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       【摘要】 
       目的研究余甘子的抗衰老作用及机制。方法用不同浓度的余甘子提取物灌胃和用余甘子含量不同的饲料喂养D-半乳糖所致衰老小鼠，用试剂盒分别测定小鼠血清、心肌和肝中SOD，GSH-px活性以及其中的MDA和LPF含量。结果余甘子能显著提高血清和组织中的超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）活性，显著降低丙二醛（MAD）和脂质素（LPF）含量。结论余甘子具有显著的抗衰老作用。这为余甘子食用和药用价值的开发提供了实验依据。
       【关键词】  余甘子 超氧化物歧化酶 谷胱甘肽过氧化物酶 脂质过氧化物 抗衰老
       Abstract：ObjectiveTo study the antiaging effect and mechanism of Phyllanthus emblica L . MethodsThe aged mice induced by D-galactose were administrated intragastrically with different concentration extracts of Phyllanthus emblica L. and fed with the different dosage fodder containing Phyllanthus emblica L . SOD, GSH-px activities and MDA, LPF contents in serum , heart and liver of the mice were measured by respective reagent boxes.ResultsPhyllanthus emblica L. improved the activities of SOD, GSH-px, and reduced the contents of MDA, LPF significantly. ConclusionPhyllanthus emblica L. has significant antiaging effect.
       Key words：Phyllanthus emblica L. ;  Superoxide dismutase;  Glutathione peroxidase;  Lipid peroxide;  Antiaging effect
       
       余甘子Phyllanthus emblica L. 又名山油柑、油甘子、余甘果等，为大戟科叶下珠属植物余甘子的成熟果实，广泛分布在广东、福建、台湾、贵州、湖南、广西、四川、浙江和云南等省区。余甘子性味甘、酸、涩、凉, 归肺、胃经。其功能与主治为清热凉血, 消食健胃, 生津止咳;用于血热血淤、消化不良、腹胀、咳嗽、喉痛及口干［1］。明《本草纲目》曾记载：“余甘子果，主补益气，久服轻身，延年益寿” 。余甘子营养价值高，具有一定的抗癌防衰老功能，卫生部将余甘子列入首批“既是食品又是药品”的材料名单。本文报道了余甘子对D-半乳糖所致衰老小鼠的抗衰老作用，旨在为余甘子的食用和药用价值的开发提供实验依据。
       1  材料与方法
       1.1  材料
       1.1.1  药材余甘子，采自广东普宁市和潮阳市，将余甘子凉干，取适量余甘子，粉碎后蒸煮，回流2 h，过滤，定容，得余甘子提取液，配成两种浓度：以生药记分别为0.6 g/ml和1.2 g/ml；将余甘子粉碎后，过120目筛，拌于饲料中，配制成25 mg余甘子粉/g饲料和50 mg余甘子粉/g饲料。
       1.1.2  动物昆明种SPF级小鼠60只，雌雄各半，体重为（20±2）g，由广州市白云区穗北实验动物养殖场提供。
       1.1.3  试剂超氧化物歧化酶（SOD），脂质过氧化物（LPO）、脂质素（LPF）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）用南京建成生物工程公司的试剂盒测定，其它试剂均为分析纯。
       1.2  方法
       1.2.1  实验方法［2～4］将小鼠以标准饲料喂养5d后随机分为6组，每组10只，分别是对照组；D-半乳糖衰老模型组；低浓度余甘子提取物灌胃组；高浓度余甘子提取物灌胃组；小剂量余甘子饲料组；大剂量余甘子饲料组。对照组：颈背部皮下注射生理盐水0.2 ml，同时灌服生理盐水0.2 ml，1次/d。
       
       D-半乳糖衰老模型组：每日颈背部皮下注射1% D-半乳糖0.2 ml，同时灌服生理盐水0.2 ml。
       
       低浓度、高浓度余甘子提取物灌胃组每日颈背部皮下注射1% D-半乳糖0.2 ml，同时分别灌胃余甘子提取物（浓度为0.6 g/ml和1.2 g/ml）各0.2 ml。
       
