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       【摘要】 
       目的建立艾纳香中不同部位花椒油素的含量测定方法。方法以花椒油素为对照品， ZORBAX XDBC18(4.6 mm×150 mm,5 μm)色谱柱，甲醇水(60∶40)为流动相，流速0.8 ml/min，柱温30℃，检测波长290 nm。结果花椒油素在0.001 ～0.04mg/ ml范围内呈良好线性关系，回归方程Y=126 261X+27.469，（r=0.999 5），加样平均回收率为98.11%，RSD为1.06%。结论该方法简便、准确、可靠，适用于艾纳香中花椒油素含量的测定。
       【关键词】  艾纳香 花椒油素 反相高效液相色谱法
       Abstract：ObjectiveTo establish an RPHPLC method to determine xanthoxylin from different section of Blumea balsanifera DC.MethodsXanthoxylin was used as reference. Chromatographic assay was performed on a ZORBAX XDBC18(4.6 mm×150 mm,5 μm) column. The mobile phase consisted of methanol-water(60∶40) , the flow rate was 0.8 ml/min, the column temperature was 30℃ and the detection wavelength was set at 290nm. ResultsThe method displayed good linearity within 0.001 mg/ml to 0.04 mg/ ml , Y=126 261X+27.469（r=0.999 5）. The average recovery was 98.11% and RSD was 1.06%. ConclusionThis method is simple, accurate and reproducible for the determination of xanthoxylin in Blumea balsanifera DC.
       Key words：Blumea balsanifera DC.;  Xanthoxylin;  RPHPLC
       
       艾纳香Blumea balsanifera DC.又称大风艾、大艾、冰片艾等，属菊科多年生木质草本植物，为壮族民间草药，主产于广西西南部和云南东南部及贵州、广东等省。艾纳香叶和嫩枝及根均可药用，性味温辛，具有清热利尿、祛风消肿、温中活血、消炎镇痛、补虚壮阳之功效。可用于治疗寒湿泻痢、腹痛肠鸣、跌打刀伤和高血压病等症［1］。对其化学成分的研究结果表明，艾纳香植物中含有大量的花椒油素。现有的药理研究结果表明花椒油素体内外给药对胶原和PAF，ADP，AA和凝血酶诱导的血小板聚集均有明显的抑制作用及量效关系［2，3］。同时，花椒油素作为间苯三酚的衍生物，各种资料显示，很多间苯三酚衍生物都有生理活性，引起了国内外药学及化学工作者的关注，所以了解艾纳香植物中花椒油素的含量及分布对开发艾纳香植物资源具有较好的实用价值。有人采用反相高效液相法对较纯的花椒油素进行了含量测定［4］，鉴于对含量低，成分相对复杂的植物资源中花椒油素的含量测定未见文献报道，本实验探索出一套反相高效液相色谱法测定花椒油素在艾纳香中叶、小枝条、茎中的含量。该方法简便、可靠、准确，结果可作为艾纳香植物中花椒油素的检测方法。
       1  药品与仪器
       1.1   试剂与药材  花椒油素对照品为本实验室自制，TLC的Rf，IR，UV，NMR值均与文献值一致［5］，液相色谱峰为单峰，纯度达到99.5%。所测样品采自广西天峨县，经广西植物研究所分类室韦发南研究员鉴定为菊科植物艾纳香(Blumea balsanifera DC．)的干燥地上部分。色谱纯甲醇（美国TEDIA公司）。重蒸蒸馏水为自制，其他试剂均为AR级。
       1.2  仪器 Agilent1100 分析型高效液相色谱仪，包括二极管阵列检测器、四元梯度泵、在线真空脱气机、7725i手动进样器、HP化学工作站（美国Agilent公司）。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件色谱柱为ZORBAX XDB-C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；柱温30℃；流动相为甲醇水（体积比60∶40）；流速0.8 ml/min；检测波长290 nm；进样量10 μl。定量方法为外标法。在上述条件下花椒油素色谱峰与其它组分达到了良好分离。色谱图见图1。
       图1  花椒油素对照品及样品HPLC图（略）
       2.2  对照品溶液的制备  精密称取花椒油素20 mg，置于100 ml容量瓶中，用甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，此溶液A质量浓度为0.2 mg/ml。准确吸取溶液A 20 ml，置于100 ml容量瓶中，用甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，此溶液B质量浓度为0.04 mg/ml。分别准确吸取溶液B，配成质量浓度分别为0.001，0.004，0.012，0.02，0.04 mg/ml甲醇溶液，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，作为对照品溶液备用。
       2.3  供试品溶液的制备　精密称取样品1 g(过40目筛)于100 ml锥形瓶，加入甲醇100，80 ml超声提取2次（2 h×1 h），用少许甲醇冲洗残渣，过滤，合并滤液加甲醇定容置250 ml，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，滤液作为供试品溶液备用。
       2.4  线性关系的考察  分别吸取花椒油素对照品溶液，注入液相色谱仪中（用1.0 μ1定量环定量），按上述色谱条件测定，记录峰面积和进样浓度，以进样浓度(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：
       
