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       【关键词】  川牛膝；,,炮制；,,正交实验
       摘要：目的：优选川牛膝的盐炙工艺。方法：采用正交设计L9(34)，以水溶性成分及杯苋甾酮的含量为考察指标。结果：最佳盐炙工艺为饮片加2%饮片量盐的盐水润透，150℃炒制15 min。结论：优选得到的工艺是合理的。
       关键词：川牛膝；  炮制；  正交实验
       Optimization of Processing Technology of Cyathula officinalis by Orthogonal Experimental Design
       LI WanShou, CHEN Xing, LI Bin
       (Sichuan Institute of Chinese Materia Medica, Chengdu, Sichuan 610041, China)
       Abstract:Objective:To optimize the technology of processing Radix Cyathulae. Methods:Use orthogonal design L9(34)  to screen out the best extraction  condition with the percentages of water-soluble components and cyasterone as the content index.Results:The optimal procedure was set as follows: Radix Cyathulae added with 2% salt and mixed homogeneously, at 150℃ for 15 min.Conclusion:The technology is reasonable.
       Key words:Radix Cyathulae;  Processing;  Orthogonal  designs
   
　　川牛膝为苋科植物川牛膝Cyathula officinalis Kuan的干燥根，是常用中药，具有逐瘀通经、通利关节、利尿通淋的功能；用于经闭症瘕,胞衣不下，关节痹痛，足痿筋挛，尿血血淋，跌打损伤［1］。川牛膝的炮制法，唐代有酒浸焙干用的方法，宋代有酒浸蒸等方法，元代有酒洗的方法，明、清时代增加了茶水浸、童便酒浸、与何首乌同蒸等炮制方法［2，3］。现代临床多沿用生川牛膝、酒川牛膝和盐川牛膝等。川牛膝的炮制作用，生用以逐瘀通经为主，应用于经闭、痛经及跌打伤痛等；酒炙后增强逐瘀、通利关节作用，应用于血瘀腹痛及风湿痹痛等；盐炙则增强利尿通淋作用，应用于淋病尿血及小便不利等［2～5］。有关川牛膝炮制工艺的研究，左中丕［5］在文献中提到了火候、辅料及其用量；程敬伦等报道，用《中国药典》法测定四种浸润方法加工的川牛膝等八种中药饮片的水溶性浸出物、芍药苷、苦参碱、鞣质、挥发油的含量，结果表明：减压湿浸法效果最好，但不适用于含挥发油的中药材；加压冷浸和减压冷浸均比传统浸润好，且适用于各种需浸润软化的中药材［2］。但以上川牛膝的炮制方法均未对火候等一些相关参数作详细量化，不能保证工艺的可重复性和饮片质量的稳定性，当温度过高时易造成饮片焦化，温度太低时，则饮片水分含量会较高，饮片容易发霉变质。本工艺采用正交实验，以水溶性成分及杯苋甾酮［6］的含量为指标，对盐炙川牛膝的加盐量、炒制时间和炒制温度这三个影响炮制效果的因素进行分析，优选出盐炙川牛膝的最佳炮制工艺, 该工艺对火候进行了量化，使得操作简便、可行，质量更可控，进而保证临床疗效，并为川牛膝饮片的规模化、产业化、自动化和现代化文明生产提供了参考依据。
       　　1  仪器、试药和药材
       1.1  仪器LC10ATvp高效液相色谱仪(日本岛津)，SPD10AVP紫外检测器，CR6A数据处理机， 168型不锈钢电暖锅（上海万欣电器有限公司），正德牌远红外可控调温电炉（功率452000W）。
       1.2  试药杯苋甾酮对照品（自制，批号 144II，含量99.26%）［7］；乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
