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       【摘要】 
       目的探讨山楂叶总黄酮（TFHL）对大鼠和小鼠的抗氧化作用。方法分别灌胃给予自然衰老小鼠和D半乳糖致衰老大鼠TFHL，采用生化方法测定小鼠和大鼠全血的超氧化歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）活性，并检测心、脑组织中脂质褐质（LF）、丙二醛（MDA）和SOD含量。结果给予TFHL的衰老小鼠和大鼠心、脑组织中SOD和全血中SOD和GSHPx活力显著提高，而组织中MDA和LF含量则明显下降。结论TFLH能提高组织中抗氧化酶的活性，抑制自由基损伤，防止脂质过氧化，具有明显的抗氧化作用。
       【关键词】  山楂叶总黄酮 抗氧化 超氧化物歧化酶 氧自由基
       Abstract:ObjectiveTo study the anti-aging effect of total flavone of hawthorn leaf (TFHL)in mice and in rats.MethodsThe old mice and aged rats induced by Dgalactose were treated with TFHL  through oral gavage.The activities of superoxide dismutase(SOD) and glutathione peroxidase (GSHPx) in blood, the contents of lipofuscin (LF),malodndaldegyde (MDA) and SOD in brain and heart were determined by biochemical methods.ResultsTFHL could significantly improve the activities of SOD in brain and heart by biochemical methods.ConclusionTFHL has obvious anti-aging effects.The mechanisms maybe associated with increasing the activities of antioxidation enzymes and preventing lipid peroxidation in tissues.
       Key words:Flavone;  Hawthorn leaf;  Antiaging;  Superoxide dismutase;  Oxygen free radical
       
       山楂叶总黄酮（total flavone of hawthorn leaf,TFHL）是从山楂叶中提取的总黄酮组分，含有多种黄酮苷、荭草素、葡荆牡黄酮等，具有调节血脂，抗心肌和脑缺血，能防止血管内皮细胞氧化的作用［1］。近年来，以TFHL作为主要成分的药物——益心酮片和注射液已用于临床防治冠心病、心绞痛、高脂血症等均取得一定疗效，由此推测TFHL应该具有较强的抗氧化和抗衰老的作用，但类似的研究少见报道。本实验采用灌胃给予TFHL探讨其对小鼠和D半乳糖致衰老大鼠组织的抗衰老的作用，以期为THFL 在抗氧化和延缓衰老的应用提供依据。
       1  材料
       1.1  药品、试剂与仪器益心酮片购自太极集团浙江东方制药有限公司，0.1 g/片，每片含TFHL32 mg。D半乳糖和硫酸奎宁为上海试剂二厂生产，其余试剂均采用国产分析纯。超氧化歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）及GSHPx(谷胱甘肽过氧化物酶)试剂盒购自南京建成生物工程研究所。UV2401PC型紫外可见分光光度计，RF5301PC荧光分光光度计均为日本SHMADZU公司产品。
       1.2  动物昆明种小鼠，7月龄30只，体重31～34 g，雌雄各半。雄性Wistar大鼠40只，体重180～210 g，均购自湖北省医学科学实验动物中心。
       2  方法
       2.1  实验分组昆明种小鼠按性别随机分为3组，每组10只。即：生理盐水对照组和两个剂量的益心酮0.1 g/kg或0.2 g/kg（含TFHL32，64 mg/kg）组，另设1月龄幼年生理盐水对照组小鼠10只，体重14～15 g。小鼠灌胃给药或生理盐水。灌胃容积为0.5 ml/只，1次/d，连续36 d。大鼠随机分为正常对照组、衰老模型组和两个TFHL 剂量组，每组10只。模型组每日皮下注射D半乳糖48 mg/kg，同时生理盐水灌胃10 ml/kg，TFHL剂量组，每组10只。模型组每日皮下注射D半乳糖48 mg/kg，同时生理盐水灌胃10 ml/kg，TFHL组皮下注射D半乳糖并分别灌给益心酮0.1 g/kg或0.2 g/kg，连续40 d。
       
