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       【摘要】 
       目的优选莲子心生物碱的最佳提取工艺。方法以紫外分光光度法测定生物碱的含量，采用正交实验法对莲子心的提取工艺进行优选。结果最佳提取工艺为：药材粉碎成粗粉，用10倍量的甲醇进行回流提取。结论 最佳提取工艺可以有效地提取莲子心中的生物碱，工艺操作简单、合理。
       【关键词】  莲子心； 生物碱； 正交实验法； 提取工艺
       基金项目：福建省重大科技资助项目(No.2002Y006，2004ZY0202，2004ZY0204)
       Orthogonal Test for Optimization of Extraction Process of Alkaloids from Plumula nelumbinis
       ZENG Jianwei,XIONG Xuemin,WU Jinzhong*
       (Jiangxi Academy of Traditional Chinese Medicine, Nanchang,Jiangxi 330077, China; School of Pharmacy, Second Military Medical University, Shanghai,200433 China; Fujian University of Traditional Chinese Medicine,Fuzhou,Fujian 350003,China)
       Abstract：ObjectiveTo optimize the extracting process of alkaloids from plumula nelumbinis．MethodsUltraviolet spectrophotometry was used. Orthogonal test was adopted to optimize extraction process of  alkaloids from plumula nelumbinis．ResultsThe optimum extracting procedure was as follows：medical material was crashed to coarse powder,and then extracted in 10 times methanol.ConclusionThe optimum extraction process can extract the alkaloids from plumula nelumbinis and the extraction technology is simple and reasonable．
       Key words：Plumula nelumbinis;   Alkaloids;   Orthogonal Test;   Extraction Technology
       
       莲子心为睡莲科植物莲Nelumbo nucifera Gaertn.的成熟种子中的干燥幼叶及胚根［1］。《本草纲目》记载其性味苦寒，归心肺肾三经，具清心去热，固精止血之功效。现代研究证明，莲子心具有降血压、抗心律失常、抗血小板聚集等心血管药理活性，与其所含生物碱成分有关［2］，譬如莲心碱(Liesinine)、异莲心碱(Isoliensinine)、甲基莲心碱(Neferine)、莲心季铵碱(Lotusine)等。这些生物碱的分子结构中都含有共轭键，具有很强的紫外吸收。因此，本文以紫外分光光度法来测定总生物碱的含量，采用正交实验法对多因素、多水平下的莲子心的提取工艺进行优化选择，获得最佳提取工艺，从而提高莲子心中生物碱的提取率。
       1  仪器与试药
       
       760CRT双光束紫外分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)，KQ250E超声清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)。氯仿（上海申博化工有限公司），甲醇（上海振兴化工一厂），其它试剂均为分析纯。莲子心购自黄庆仁栈华氏大药房，经鉴定为莲Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥幼叶及胚根。
       2  方法与结果
       2.1  正交实验设计　采用L9(34)正交实验表安排莲子心的提取实验，以莲子心生物碱溶液的吸光度为考察指标，选择提取方法、药材粒度和甲醇用量3个因素，每个因素设3个水平。因素水平见表1。正交实验设计及结果见表2。方差分析见表3。
       2.2   莲子心生物碱的提取　取莲子心药材（粉末）10 g，按表2安排莲子心的提取实验。用甲醇进行提取，提取液回收甲醇蒸干，残渣用1%盐酸50 ml使溶解，过滤，滤液用浓氨水调pH至9～10；再用氯仿萃取2次，40 ml/次；合并氯仿层，转移到100 ml容量瓶中，并用氯仿定容至刻度。
       表1  因素水平（略）
       表2  L9(34)正交实验设计及结果（略）
       表3  方差分析（略）
       2.3  莲子心生物碱的含量测定　对莲子心生物碱溶液在200～400 nm范围内进行紫外扫描，发现有两个吸收峰，但最大吸收波长在277 nm处，故选择在277 nm处的吸光度作为莲子心生物碱含量测定结果。　
       2.4  结果分析
       2.4.1  直观分析由表2知，RA＞RC＞RB，即A为主要因素，其次为C，B；再根据Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ值的大小确定水平：依次为A(3)，B(3)，C(3)。由于莲子心药材粒度越细，粉碎越困难，而2，3水平结果相差不大，所以B因素选择2水平。故初步确定莲子心生物碱的最佳提取工艺暂定为：A3B2C3。
       2.4.2  方差分析直观分析的结论是否可靠，需经方差分析后才能确定。由表3知，A因素具有显著性差异，而B，C两个因素均无显著性差异。进一步确定影响莲子心生物碱提取率的关键因素是A，即提取方法应选择回流提取；药材粒度对生物碱提取率既无明显影响，则选择粉碎容易的操作，即粉碎成粗粉即可；提取溶剂的用量对生物碱提取率亦无显著性影响，从节约溶剂用量出发，方法甲醇用量宜选择10倍量为佳。综上所述，莲子心生物碱的最佳提取工艺确定为：A3B2C2，即药材粉碎成粗粉，用10倍量的甲醇进行回流提取。
       2.5   验证实验　称取药材按A3B2C2 进行验证实验，结果与正交试验结果吻合，说明工艺稳定可行。
       3  讨论
       
       莲子心中含有大量的叶绿素，提取前宜先用石油醚对药材进行前处理，去除叶绿素等杂质。
       
       由于紫外吸收具有加和性，故选择测定莲子心总生物碱的紫外吸光度作为考察指标，但不排除诸如黄酮类等其它物质带来的干扰。
       
       本实验未对提取时间进行考察，是因为每种提取方法的时间差别太大，同一水平无法比较。
       
       本实验是采用甲醇作为提取溶剂，来考察生物碱的提取率，对实验室一般性研究具有一定的参考价值。若要用于指导生产，宜将甲醇改成乙醇，再就乙醇浓度、提取时间等因素做一次正交实验，以求得最佳的生产工艺。
       【参考文献】
         　　［1］ 国家药典委员会．中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：193.
       
       ［2］ 曾建伟，吴锦忠，张书娟. 莲子心药学研究进展［J］.福建中医学院学报，2005，15(10)：40.