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       【关键词】  高效液相色谱 动物药 分析测定
       动物类药的应用有着悠久的历史。这些动物药在临床运用中，有的用其全体，如：全蝎、蜈蚣；有的用动物的一部分，如：蛇胆、鹿茸；有的用动物的分泌物，如：麝香、蟾酥；有的用动物的生理、病理产物，如：蝉蜕、牛黄。动物中药的活性成分作用强，用量小，对其与功用相关的成分进行定量分析，是控制药材质量的关键。高效液相色谱法具有快速、准确、方便的特点，在中药质量控制方面的应用日益广泛。现就近年来高效液相色谱法在常用动物药分析测定方面的进展做一概括。
       1  地龙
       
       本品为矩蚓科动物参环毛蚓、通俗环毛蚓、威廉环毛蚓或枝育环毛蚓的干燥体。主要含蚯蚓解热碱、蚯蚓毒素、次黄嘌呤、黄嘌呤、腺嘌呤、鸟嘌呤、胆碱、琥珀酸等。
       1.1  蚯蚓磷酯和N磷酸蚯蚓磷脂的测定［1］采用衍生化试剂：称取3 mg邻苯二甲醛溶于0.5 ml甲醇，加入5 ml硼酸盐缓冲溶液（pH 9.5）和7.5 ml乙硫醇，进行柱前衍生化，以色谱柱：ODS柱（4.6 mm×125 mm），保护柱：ODS柱（2 mm×50 mm），流动相：溶剂A（0.3 mol/L的磷酸二氢钠缓冲溶液，以2 mol/L氢氧化钠调节pH7.2）-四氢呋喃-水（10∶25∶1875）；溶剂B：0.3 mol/L的磷酸二氢钠缓冲溶液（pH 7.2）乙腈水（45∶1100∶855）。流速：2 ml/min；检测器：激发波长：344 nm，发射波长：443 nm为分析条件进行梯度洗脱，荧光检测的方法，测定了地龙中蚯蚓磷脂和N磷酸蚯蚓磷脂的含量。
       1.2  次黄嘌呤、黄嘌呤、尿嘧啶、脲苷的测定李伟等［2］以色谱柱：C18柱（4.6 mm×150 mm）；流动相：水-甲醇-四氢呋喃（100∶0.1∶0.05），流速：1.0 ml/min；检测波长：260 nm为条件对广地龙和土地龙中的次黄嘌呤、黄嘌呤、尿嘧啶、脲苷进行了测定比较。结果表明两种地龙的次黄嘌呤、黄嘌呤、尿嘧啶、脲苷含量无明显差异。
       2  牛黄
          
       本品为牛科动物黄牛干燥的胆结石；人工牛黄为牛、羊胆汁或猪胆汁提取的浅黄或浅棕色粉末；培植牛黄是在牛、羊胆囊内导入非致病的或毒力弱的大肠杆菌和埋入异物，所生成的胆结石。成分含胆酸、去氧胆酸、胆固醇、胆红素、卵磷脂、牛黄酸、氨基酸等。
       2.1  胆汁酸的测定范广平等［3］对天然牛黄、人工牛黄、人工培植牛黄中胆酸、去氧胆酸、鹅去氧胆酸、甘氨酸胆酸进行了测定。色谱条件：色谱柱：ODS柱（4.6 mm×250 mm）；流动相：甲醇-水（75∶25），用磷酸调节pH至3.5；流速：1.0 ml/min；柱温：50℃；检测波长：210 nm。而王健等［4］则以18-冠醚-6，1-溴乙酰基对硝基苯为衍生化试剂，进行柱前衍生化的方法，以C18柱（3.9 mm×300 mm），流动相：甲醇-乙腈-水（24∶35∶41），流速：1.0 ml/min，检测波长：254 nm为分析条件测定了人工牛黄中胆汁酸的含量。
       2.2  胆红素的测定朱孝芸［5］采用ODS柱（4.6 mm×250 mm），流动相：甲醇-乙腈-0.5%醋酸溶液（70∶14∶16），流速：2.0 ml/min，柱温：38℃；检测波长：450 nm的分析方法，以苯丙酸诺龙为内标对进口牛黄、澳洲牛黄、印度牛黄、人工牛黄、培植牛黄及掺伪牛黄等14种牛黄中的胆红素进行了含量测定并与重氮化比色法（《中国药典》方法）进行了比较。
       3  鹿茸
       
