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       【摘要】 
       目的研究细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cells，CIK细胞)治疗对患者全身情况、免疫功能的影响，以及对气阴两虚证候群的改善情况。方法2005～2006年间88例化疗结束后没有临床可评价病灶中医辨证为气阴两虚的患者，随机分为治疗组和对照组，在化疗结束后治疗组给予1周期CIK细胞治疗，对照组不做处理，检测培养前后CIK细胞表型，检测外周血T淋巴细胞亚群变化，评价气阴两虚证候群及体力状况评分的改善情况（KPS评分，并与对照组比较）。结果培养后CIK细胞表型检测可见CD3+，CD8+和CD3+，CD56+细胞较培养前显著增加(P<0．05)；患者外周血淋巴细胞表型与回输前相比，回输后第20天所测各指标变化最明显 (P<0．05)；两组KPS评分治疗前后比较差异无显著性(P＞0．05)，但治疗组可见到有升高的趋势；治疗前后气阴两虚证症状积分比较，积分均显著下降 (P<0．05)。结论 CIK细胞抗肿瘤治疗可以改善患者免疫功能，一定程度提高患者生活质量，有扶正之功。
       【关键词】  CIK细胞； 化疗； 气阴两虚
       目前化疗仍然是恶性肿瘤的主要治疗手段之一，这些手段在治疗疾病的同时常常会影响机体的免疫功能。中医认为不仅因为肿瘤的邪毒、痰淤耗伤人体气阴，化疗在杀灭肿瘤细胞同时，也可能灼伤肿瘤患者的精气［1］，加重乏力、气短、咽干口燥、大便干结、五心烦热等证候群，化疗后的患者常常以虚证为多，而据以往的研究显示过继免疫治疗可以改善患者的全身情况，改善患者的免疫功能，而这些与中医的正气有类似之处，我们选择2005～2006年间88例化疗结束后没有临床可评价病灶中医辨证为气阴两虚的患者，在化疗结束后给予1个周期细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cells，CIK)细胞治疗，观察对患者全身情况、免疫功能的影响，以及对气阴两虚证候群的改善情况,评价CIK的临床应用价值。现报道如下。
       1  材料与方法
       1.1  病例选择本组88例均为200508～200611间我科住院患者，男性48例，女性40例，平均年龄56．91(24～ 75)岁。所有病例均经病理学证实，接受4～6个周期的化疗，无临床可评价病灶,中医辨证属于气阴两虚证,其中肺癌13例，食管癌13例，肝癌(包括胆管癌)15例，乳腺癌12例，胃癌10例，直肠癌10例，肾癌15例。体力状况评分(Karnofsky标准)≥60，无严重心、肝、肾等器质性疾患，血象、肝肾功能在正常范围内，随机分组，并按制定方案完成研究的病例作为研究对象。两组患者的性别、年龄及病情分期比较差异无显著性(P>0．05)，具有可比性。结果见表1。
       表1  两组患者资料比较（略）
       1.2  治疗方法治疗组给予1周期自体CIK细胞治疗，对照组不做处理。
       1.3  治疗开始和治疗结束后20 d评价全身情况生活质量以体力状况评分Karnofsky标准进行评定，对两组治疗前后进行评分。
       1.4  检测外周血T淋巴细胞亚群变化  治疗组治疗前和治疗结束后10 d，20 d采用流式细胞仪检测外周血T细胞亚群CD3+，CD4+，CD8+，CD3-/CD56+，CD3+/CD56+等细胞免疫指标。
       1.5  气阴两虚证诊断标准及相关症状评分按文献［2］标准主症：①神疲乏力；②气短懒言；③咽干口燥；④大便干结；⑤五心烦热。次症：①烦渴欲饮；②小便短少；③午后颧红；④腰膝酸软；⑤舌体瘦薄；⑥苔少而干；⑦脉虚数。具备主症①②项中1项或以上，主症③④⑤中1项或以上，次症2项或以上。症状分级量化：按症状轻、中、重程度分别积分1，2，3分。根据这些症状表现程度不同计分，治疗后症状平均积分值比治疗前下降1／3以上者为改善。
       1.6  CIK细胞的分离、培养与回输
       1.6.1  细胞分离与培养 治疗组45例患者抽取外周血用离心机提取富含白细胞层，再用Ficol液分离并收集外周血单个核细胞（PBMC）。PBMC经Hank’S液洗涤3次，用RP160培养液配成1×106/ml，加γ-干扰素1 000 u/ml，24 h后加入IL-1α1 000 u／ml，CD3McAb 70 mg／ml，IL-1α 200 u／ml，此后每3天半换液并计数。
       1.6.2  细胞回输培养7 d培养基上清经细菌和霉菌培养阴性后，第10天收集细胞，无菌生理盐水洗3次，加入10%人血白蛋白、20万单位IL-2后回输，4次输完，1次/d。治疗组患者均接受1周期CIK治疗。