       Y=126 261X+27.469，r=0.999 5
       
       结果表明花椒油素在进样量浓度在0.001 ～0.04 mg/ ml范围内呈良好线性关系。
       2.5  精密度实验  吸取花椒油素对照品溶液注入液相色谱仪测定(用10 μl定量环定量)，重复进样5次，按选定的色谱条件测定峰面积，结果花椒油素峰面积值的RSD为0.39%(n=5)，说明仪器精密度良好。
       2.6  重复性实验  精密称取同一样品5份，按2.3项下方法制备，进行5次平行测定，计算艾纳香的含量，结果RSD为2.36%(n=5)。说明本法重复性较好。
       2.7  加样回收率实验精密称取已知含量的同一样品5份，准确加入花椒油素对照品2 mg，按2.3项下方法制备，HPLC分析，进样量均为10 μl，计算平均回收率。结果花椒油素的平均回收率为98.11%，RSD为1.06%(n=5)。结果见表1。
       表1  艾纳香样品加样回收率实验（略）
       2.8  样品的测定  精密称取不同部位艾纳香药材样品1 g(过40目)，按2.3项下方法制备，进样量均为10 μl，外标法定量，计算含量，取平均含量。测定结果见表2。
       表2  不同部位艾纳香中花椒油素的含量（略）
       3  讨论
          
       通过二极管阵列检测器在190～950 nm对花椒油素对照品进行光谱波谱图的扫描，扫描结果在210 nm及290 nm波长附近有较强吸收，但在靠近210 nm波长附近溶剂易产生干扰吸收，所以本检测选用290 nm作为检测波长。
       
       在供试品样品的制备时，先后采用了甲醇回流提取及甲醇超声提取制备供试品，并进行含量检测比较，结果表明两者相差较小，因此本实验选用操作简便、省时的甲醇超声提取制备供试品溶液。
       
       本实验探索出的RP-HPLC法检测花椒油素在艾纳香不同部位含量的方法简便易行，稳定性好，准确度高，适于对艾纳香及其它含有花椒油素植物中花椒油素的含量检测。从表2的结果来看，艾纳香中不同部位叶、小枝条、茎中花椒油素的含量有比较大的差别，其中叶中花椒油素的含量最高达0.361 8%，小枝条与茎的含量匀较低仅为叶中含量的十分之一，通过对艾纳香叶、小枝条、茎中花椒油素的检测，结果可为充分开发与利用艾纳香奠定基础。
       【参考文献】
         　　［1］ 江苏新医学院.中药大辞典［M］. 上海：上海科学技术出版社, 1997：562.
       
       ［2］ 金云海，单春文，程远远，等. 花椒油素对肺血栓及6-酮-前列腺素F1a和血栓B2的影响［J］. 中药新药与临床药理, 2000, 11(3)：88.
       
       ［3］ 金云海，程远远.花椒油素对血小板聚集的抑制作用［J］. 中药新药与临床药理, 2000, 11(6)：35.
       
       ［4］ 朱咪华, 平伟君. RP-HPLC法定量分析花椒油素［J］. 精细化工中间体, 2001,31(2)：56.
       
       ［5］ 郑庆安，张灿奎，向 瑛，等. 川陕花椒化学成分研究［J］. 中草药, 2001,32(5)：399.