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       【摘要】 
       目的观察五冬胶囊对实验性肝损伤的保护作用。方法 以五冬胶囊0.375，0.75，1.5 g·kg-1灌胃，观察该药对免疫性肝损伤小鼠、复合因素致慢性肝损伤大鼠肝脏功能和结构的影响。结果五冬胶囊显著降低免疫性肝损伤小鼠血清谷丙转氨酶活性(ALT)及复合因素致慢性肝损伤大鼠血清谷丙转氨酶活性 (ALT) 、碱性磷酸酶活性(ALP)、总胆红素含量(T-BiL)；显著增加复合因素致慢性肝损伤大鼠血清总蛋白(TP)、白蛋白含量(ALB)；明显减轻肝脏病理组织学损伤。结论五冬胶囊对实验性肝损伤小鼠、大鼠具有明显的保护作用。
       【关键词】  五冬胶囊； 实验性肝损伤； 保护作用
       Protective Action of Wudong Capsules on Hepatic Injury
       WU Yupeng，FENG Mali，NIU Yanyan，JIA Lili， LI Peiyi
       (Shanxi Provincial Institute of Traditional Chinese Medicine, Taiyuan 030012)
       Abstract：ObjectiveTo observe the protective action of Wudong Capsules on hepatic injury. MethodsPour animals stomach with Wudong Capsules 0.375，0.75，1.5 g/kg，then observe the drug effect on the immune hepatic injury mouse,and the rat′s liver function and structure which had chronic hepatic injury  by compound factors. ResultsWudong Capsules prominently decreased ALT of the immune hepatic injury mouse,and distinctly decreased ALT,ALP,T-BIL and increased TP and ALB of the rats having chronic hepatic injury by compound factors; and obviously released the hurt of the hepatic histopathology. ConclusionWudong Capsules has protective effect on hepatic injury.
       Key words：Wudong Capsules;  Testing hepatic injury;  Protective action
       
       五冬胶囊由五味子、冬虫夏草等药味组成，具有补肾益肝、清热利湿之功效，用于急、慢性肝炎、黄疸、肝硬化属肝肾不足、湿热滞留者，疗效显著。笔者根据其功能主治进行了保肝的药理学实验研究，为该制剂的有效性提供理论依据。
       1  材料与方法
       1.1  材料
       1.1.1  药物五冬胶囊，山西省中医药研究院制剂中心提供，批号041012，每粒装0.25 g。用时以蒸馏水配制成1.875%，3.75%，7.5%的混悬液；联苯双酯滴丸，北京协和药厂，批号03010105，每丸重1.5 mg，用时以蒸馏水配成37.5 mg/100 ml的混悬液。
       1.1.2  试剂四氯化碳，北京化工厂，批号 200202702，用时以植物油配制成 40%,20%的溶液；无水乙醇，北京化工厂，批号20040802。其余试剂均为化学纯。
       1.1.3  脂多糖Sigma公司产品, 用时以生理盐水配成37.5 μg/ml的溶液。
       1.1.4  卡介苗佐剂卫生部北京生物制品研究所，批号20030709，60 mg/支，活菌数1.9×109/mg。
       1.1.5  0.9% 氯化钠注射液（生理盐水）山东华鲁制药有限公司，批号03050412。
       1.1.6  动物小鼠，昆明种，雌雄各半，体重（22±2）g，山西省中医药研究院实验动物室提供，符合GB14922-94 II 级标准，合格证号：晋动（证）字第A00-001号；大鼠：Wistar，雌雄各半，体重（220±20）g， 山西省中医药研究院实验动物室提供，符合GB14922-94 II 级标准，合格证号：晋动（证）字第A00-002号。
       1.1.7  仪器离心机，LXJ-Ⅱ，上海医用分析仪器厂；电热恒温水温箱，HH-W21，上海医用恒温设备厂；电子天平，BP310P，德国赛多利斯；紫外可见光分光光度计，UV3000，日本岛津。
       1.1.8  统计学处理方法计量资料以±s表示的t检验。计数资料采用秩和检验。
       1.2  方法
       1.2.1  对小鼠卡介苗加脂多糖免疫性肝损伤的影响［1］取小鼠，除空白对照组外，其余各小鼠均尾静脉注射卡介苗5×106，注射后，随机分为模型对照、联苯双酯（7.5 mg·kg-1·d-1）、五冬胶囊低剂量(0.375 g·kg-1·d -1)、五冬胶囊中剂量(0.75 g·kg-1·d-1)、五冬胶囊高剂量(1.5 g·kg-1·d-1)5个组。灌胃给药，1次/d，连续11 d，灌胃量20 ml·kg-1，空白对照及模型对照组灌胃等量蒸馏水，第11天除空白对照组外，其余各组小鼠均尾静脉注射脂多糖7.5μg/只，注射后10 h，摘眼球取血，分离血清，赖（Reitman-Frankel）氏法测定血清谷丙转氨酶(ALT)，酶活性用卡门氏单位表示。结果见表1。
       表1  五冬胶囊对免疫性肝损伤小鼠血清谷丙转氨酶的影响（略）
       