       小、大剂量余甘子饲料组：每日颈背部皮下注射1% D-半乳糖0.2 ml，同时分别给予25 mg余甘子粉/g饲料和50 mg余甘子粉/g饲料的饲料6 g。
       
       实验期间小鼠自由取食和饮水，第30天，眼眶取血，分离血清，断椎处死，取心、肝用生理盐水洗净，称重，用生理盐水制成匀浆，离心取上清液备用。
       1.2.2  测定方法依照试剂盒说明书方法测定。
       
       SOD测定用黄嘌呤法［2］：规定血清中SOD活力以每毫升反应液中SOD抑制率达到50%时所对应的SOD量为一个活力单位（U），即U/ml，组织中SOD活力以每毫克组织蛋白在1 ml反应液中SOD抑制率达到50%时所对应的SOD量为一个活力单位（U），即U/mgprot。
       
       LPO的测定用丙二醛（MDA）法［3］：LPO降解产物中的MDA可与硫代巴比妥酸（thibatituric acid，TBA）反应生成红色产物在523nm处有最大吸收峰。单位：血清为nmol/ml，组织为nmol/mgpro。
       
       GSH-px测定用二硫对硝基苯甲酸法［3］。血清中GSH-px活力为0.1 ml血清在37℃反应5 min，扣除非酶反应，使体系中GSH浓度降低1 μmol/L 为一个活力单位（U）；组织中GSH-px活力以每毫克蛋白，每分钟扣除非酶反应，使体系中GSH-px浓度降低1 μmol/L为一个活力单位（U）。
       
       LPF测定用荧光比色法［3］，单位：血清为U/ml，组织为U/g
       1.2.3  数据处理实验结果以±s表示，用SPSS11.0软件进行统计分析比较，采用单因素方差分析检验其显著性。
       2  结果
       2.1  余甘子对血清中SOD，GSH-px，MDA和LPF的影响结果见表1。从表1可以看出，与衰老模型组比较，余甘子能显著提高血清中SOD活性，但高浓度提取物灌胃组与低浓度提取物灌胃组以及大剂量余甘子饲料组和小剂量余甘子饲料组之间有显著差异；同样余甘子也显著提高了血清中GSH-px的活性，但大剂量余甘子饲料组与其它组之间差异显著；余甘子极显著降低了血清中MDA的含量，但低浓度提取物灌胃组与其它给药组比较降辐较小；余甘子显著降低了血清中LPF的含量，余甘子饲料组与灌胃组之间无显著差异。与衰老模型组比较，小剂量余甘子饲料组中血清SOD，GSH-px活性提高不明显，但MAD和LPF却显著下降。大剂量余甘子饲料组中，血清SOD，GSH-px活性显著提高，MDA和LPF极显著下降。
       2.2  余甘子对心肌中SOD，GSH-px，MDA和LPF的影响结果见表2。表2表明：与衰老模型组相比，余甘子能显著提高心肌中SOD，GSH-px活性，显著降低心肌中MDA和LPF的含量。大剂量余甘子饲料组能极显著提高SOD，GSH-px活性，极显著降低MAD，LPF含量。
       表1  余甘子对血清中SOD，GSH-px，MDA和LPF的影响（略）   
       与D-半乳糖衰老模型组比较，*P<0.05, **P<0.01
       表2  余甘子对心肌中SOD，GSH-px，MDA和LPF的影响（略）   
       与D-半乳糖衰老模型组比较，*P<0.05, **P<0.01
       2.3  余甘子对肝中SOD，GSH-px，MDA和LPF的影响结果见表3。与衰老模型组相比，余甘子能显著提高肝中SOD，GSH-px的活性，能显著降低肝中MDA和LPF的含量。大剂量余甘子饲料组中，SOD，GSH-px活性提高显著，MDA，LPF显著降低。灌胃组和小剂量余甘子饲料组之间在提高SOD，GSH-px活性方面无显著差异，但肝中MDA，LPF含量却极显著降低。
       表3  余甘子对肝中SOD，GSH-px，MDA和LPF的影响（略）   
       与D-半乳糖衰老模型组比较，*P<0.05, **P<0.01
       3  讨论
       
