆苦苷的提取最佳工艺。方法采用正交试验法，以龙胆苦苷含量为指标，考察了乙醇浓度、浸取时间、溶媒用量及提取次数对秦艽中龙胆苦苷提取率的影响，优选出合理的提取工艺。结果用乙醇浓度为70%，浸取时间为36 h，溶媒用量为药材的10倍，提取次数为3次为最佳。结论 经验证性实验证明所优选条件可靠，适合秦艽中龙胆苦苷的提取工艺参考。
       【关键词】  秦艽； 龙胆苦苷； 正交设计法
       基金项目：江西省教育厅科技计划项目（赣教技字［2006］48）
        
       Optimization of the Extraction Technology of Gentiopicroside from Gentiana macrophylla Pall by Orthogonal Experiments
       HAO Xiaoxia, YU Shuxian*,HE Chunlin
       （Department of Chemistry, Nanchang University, Nanchang 330031,China）
       
       Abstract：ObjectiveTo explore an optimum extraction technology of gentiopicroside from Gentiana macrophylla Pall. MethodsUsing gentiopicroside as the index, the effects of alcohol concentration, extraction time, solvent amount and extraction degree on extraction technology were evaluated by orthogonal design method. ResultsThe superior technology of gentiopicroside was as follows: 70% alcohol, 36 hours, 10-fold solvent and extracted 3 times. ConclusionThe optimum extraction process is proved stable and accurate,and it is suitable for extraction of gentiopicroside from Gentiana macrophylla Pall. It can be used for the theoretical basis.
       Key words：Gentiana macrophylla Pall；  Gentiopicroside；  Orthogonal design
       
       秦艽Gentiana macrophylla Pall为龙胆科植物，多年生草本，主产甘肃、青海等地［1］ 。主根粗长,圆锥形，上粗下细，扭曲不直,有少数分枝，其中部多呈螺纹状,根头部有许多纤维状残存叶基［2］。根味苦、辛，性平。秦艽为传统中药，具有祛风湿、清湿热、止痹痛的功效，可用于风湿痹痛、筋脉拘挛、骨节酸痛、日晡潮热、小儿疳积发热等［3］。秦艽中含有大量龙胆苦苷(gentiopicroside)等裂环环烯醚萜苷,为其苦味成分［4］。近年来的研究表明,该类成分具有保肝、益肝、抗炎镇痛等活性。本实验采取了正交实验的方法，以龙胆苦苷为指标，对秦艽中龙胆苦苷的提取工艺进行了实验。
       1  仪器与试药
       1.1  试剂 龙胆苦苷对照品（中国药品生物制品检定所）；秦艽（甘肃产）；无水乙醇（分析纯,上海振兴化工一厂）；所用水均为去离子水。
       1.2  仪器  AB2ON型电子天平（Mettler-Toledo设备有限公司）；802电动离心机（江苏晓阳电子仪器厂）；RE5298旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；FC160型锥式粉碎机（上海中药机械厂）；PH030干燥箱/培养箱（上海一恒仪器厂）；Gold S54紫外可见分光光度计（上海棱光科学器材有限公司）。
       2  方法与结果
       2.1  提取方法
       2.1.1  实验因素与水平根据预实验结果，以乙醇浓度、浸取时间、溶媒用量和提取次数为考察因素，设计4因素3水平表。见表1。
       2.1.2  正交实验称取秦艽药材27份（每份约2 g），每3份为1组，平行实验，共9组，按表2安排实验。冷浸提取，过滤，合并滤液，滤液浓缩，定容于50 ml容量瓶中，做为储备液，备用。以龙胆苦苷为指标，采用直观分析法、方差分析，确定最佳工艺条件。
       表1  实验因素与水平（略）
       2.2  龙胆苦苷的测定
       2.2.1  对照品溶液的制备取龙胆苦苷对照品0.006 7 g，加无水乙醇制成浓度为0.134 mg/ml的溶液，作为对照品溶液。
       2.2.2  样品溶液的制备准确量取储备液1 ml,加无水乙醇，定容到100 ml，摇匀，静置，作为样品溶液。
       2.2.3   扫描波长的确定取无水乙醇和稀释5倍后的对照品溶液，在200～350 nm波长范围内进行光谱扫描，得龙胆苦苷的紫外吸收光谱图（见图1）。由紫外吸收光谱可见，龙胆苦苷在271 nm波长处有最大吸收，因此选择271 nm为检测波长。
       2.2.4   线性关系在5个25 ml的容量瓶中，分别加入龙胆苦苷对照品溶液0.8，1.0，2.0，4.0，5.0 ml，再加无水乙醇稀释至刻度。在200～350 nm波长范围内进行光谱扫描，它们在271 nm处的吸光度分别为0.162 4，0.191 8，0.330 7，0.636 4和0.774 7。以吸光度对龙胆苦苷对照品浓度作图（见图2），得回归方程：Y＝27.388 01X+0.043 39，r=0.999 9，线性关系良好。
       图1  龙胆苦苷的紫外吸收光谱图（略）   
       图2  龙胆苦苷标准曲线图（略）
       2.2.5  样品含量的测定将9组27个样品液与标准液同时测定，以无水乙醇为对比溶液，在200～350 nm波长范围内进行光谱扫描，记录波长271 nm处的吸光度值，求得相应的浓度，计算龙胆苦苷的百分含量。结果见表2。
       表2  正交实验方案及结果（略）
       2.2.6  样品稳定性取样品溶液,分别于定容后1，2，6，12，24 h进行紫外扫描,记录在波长271 nm处的吸光度,结果RSD=0.74%，24 h内基本稳定。
       2.3  极差分析与方差分析对表2有关数据做极差分析和方差分析，结果分别见表3～4。
       表3  极差分析（略）
       由表3极差分析可知,各因素的影响大小顺序为D＞C＞B＞A，且以A2B3C3D3水平为佳,即乙醇浓度为70%，浸取时间为36 h，溶媒用量为10倍、提取次数为3次。经进一步验证，与实验结论相符。
       表4  方差分析（略）
       从表4可知，D因素对龙胆苦苷的提取有显著性影响。
       3  讨论
       