       与模型对照组比较，1）P<0.05，2）P<0.01，3） P<0.001；n=12
       1.2.2  对复合因素致大鼠慢性肝损伤的影响［2］取大鼠随机分为6组：空白对照、模型对照、联苯双酯（7.5 mg·kg-1·d-1）、五冬胶囊低剂量(0.375 g·kg-1·d-1) 、五冬胶囊中剂量(0.75 g·kg-1·d-1) 、五冬胶囊高剂量(1.5 g·kg-1·d-1) 。实验第1天，称体重，除空白对照组外，其余各组大鼠均皮下注射40%CCl4植物油溶液0.5 ml/100 g体重，以后灌胃20%CCl4植物油溶液0.3 ml/100 g体重，2次/周，共4周，空白对照组同法给予植物油。除空白对照组外，其余各组大鼠以79.5%单纯玉米粉加20%猪油、0.5%胆固醇成混合饲料，另外10%乙醇为饮料饲养动物10 d后，再以普通饲料及水饲养动物至28 d。实验各组灌胃给药，1次/d，连续28 d，灌胃量20 ml/kg，空白对照及模型对照组灌胃等量蒸馏水。实验开始观察动物毛色、进食情况及体重；于杀检前1 d称体重后，乌拉坦麻醉，下腔静脉取血，分离血清，赖（Reitman-Frankel）氏法测定血清谷丙转氨酶（ALT）、微量快速测定法测定碱性磷酸酶（ALP）、改良melloy-Evelyn法测定总胆红素（T-BIL），双缩脲法测定血清总蛋白(TP)，溴甲酚绿法测定白蛋白(ALB)，结果见表2～3；摘取肝脏，10%甲醛固定，石蜡包埋，切片，HE染色，镜下病理组织学观察。
       表2  五冬胶囊对慢性肝损伤大鼠血清谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、总胆红素的影响（略）
       与模型对照组比较,1）P<0.05，2）P<0.01，3）P<0.001；n=10
       表3  五冬胶囊对慢性肝损伤大鼠血清总蛋白、白蛋白的影响（略）
       与模型对照组比较,1）P<0.05，2）P<0.01，3）P<0.001；n=10
       2  结果
       2.1  五冬胶囊对小鼠免疫性肝损伤的影响  表1结果可见，免疫性肝损伤模型对照组小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)显著高于空白对照组（P<0.001）；中、高剂量五冬胶囊免疫性肝损伤小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)显著低于模型对照组(P<0.05，P<0.01)。表明五冬胶囊对卡介苗加脂多糖引起的小鼠免疫性肝损伤肝功能有明显的保护作用。
       2.2  五冬胶囊对复合因素致大鼠慢性肝损伤一般状况的影响实验第3天模型对照组大鼠逐渐出现毛松乱无光泽，神态萎靡，食欲不振，体重减轻等状况，五冬胶囊各剂量组大鼠状况明显好于模型对照组。28 d后模型对照组大鼠体重显著低于空白对照组，五冬胶囊各剂量组大鼠体重显著高于模型对照组。
       2.3  五冬胶囊对复合因素致大鼠慢性肝损伤血清生化指标的影响表2～3结果可见，模型对照组血清谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶（ALP）、总胆红素（T-BiL）显著高于空白对照组（P<0.001）； 血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）显著低于空白对照组（P<0.001）。低、中、高剂量组五冬胶囊血清谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素均（T-BiL）显著低于模型对照组（P<0.05，P<0.01，P<0.001）；中、高剂量五冬胶囊血清碱性磷酸酶（ALP）显著低于模型对照组（P<0.01）；低、中、高剂量五冬胶囊血清总蛋白（TP）显著高于模型对照组（P<0.05，P<0.001）；中、高剂量五冬胶囊血清白蛋白（ALB）显著高于模型对照组（P<0.01）。表明五冬胶囊对复合因素造成慢性肝损伤大鼠肝功能有明显的保护作用。
       2.4  五冬胶囊对复合因素致大鼠慢性肝损伤病理组织学观察 镜下可见，空白对照组肝小叶结构清楚，肝细胞轻度混浊肿胀，未见肝细胞脂肪变性、坏死、炎症性改变、硬化性改变及其它异常改变。模型对照组肝细胞坏死、新生、脂肪变性明显，大量增生纤维结缔组织将新生的肝细胞及残存的肝细胞分隔成大小不等的假小叶。低、中、高剂量组五冬胶囊肝细胞脂肪变性、坏死、新生较模型对照组明显减少；纤维结缔组织增生及假小叶生成少见，部分分隔的纤维较纤细。将肝纤维化程度分级：- 正常肝组织；+  仅汇管区有少量纤维，向肝小叶内呈星芒状放散；++ 增生的纤维分割肝小叶，但未形成假小叶；+++ 假小叶形成。经秩和检验，模型对照组肝纤维增生程度显著高于空白对照组（P<0.001）；低、中、高剂量五冬胶囊肝纤维增生程度较模型对照组明显减轻（P<0.05；P<0.01），结果见表4。表明五冬胶囊明显减轻复合因素致大鼠慢性肝损伤病理改变。
       表4  五冬胶囊对肝硬化程度的影响（略）
       3  讨论
       