       1.6.3  CIK细胞免疫表型测定对6例患者CIK细胞在培养前和第10日回输前分别抽取少量细胞，采用免疫荧光法，通过流式细胞仪测定免疫表型。
       1.7  毒副反应评价毒副反应按WHO(1998)统一标准分为0～Ⅳ度［3］。
       1.8  统计学处理利用SPSS12．0作分析，进行两样本均数比较的t检验。显著性水准取α≤0．05。
       2  结果
       2.1  患者CIK细胞表型 6例患者CIK细胞培养前后细胞表型的表达情况(见表2)。可见CD3+，CD8+和CD3+，CD56+细胞较培养前显著增加(P<0．05)。培养3 d后开始快速增长，每3天增长2～3倍，第9天时为4.4×109 个。
       表2  6例患者培养前后细胞表型变化情况（略）
       培养前后细胞表型比较，*P<0．05
       2.2  各组治疗前后KPS评分比较两组KPS评分治疗前后比较差异无显著性,但治疗组可见到有升高的趋势。结果见表3。
       表3  两组患者治疗前后生存质量评分比较（略）
       2.3  外周血淋巴细胞表面标志变化治疗组回输后第10，20天患者外周血淋巴细胞表型与回输前相比，回输后第20天所测各指标变化最明显，与回输前相比有统计学差异(P<0．05）。结果见表4。
       表4  治疗组外周血淋巴细胞表面标志变化（略）
       2.4  治疗前后气阴两虚证症状积分情况治疗组气阴两虚证症状积分均显著下降(P<0．05)，对照组和治疗组治疗后积分下降幅度小于对照组(P<0．05)。结果见表5。
       表5  治疗前后气阴两虚证症状积分比较（略）
       与本组治疗前比较，*P﹤0.05；与对照组治疗后比较，△P﹤0.05
       2.5  不良反应 回输时最常见的不良反应为发热，共有4例出现发热(8％)，最高体温39．5℃ ，最久持续3 d，经对症处理后好转；有2例在回输时出现一过性寒战，肌注非那根后消失。未见其他不良反应。
       3  讨论
       
       细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cells，CIK)是由多种细胞因子如IL2、γ干扰素 和CD3单克隆抗体等诱导而成的对多种肿瘤具有杀伤活性的细胞毒性T细胞，其溶瘤活性具有非MHC限制性［4，5］，可特异地聚集于肿瘤局部发挥抗肿瘤作用。CIK细胞是CD3+CD8+和CD3+CD56+为主的异质性细胞群，具有较强的增殖活性、广谱抗肿瘤、杀伤活性高的特点,对CIK细胞进行免疫表型分析发现CD3+、CD8+细胞较多，尤其是CD3+CD56+细胞［6］。 本文免疫表型结果表明在CIK细胞培养过程中，两种杀伤活性的细胞CD3+CD8+细胞和D3+CD56+细胞两种亚型细胞明显增多，与陈健等［7］的报道基本一致。本研究结果在对T淋巴细胞亚群分析显示CIK细胞治疗可以改善患者免疫功能，在抗肿瘤免疫反应中主要是细胞免疫反应，其中T细胞亚群起着主导作用，能够杀伤肿瘤细胞，在免疫监视中也起着主要作用。从表4可看出，治疗前恶性肿瘤者外周血CD3+，CD4+，CD3+／CD56+比值和活性均明显下降，说明恶性肿瘤患者免疫功能出现不同程度的抑制［8］。而这种情况在治疗后得到改善，说明提示CIK细胞有提高和改善化疗患者免疫功能的作用。陈健等［7］认为恶性肿瘤患者体内PBMC细胞杀伤活性较低， CIK细胞治疗后PBMC细胞杀伤活性明显增高，治疗后外周血淋巴细胞Ag-NORs的IS值明显增高，这些表明CIK细胞治疗可提高机体的细胞免疫抗肿瘤功能。另外，我们的结果显示治疗后体力活动评分增加，一般情况改善，差异虽无统计学意义，也在一定程度上可以看到增加的趋势，这与陈健等［7］的报道是一致的。CIK细胞治疗对中医的气阴两虚的证候改善明显，治疗组自身前后对照和与对照组比较均有统计学意义。《医学汇流》云：“正气虚则为岩。”郭勇［9］从190例癌症患者的临床辨证分析来看均以虚证为主(包括气虚、阴虚、气阴两虚)共有170例(占89．4% )，而以实证表现为主者仅20例(占10．53%),说明肿瘤发病由虚致实的病因。化疗药损伤了脾胃，脾失运化，胃失和降，脾胃为后天之本，日久脾气虚，胃阴不足，而脾土为肺金之母。肺主气，日久成气阴不足、虚虚之患。正虚更易感受外邪，并降低对化疗的耐受性,故我们认为CIK细胞免疫治疗有扶正之功。目前随着CIK的研究深入和在临床的推广应用，它在肿瘤治疗中的作用将进一步得到证实和发挥。
       【参考文献】
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