       解释机体衰老发生的学说多种多样，但自由基学说（free radical theory）是被普遍接受的衰老学说之一。自由基学说认为：衰老过程源于代谢产生的自由基和脂质过氧化物（LPO）会破坏生命大分子物质（核酸、蛋白质、糖类、脂类等）及细胞膜的结构从而导致衰老。即：随着年龄增长，体内自由基与脂质过氧化物含量增高，而超氧化物歧化酶活性降低，机体对自由基损害的防御能力逐渐下降，加速了机体的衰老进程［5］。
       
       SOD，GSH-px是机体抗氧化系统中重要的酶类。能对机体代谢中产生的超氧离子进行歧化反应，减轻或消除自由基对机体的损害而抗衰老。MDA和LPF作为LPO的代表产物，是衡量机体自由基代谢的敏感指标，其含量能客观地反映机体产生自由基的水平。因此，用机体SOD，GSH-px活力上升和MDA，LPF含量下降可以作为抗氧化、抗衰老的指标。
       
       实验结果显示，余甘子能显著提高血清和组织中的SOD，GSH-px活性，能显著降低MDA和LPF含量，具有明显的抗氧化抗衰老的生理作用。从各指标的变化幅度来看，余甘子饲料比提取物更能明显提高SOD和GSH-px活性，显著降低MDA和LPF的含量，这可能是余甘子提取物在提取过程中活性物质被破坏或损失所致。
       
       有研究表明，抗氧化剂一般是通过两条途径实现抗氧化，一是直接清除过量的自由基，二是通过增强体内抗氧化系统，抑制自由基的产生［6］。余甘子的抗氧化抗衰老也是通过以上两种途径实现的，在血清和肝中SOD和GSH-px活性提高不显著的条件下，其中的MDA和LPF却极显著降低，说明此时余甘子是通过其中所含的活性物质（如维生素C，维生素E，多酚，SOD等）在体内可以通过起氢供体的作用而阻断和终止自由基连锁反应链，阻止和抑制氧自由基反应和脂质过氧化反应的病理性加剧，抑制LPO及其代谢产物MDA等毒性物质的生成，从而发挥抗氧化作用。而高浓度提取物灌胃组和大剂量余甘子饲料组中，SOD，GSH-px活性提高显著，MDA和LPF均极显著降低，说明余甘子除通过其中所含活性物质抗氧化外，还通过提高体内抗氧化系统，特别是SOD，GSH-px活性来抑制或清除自由基的产生而抗氧化抗衰老的。
       
       另外，余甘子中所含有的微量元素如Zn，Cu，Se在抗氧化中也有重要作用，Cu是SOD的活性中心组分；Zn能稳定SOD结构；Se是一种强抗氧化剂，这些元素可消除或拮抗自由基，保护组织细胞免受自由基氧化攻击［7］。
       
       人类疾病多与自由基的过盛有关，超氧离子是所有其他活性氧自由基产生的源泉，所以消除超氧离子至关重要。通过增强或提高体内SOD，GSH-px活性或补充活性稳定的外源SOD，以及抗氧化的活性物质，消除超氧离子，是抗衰老的主要方法，而余甘子正是具备这些特征的优质天然药用生物资源。因此，余甘子的药理和保健功能的研究与开发对防病抗衰老具有重大的意义。
       【参考文献】
         　　［1］ 张福平. 余甘子的营养价值［J］. 中国食物与营养,2004,1：25.
       
       ［2］ 裘惠霞，姚 雷.神香草及提取物的抗衰老作用［J］.上海交通大学学报(农业科学版),2005，23（1）：1.
       
       ［3］ 罗丽平，高荫榆，洪雪娥,等.薯蔓黄酮和多糖体内抗氧化作用研究［J］.食品科技，2005，26（8）：408.
       
       ［4］ 金 莹，孙爱东.苹果多酚对小鼠的抗氧化作用研究［J］.中国食物与营养，2006,1：31.
       
       ［5］ 宋巧梅.熊胆粉对D-半乳糖致衰小鼠抗衰老作用机制研究［J］.江苏中医药，2006,27（8）：57.
       
       ［6］ 方允中，郑荣梁.自由基生物学的理论与应用［M］.北京：科学出版社，2002：752.
       
       ［7］ 吴雪辉，谢治芳，黄永芳.余甘子的化学成分和保健功能作用［J］.中国野生植物资源，2003,22（6）：69.