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       【关键词】  茄根；,,酸性组分；,,环氧化酶
       摘要：目的：探讨茄根酸性组分的抗炎机理。方法：可溶性淀粉诱导小鼠腹腔巨噬细胞，以脂多糖(LPS)刺激腹腔巨噬细胞，加入外源性花生四烯酸(AA)，用放射免疫分析法(RIA)测定细胞培养液中PGE2的含量。用PGE2生成量表示COX2活性。结果：与模型对照组比较，茄根酸性组分具有极显著降低PGE2含量的作用。结论：茄根酸性组分能极显著地抑制COX2的生成和COX2生成后的活性。对COX2的抑制作用，可能是茄根酸性组分发挥抗炎作用的主要机理之一。
       关键词：茄根；  酸性组分；  环氧化酶2；  抗炎
       The Influence of the Acidic Components of Aubergine Root to   Cyclooxygenase-2
       WANG Junzhi， SHEN Yingjun， YE Hong， SONG Liqiong
       (Three Gorges University, Yichang, Hubei 443002, China； Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu, Sichuan  610075, China)
       Abstract:Objective:To research on the anti-inflammatory mechanism of the acidic components of Aubergine root.Methods:Induce the murine peritoneal macrophages by the dissolubility starch, activate the murine peritoneal macrophages with the Lipopolvsaccharide(LPS), join the outside source the Arachidoinic acid (AA), meansure the content of  the PGE2  with radioimmunoasssy (RIA).The COX2 activities are evaluated by the detection of the PGE2 production.Results:Compare with the model, the acidic components of aubergine  root   significantly reduce content of PGE2.Conclusion:The acidic components  of  aubergine root  significantly  inhibit  the  COX2  activities.  The  effect  of  inhibit the COX2,  may  be a main anti-inflammatory mechanism  of the acidic components of aubergine root.
       Key words: Aubergine root;  Acidic components;  Cyclooxygenase-2;  Anti-inflammatory
   
　　环氧化酶(cyclooxygenase，COX)是催化膜磷脂花生四烯酸转化为前列腺素类物质的限速酶。花生四烯酸经环氧酶途径生成的PGs，是体内重要的炎症介质，在炎症中起到重要作用。目前临床常用的非甾体抗炎药多是通过抑制COX的活性而发挥其解热、抗炎和镇痛作用。茄根为土家族常用药物之一，具有祛风利湿、清热止血、散瘀消肿等功效。主治牙痛、风湿热痹、冻疮等［1］。酸性组分是茄根抗炎的主要有效部位，对多种炎症，如关节炎、牙周炎等具有很好的治疗效果。为探讨茄根酸性组分的抗炎机理，我们就茄根酸性组分对环氧化酶2的影响进行了研究。
       　　1  实验材料
       1.1  药品 实验用茄根于200211中旬采自湖北省长阳土家族自治县蔬菜基地，待收获完茄子后采挖茄根，除去地上部分，洗净，切成厚片晒干备用。茄根经三峡大学植物学教研室陈芳清教授鉴定为茄科植物Solamum  melongena L．的根。碱提酸沉法制备酸性组分备用。
       DMEM培养基(BIBCO)，新生小牛血清(BIBCO)，脂多糖(Sigma)，花生四烯酸(Sigma)，可溶淀粉(浙江湖州市菱湖食品化工厂)，3H―PGE2放免试剂盒，解放军总医院科技开发中心放免研究所。
       1.2  动物C57BL/6小鼠，全雄，体重20～25 g；由华中科技大学实验动物中心提供，合格证号：TJLA200341。
       1.3  仪器 DFM96型10管放射免疫计数器(众成机电公司)，BCM1000型超净工作台(苏州净水仪器设备厂)，石英SZ93型自动双重纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂)，电子天平MA200  (上海第二天平仪器厂)，YXO.SG41.280型电热手提式压力蒸汽灭菌器(上海医用核子仪器厂)，KQ500B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，细胞培养板，0.22 μm过滤器(华美生物工程公司)。