       文献报道龙胆苦苷在甲醇中溶解度较大，但是由于甲醇具有强黏膜刺激性，毒性较大，因此不适合于药用有效成分的提取［5］。由于乙醇和水均不是龙胆苦苷的良溶媒，因此乙醇浓度对提取效果的影响不是很显著。本实验采取常用溶媒水、醇系统进行提取工艺优选，由于龙胆苦苷在水和乙醇中的溶解度均不大，而药材中含量相对较高，因此影响其提取效果的主要因素则为溶媒量；同时由于提取次数增多，其溶媒量成倍增加，因此表现出提取次数对结果有显著影响。
       
       龙胆苦苷是秦艽的主要有效成分，也是秦艽药材质量的重要标准，药理研究表明龙胆苦苷对化学性及免疫性肝损伤具有保护作用［6］，因此,对于这样一种药理活性明显的中药,采用现代化的提取、纯化手段将其开发为具有保肝作用的二类新药(中药制剂)是较为可行的,本实验即是做了这方面的基础研究。
       
       裂环环烯醚萜为热不稳定成分，故采用冷浸提取的方法。
       【参考文献】
         　　［1］ 中华本草编委会.中华本草，第6卷［M］.上海：上海科学技出版社,1999：231.
       
       ［2］ 谢宗万,范崔生,朱兆仪.全国中草药汇编，第2版［M］北京：人民卫生出版社,1996.
       
       ［3］ 王浴生,邓文龙,薛春生.中药药理与应用，第2版［M］北京：人民卫生出版社,1982.
       
       ［4］ 刘艳红.秦艽中的环烯醚萜苷成分［J］.云南植物研究, 1994,16(1)：85.
       
       ［5］ 赵瑞芝，梁伟杰，丘小惠.正交试验法优选龙胆药材中的龙胆苦苷提取工艺［J］.西北药学，2005,2(1)：52.
       
       ［6］ 李艳秋，赵德化，潘伯荣，等.龙胆苦苷抗鼠肝损伤的作用［J］.第四军医大学学报，2001,22(18)：164.