       现代医学认为免疫功能紊乱在肝损伤过程中起重要作用，肝炎与免疫功能密切相关［3］，五冬胶囊明显降低卡介苗加脂多糖引起免疫性肝损伤小鼠血清谷丙转氨酶活性与该方中冬虫夏草［4］具有提高免疫功能作用密切相关。CCl4是复合因素中致大鼠慢性肝损伤加速肝硬化的形成因素［2］，五味子对大鼠慢性肝损伤的保护作用研究的文献报道较为详细［4］。五冬胶囊明显改善实验性肝损伤大、小鼠肝脏功能，增加血清蛋白含量，减轻肝脏病理组织学损伤，对急、慢性肝损伤均有明显的保护作用，推测其通过不同途径保护肝细胞，减轻炎症反应，降低转氨酶活性，减轻肝细胞病理组织学改变，促进蛋白合成；五冬胶囊明显减轻肝纤维化病变程度，推测其可减少胶原纤维合成、沉积及降解，抑制胶原纤维增生，从而减轻肝纤维化。因五冬胶囊为复方制剂，成分复杂，保肝机理还有待于进一步研究。实验结果为五冬胶囊临床用于急、慢性肝炎、黄疸、肝硬化的治疗提供药理学实验研究资料。                 
       【参考文献】
         　　［1］ 斯拉甫，阿不都热依木，吉力娜，等.新疆一枝蒿提取物保肝作用的实验研究［J］.中国中西医结合杂志，2002，22（2）：126.
       
       ［2］ 李仪奎.中药药理实验方法学［M］.上海：上海科技出版社，1991：462.
       
       ［3］ 熊筱鹃，肖小华，徐丽英.乌索酸对小鼠急性免疫性肝损伤的影响［J］.中成药，2005，27（11）：1352.
       
       ［4］ 郑虎占，董泽宏，佘 靖.中药现代研究与应用［M］.北京：学苑出版社，1997:958，483.