       　　2   实验方法及结果
       2.1  对LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞COX2生成的影响含药血清的制备［2］：wistar雄性大鼠按体重随机分为4组。分别为正常血清对照组，阳性对照组(消炎痛)，药物高、低剂量组。每天灌胃给药2次，连续5 d,末次给药后1 h股动脉取血，分离血清，56℃水浴灭活30 min，0.22 μm滤膜除菌，加  DMEM培养基，配成20%含药血清培养液，20℃保存备用。
       腹腔巨噬细胞的培养：C57BL/6小鼠腹腔注射1%的可溶性淀粉，每只l ml。3 d 后断头处死。腹腔注射Hank"s液8 ml/只，无菌条件下洗出腹腔细胞1 000 r/min，离心8 min，细胞用Hank"s  液洗 1 次，作细胞计数，用含10%新生小牛血清的DMEM培养基调整细胞浓度至106ce11/ml将细胞接种于96孔培养板中，每孔0.2 m1，37℃，5%C02。培养箱内培养6 h。
       COX2活性测定［3］：用Hank’s液洗去未贴壁细胞，加入不含新生小牛血清的培养基，饥饿12 h 换液；于培养板中每孔加入200μl含药血清培养基，分组如下：空白对照组、模型对照组加人含正常动物血清的培养基，阳性对照组、药物高、低剂量组分别加入含药血清培养基，37℃，5%CO2下培养1 h，除空白对照组外，其余各组加人刺激剂LPS，使其终浓度为l μg/ml，培养6 h；加入底物花生四烯酸(AA)，使其终浓度为10 μmol／L,37℃温孵30 min，测定上清液中PGE2量。用PGE2生成量表示COX2活性。以给药组引起的PGE2生成减少反映药物对COX2活性的抑制作用。 PGE2的量用3H标记的PGE2放免试剂盒测定。按试剂盒中提供的方法制作标准曲线，根据标准曲线回归方程Y=-1.376 5 X+1 246.3，r=0.940 4，计算出相应的浓度。结果见表1。
       2.2  对小鼠腹腔巨噬细胞COX2生成后的抑制作用含药血清的制备，腹腔巨噬细胞的培养方法同2.1，只是细胞经LPS刺激(终浓度1 μg/ml)6 h后，换液，培养板中每孔加  200 μl含药血清培养基，培养l h，再加入底物花生四烯酸(AA)，使其终浓度为10 μmol／L，37℃温孵30 min，以后步骤同2．1。结果见表1。
       表1  对LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞COX2的影响（略）
       与模型对照组比较，P＜0.01，n=6
       　　3  讨论
 
　　COX是一膜结合蛋白，是AA代谢途径合成PGs、TXs、PGl2的重要限速酶。 20世纪90年代初发现，COX存在几种同工酶，如COX1和COX2，  COX1表达于大多数组织和细胞如胃粘膜、肾脏和血小板，COX1有重要的生理作用。 COX2静息时表达少，炎症、败血症、细胞损伤及溃疡时其表达迅速增加，与炎症的关系密切。目前常用的NSAIDS抗炎作用机理主要通过抑制COX，减少PGE2等炎症介质的产生，呈解热、镇痛、抗炎作用。COX2是NSAIDs抗炎作用的靶酶，茄根酸性组分具有良好的抗炎作用，对多种炎症，如关节炎、牙周炎等具有很好的治疗效果。为探讨茄根酸性组分的抗炎机理，我们研究了茄根酸性组分对环氧化酶2的影响。
       利用淀粉诱导小鼠腹腔巨噬细胞，经致炎剂LPS作用，其COX2表达显著增加。给予外源性AA后，COX2将AA代谢成PGE2的量也相应增加。观察药物使PGE2量减少的程度可反映药物对COX2的抑制活性。LPS诱导的COX2生成模型，可观察药物对COX2酶蛋白诱生过程的作用，即药物是否作用于基因表达调节过程。LPS刺激的COX2生成后模型，可观察药物是否直接抑制生成后的COX2酶蛋白活性。
       实验显示，对于LPS诱导的COX2生成模型，LPS刺激的COX2生成后模型茄根酸性组分均能使PGE2的含量显著减少，说明其对COX2生成及生成后的活性有明显抑制效应。茄根酸性组分通过对COX2的生成及生成后的酶蛋白的抑制，从而抑制AA代谢生成PGE2，发挥抗炎效应。对COX2的抑制作用，可能是茄根酸性组分发挥抗炎作用的主要机理之一。
       茄根资源丰富易得，茄根酸性组分临床疗效显著，毒副作用小［4］，具有良好的研究和开发利用价值。
       　　参考文献：
       ［1］  国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草, 第1版［M］.上海：上海科学技术出版社，1998：307307.
       ［2］  孟  李，王宁生.血清药理学研究含药血清的制备方法研究［J］.中药新药与临床药理，1999，10(5)：292292.
       ［3］  Mitchell JA,Akarasereenont P，Thiemerman C,et a1.Selectivity of nonsterodial anti-inflammatory drugs as inhibitors of constitutive and inducible cyclooxygenase［J］.ProcNatl Acad SciUSA.1994,90：1169311693.
       ［4］  叶  红，陶彩云，汪植.根炎痛急性毒性实验［J］.黑龙江中医药，2003，6：4444.
       (三峡大学，湖北 宜昌  443002；  成都中医药大学，四川 成都  610075)