       各组实验动物于末次给药后12 h称重，取血，并剖取心脏、脑皮层组织，用预冷的4℃生理盐水冲洗表面残血，滤纸吸干水分，称重并制备组织匀浆，-80℃冻存待测。
       2.2  全血GSH-Px活性及组织SOD活性，MDA含量的测定按DTNB直接法测定GSH-Px活性，SOD活性，MDA含量按试剂盒说明操作。
       2.3  组织脂褐质（Lipofuscin ,LF）含量的测定按Sohal方法，取组织0.2 g用氯仿-甲醇（2∶1）混合液制成匀浆，40℃水浴5 min，3 000 r/min，离心10 min，取氯仿层测定荧光强度。
       2.4  统计学分析实验数据以±s表示，以SigmaPlot8.0，SPSS11.0软件作统计分析，组间差异比较采用t检验，P＜0.05为显著性标准。
       3  结果
       3.1  TFHL对小鼠全血GSH-Px和SOD活性的作用结果见表1。7月龄生理盐水对照组小鼠全血中GSH-Px和SOD活性显著低于1月龄小鼠对照组（P＜0.01）。灌胃给予7月龄小鼠TFHL后，小鼠血液中GSH-Px和SOD活性明显高于同龄小鼠对照组（GSH-Px：P＜0.05，P＜0.01；SOD：P＜0.05，P＜0.01）。
       3.2  TFHL对小鼠组织SOD，MDA及LF含量的作用见表1。7月龄生理盐水对照组小鼠心脏、脑组织中的MDA和LF含量均高于1月龄对照组（均P＜0.01），而组织中SOD活性亦明显下降（均P＜0.01）。给予TFHL（32 mg/kg）后小鼠脑组织中LF和MDA显著下降（均P＜0.05），而脑组织中SOD的活性显著升高（P＜0.05）。64 mg/kg剂量组较7月龄对照组小鼠心脏、脑组织中MDA和LF含量小鼠呈显著下降（MDA：P＜0.01，P＜0.05；LF：P＜0.05，P＜0.05），而心脏、脑组织中SOD的活性明显增高（P＜0.01，P＜0.05）。
       表1  TFHL对小鼠全血GSH-Px和SOD活性，心脏、脑组织和LF含量的影响（略）
       TFHL①组，32 mg/kg,TFHL组，64 mg/kg；与7月龄对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；n=8
       3.3  TFHL对大鼠全血SOD和GSH-Px活性的作用见表2。给予TFHL（32，64 mg/kg）后大鼠心肌组织中的MDA和LF含量较模型组显著降低（MDA：P＜0.05，P＜0.01；LF：P＜0.05，P＜0.01），大鼠脑组织MDA和LF含量亦较模型组显著降低（MDA：P＜0.05，P＜0.01；LF：P＜0.05，P＜0.01），大鼠心脏和脑组织SOD活性较模型组显著提高（均P＜0.01）。
       表2  TFHL对大鼠全血GSH-Px和SOD活性，心脏、脑组织中SOD，MDA和LF含量的影响（略）
       与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；n=8
       3.4  TFHL对大鼠全血SOD，MDA及LF含量的作用见表2。给予TFHL（32，64 mg/kg）后大鼠心肌组织中MDA和LF含量较模型组显著降低（MDA：P＜0.05，P＜0.01；LF：P＜0.05，P＜0.01），大鼠脑组织中MDA和LF含量亦较模型组显著降低（MDA：P＜0.05，P＜0.01；LF：P＜0.01，P＜0.01），大鼠心脏和脑组织SOD活性较模型组显著提高（均P＜0.01）。
       4  讨论
       
       氧自由基是机体内氧化代谢的不全产物，主要包括超氧阴离子（O2-），OH-，过氧化氢（H2O2）等。许多心、脑血管疾病的发生、发展与氧自由基损伤密切相关，目前认为，占当前医学研究领域前3位的肿瘤、冠心病和衰老均与自由基引起的膜脂质氧化性员伤和DNA受损有关［2］。因此，有效抑制脂质过氧化和DNA受损已成为生命科学领域的一项重要课题，一直备受国内外学者和临床医生的重视。
       
       近年叶希韵等［3］研究TFHL对大鼠局灶性脑缺血的作用表明，TFHL能增加血清SOD的含量，减少血清MDA水平，而纪影实等［4］的研究则表明TFHL能减轻H2O2诱导的细胞凋亡。由此提示TFHL可能具有很强的抗氧化作用，而本实验结果表明，灌胃给予TFHL后，衰老小鼠和大鼠心、脑组织中SOD和全血中SOD和GSH-Px活力显著提高，而机体的MDA和LF含量则明显下降，提示TFHL可通过提高抗氧化酶的活性，抑制自由基损伤，防止脂质过氧化的作用。
       
       目前国内外已将TFHL为主要成分的益心酮等药物广泛应用于临床。从我国丰富的药用植物资源中寻找安全低毒的新药，是当前新药研究和开发的重要方向和发展趋势。因此，应用现代药学、药理的理论深入研究山楂叶总黄酮抗氧化的抗衰老的药理作用机制，对进一步开发TFHL的临床应用前景提供了实验依据。
       【参考文献】
         　　［1］ 纪影实，李 红，杨世杰，等.山楂叶总黄酮对H2O2诱导PC12细胞凋亡的保护作用［J］.中国药理学通报，2006，22（6）：760.
       
       ［2］ Hahn SM,Sullivan FJ,Deluca AM,Krishna CM,Werstto N,Venzon D.Evaluation of tempol radioprotection in a murine tumor mode［J］.Free Radic Biol Med,1997,22(7):1211.
       
       ［3］ 叶希韵，张 隆，张 静，等.山楂叶总黄酮对乳鼠心肌细胞缺血缺氧损伤的实验研究［J］.中国现代应用药学杂志，2005，22（3）：202.
       
       ［4］ 纪影实，张晓丹，李 红，等.山楂叶总黄酮对脑缺血的保护作用［J］.吉林大学学报（医学版），2005，31（6）：879.