       1.3  药材由本所生药研究室方清茂副研究员购于四川省天全县药材公司（批号 20040301），经鉴定确认为中国药典规定的川牛膝Cyathula officinalis Kuan的干燥根。将川牛膝经过净制、切制得到3mm厚的饮片。
       　　2  实验方法
       2.1  盐炙川牛膝样品的制备　 按正交实验设计安排川牛膝炮制实验(表1～2)，将川牛膝饮片分别加入实验设定的不同盐量（预先用适量水溶解，再均匀喷洒），充分闷润至盐水被吸尽，然后置于设定不同温度的电暖锅中，不停翻炒，直至设定的时间，立即取出，摊放至凉，装袋备用。
       表1  正交实验因素及水平（略） 
       2.2  水溶性成分含量 将9种盐炙川牛膝样品各精密称取20 g，置500 ml烧杯内，加水（首次180 ml浸泡20 min，第2次160 ml），置远红外电炉上，加热至沸，每次煎沸30 min，共2次。滤过，药渣用50 ml水洗涤，合并滤液，水溶浓缩，定容至100 ml；精密吸取20 ml，入精密称重蒸发皿中水溶浓缩至干，再置恒温箱内（±80℃）烘干至恒重，取出放凉，迅速称重并计算其水溶性成分的百分含量。结果见表2。
       2.3  杯苋甾酮的含量测定
       2.3.1  色谱条件色谱柱 TSKGEL  ODS100S柱4.6 mm×150 mm，5 μm(日本TOSOH公司)；柱温35℃；流动相 乙腈水(18∶82)，流速1.0 ml・min1；检测波长243 nm；检测灵敏度0.010 0Aufs；进样量 5 μl。
       2.3.2   样品测定 按文献［8］方法，取2.2项下定容的样品1 ml ，用流动相稀释至10 ml，进样5μl，测定，计算。结果见表2。
       2.4  实验结果的分析采用综合加权评分法，水溶性成分以含量较高为好，把第6号实验定为100分，宜用公式y1= 100Y1÷55.1；杯苋甾酮以含量较高为好，把第5号实验定为100分，宜用公式y2= 100Y2÷64.2；根据本例研究目的，水溶性成分含量（Y1）与杯苋甾酮含量（Y2）权重系数宜取0.5和0.5，对两个单项分数加权求和，用式Y=0.5 y1＋0.5 y2=0.91Y1+0.78Y2求出各号实验的综合评分，结果见表2。
       表2  实验安排及结果（略） 
       　　3  结果与分析
       3.1  对表中数据作方差分析，见表3。
       表3  方差分析表（略） 
       结果表明：影响质量的关键因素是炒制温度A，其较佳工艺条件为A2，即150 ℃；次关键因素是炒制时间B，其较佳工艺条件为B3，即炒制15　min ；次要因素是加盐量C，其较佳工艺条件为C2，即每100　kg川牛膝加2　kg盐；综合起来，最好方案应为A2 B3 C2；即加2%饮片量盐的盐水润透，150 ℃炒制15　min。
       3.2  应用该工艺进行中试生产，结果表明，饮片加2%倍量盐制成的盐水充分润透后，在炒药机中预热至150℃后续炒约15 min，立即倾出，所得炮制品符合相关规定。
       　　参考文献：
       ［1］  国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京:化学工业出版社，2000：2828.
       ［2］  金世元，王  琦.中药饮片炮制研究与临床应用［M］.北京:化学工业出版社，现代生物技术与医药科技出版中心，2004：96100.
       ［3］  叶定江，张世臣.中药炮制学［M］.北京：人民卫生出版社，1999：222224.
       ［4］  原思通.医用中药饮片学［M］.北京：人民卫生出版社，2001：331332.
       ［5］  左中丕.中药鉴别炮制应用手册［M］.北京：军事医学科学出版社，2003：552555.
       ［6］  黎万寿，陈  幸，王晓阳，等.川牛膝的品质研究［J］.现代中药研究与实践，2003，17(4)：1820.
       ［7］  陈  幸，黎万寿，朱久武，等.RPHPLC法测定川牛膝中杯苋甾酮的含量［J］.药物分析杂志，2000，20(4)：234237.
       ［8］  陈  幸，黎万寿，崔红梅.高效液相色谱法测定独活寄生合剂中杯苋甾酮含量［J］.中国医院药学杂志，2003，23(8)：451452.
       基金项目：国家863项目(No.2001BA701A55-46)
       (四川省中药研究所，四川 成都  610041)