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       【摘要】 
       目的探讨中药多糖含量测定方法的可行性及稳定性。方法对测定多糖常用对照品葡萄糖、鼠李糖、半乳糖，参考文献方法，分别采用硫酸－苯酚法、硫酸－蒽酮法比较显色反应后吸收曲线的稳定性。结果不同单糖对照品显色反应后最大吸收波长不同，其中硫酸－苯酚法显色反应后稳定性较好，硫酸－蒽酮法稳定性较差。结论 硫酸－苯酚法为较理想的多糖含量测定方法。
       【关键词】  多糖； 硫酸－苯酚法； 硫酸－蒽酮法
       Comparison of Methods in Determination of Polysaccaride Content
       ZHONG Fangxiao, REN Haihua, LI Yan
       (Shandong Research Institute of Chinese Medicine, Jinan 250014, China; Shandong Tumor Hosiptal, Jinan 250117, China)
       Abstract：ObjectiveThe thesis is intended to discuss the feasibility and stability of methods used to determine the content of polysaccarides in Chinese medicine.MethodsCommon control samples used in determining polysaccarides were glucose, rhamnose and galactose, and with reference to documentary methods, H2SO4-minophenol method and H2SO4-anthrone method are used to compare the stability of the absorption curse after chromogenic reaction. ResultsThe maximum absorption wavelengths of different monosaccharide control samples vary, with the H2SO4-minophenol method having relatively better stability after chromogenic reaction, and the H2SO4-anthrone method having poorer stability. ConclusionThe H2SO4-minophenol method is the relatively ideal method in determination of polysaccaride content.
       Key words：Determination of polysaccaride content;  H2SO4-minophenol method;  H2SO4-anthrone method
       
       研究表明许多中药中的多糖类成分具有多种药理活性，如香菇多糖、灵芝多糖、猪苓多糖等具有抗肿瘤的作用，黄芪多糖和人参多糖等具有增强免疫的作用，因此,多糖的研究已引起国内外医药界的重视。多糖通常是由D葡萄糖，D半乳糖，L阿拉伯糖，L鼠李糖等聚合而成，由于糖类在强无机酸中为特有的脱水反应生成醛类，它们和各种酚类缩合产生特有的有色物质，因此常用硫酸苯酚法和硫酸蒽酮法作为多糖的含量测定方法，我们在实验中发现不同的多糖和单糖显色反应后显示出不同的最大吸收峰，硫酸苯酚法较为稳定，为较为理想的多糖含量测定方法，硫酸蒽酮法稳定性较差，两种方法比较如下。
       1  器材
       1.1   仪器与试剂UV265FW（岛津）分光光度计，硫酸、苯酚、蒽酮等均为分析纯，重蒸馏水、D葡萄糖、D半乳糖、L鼠李糖为对照品。
       1.2   对照品溶液的配制称取单糖对照品约20 mg，精密称定，于50 ml量瓶中，加蒸馏水溶解至刻度，摇匀，浓度为0.4  mg/ml，吸出5 ml于25 ml容量瓶中，加重蒸馏水至刻度，摇匀，浓度为80 μg/ml，作为对照品溶液。
       2  方法与结果
       2.1   硫酸苯酚法［1］通过正交实验确定最佳的显色反应条件为：吸取对照品溶液(80 μg/ml)1 ml于10 ml容量瓶中，加入5%苯酚试液2 ml摇匀，缓慢加入7 ml硫酸，摇匀，置沸水浴中15 min，取出，放入冷水中冷却至室温，稳定性实验表明在1 h内非常稳定，但不同的单糖显色反应后的最大吸收波长有差异，D葡萄糖、D半乳糖在（490±1）nm处有最大吸收峰，见图1～2，L鼠李糖在（480±1）nm处有最大吸收峰，见图3。不同多糖由于单糖的组成不同，最大吸收峰也有不同，含量测定时应根据其最大吸收峰的位置选择不同的单糖作为对照品。
       2.2   硫酸蒽酮法［2］参考文献方法，称取蒽酮30 mg ，加硫酸15 ml配成蒽酮试液，吸取蒸馏水1 ml，对照品1 ml(0.4 mg/ml)，加蒽酮试液4 ml，迅速放入冰水中，操作完成后，同时振摇混匀，置沸水中，煮沸，保持沸腾10 min，取出，放入冷水中冷却，放置10 min，绘制吸收曲线，见图4。重复上述操作，加热20 min和不加热，分别绘制吸收曲线，见图5～6，不加热时最大吸收峰为620.6 nm，加热10 min后峰形变化较大最大吸收峰移至571.8 nm，加热20 min时，最大吸收峰移至502 nm，并且稳定性较差。
       图1  硫酸苯酚法D葡萄糖吸收曲线（略）   
       图2  硫酸苯酚法D－半乳糖吸收曲线（略）
         
       图3  硫酸苯酚法L－鼠李糖吸收曲线（略）    
       图4  硫酸蒽酮法加热10 min吸收曲线（略）
        
       图5  硫酸蒽酮法加热20 min 吸收曲线（略）   
       图6  硫酸蒽酮法不加热吸收曲线（略）
               
       3  小结
       
       以上结果表明，硫酸苯酚法不同单糖显色后产生较好吸收峰，稳定性也很好，通过多次测试表明，吸收度在0.2～0.8A之间线性关系非常好，但不同时间不同操作人员操作时所测数据有差异，建议在使用硫酸苯酚法测定多糖含量时，需同时用对照品作对照，并结合标准曲线参数计算多糖含量，避免直接由标准曲线读数，使得不同时间所测数据产生较大差异。
       
       硫酸蒽酮法稳定性较差，线性关系不理想，重现性、稳定性所测数据差异较大，并且蒽酮试液稳定性也较差，需临时配制，特别是加热后最大吸收峰偏移较大，建议在进行多糖含量测定时不宜采用此法。
       【参考文献】
         　　［1］ 郭 辉，张红旭，曲 枫，等. 红毛五加多糖胶囊中多糖含量测定［J］.时珍国医国药，2004,15(11)：735.
       
       ［2］ 黄东萍，文东旭，林文翰.天芎注射液中多糖的含量测定［J］.华西药学杂志，2005,20(2)：167.