       本品为鹿科动物花鹿或马鹿雄鹿未骨化带茸毛的幼角。成分含磷脂类成分：溶血磷脂酸胆碱（LPC），LPC中含有8种脂肪酸：肉豆宏脂酸、十五烷酸、棕榈酸、棕桐油酸、十七烷酸、硬脂酸、油酸和亚油酸；碱基：次黄嘌呤、尿嘧啶、脲苷，多胺类：精脉、精胺、腐胶等。
       3.1  碱基成分的测定杨秀伟［6］采用NH2柱（4.6 mm×250 mm）；流动相：0.2 mol/L磷酸二氢钠-0.1 mol/L氯化钠缓冲液；流速：0.6 ml/min；检测波长：260 nm为条件的正相高效液相色谱法测定了花鹿茸、马鹿茸不同浓度乙醇提取物中次黄嘌呤、尿嘧啶、脲苷的含量。
       3.2  多胺的测定仲崇林等［7］将样品苯甲酰化，以1，6-二乙胺为内标，采用ODS柱（4.6 mm×250 mm）；流动相：甲醇-水（6∶4），流速：1.5 ml/min；柱温：40℃；检测波长：230 nm为条件的反相高效液相色谱法的方法，对鹿茸尖部，中部和根部等不同部位的精眯、精胺、腐胶的含量进行了测定。
       4  僵蚕
       
       本品为蚕蛾科昆虫家蚕4～5周龄的幼虫感染（或人工接种）白僵菌而致死的干燥体。含蛋白质，脂肪；变态活性激素：蜕皮甾酮；色素：3-羟基犬尿素。此外，尚含腺苷、腺嘌呤、脲苷、尿嘧啶、黄嘌呤与次黄嘌呤等。
       
       李伟等［8］将样品用水提取，离心取上清液，以YWGC18柱（4.6 mm×150 mm）；流动相：水-甲醇-四氢呋喃（100∶0.1∶0.05）；流速：1.0 ml/min；检测波长：260 nm为分析条件对僵蚕中的尿嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤与脲苷进行了测定。而刘丽芳等［9］则以流动相：0.05 mol/L磷酸氢二铵溶液（pH8.4）；流速：0.8 ml/min；检测波长：254 nm，同样对僵蚕中的尿嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤与脲苷进行了测定。经比较，后者对尿嘧、黄嘌呤、次黄嘌呤与脲苷分离要好于前者。
       5  穿山甲
       
       本品为鲮鲤科动物穿山甲的鳞片。含硬脂酸、胆甾醇、L-丝-L-酪环二肽和D-丝-L-酪环二肽。
       
       马雪梅等［10］将样品用乙醚脱脂后，以甲醇回流提取，以C18柱（4.6 mm×250 mm）；流动相：磷酸缓冲液（pH 9）-甲醇（85∶15）；流速：0.5 ml/min；检测波长：230 nm为条件，对炮制前后穿山甲的鳞片L丝L酪环二肽和D丝L酪环二肽含量的变化进行了测定。
       6  麝香
       
       为鹿科动物麝的雄体香腺囊内的分泌物。含大环化合物如麝香酮、降麝香酮、麝香醇；甾族化合物；长链化合物；蛋白质；氨基酸，无机成分。
       6.1  测定麝香中甾体成分的含量俞波等［11］将样品采用不同的处理方法制得供试液甲、供试液乙。以硅胶为固定相，供试液甲用流动相：正已烷-甲氢呋喃（10∶2）展开，流速为1.0 ml/min，检测波长235 nm，可测定雄甾烷-4-烯-3，17-二酮；供试液乙先以流动相：正已烷-二氧六环-醋酸乙酯（100∶2.5∶0.4），流速0.8 ml/min，检测波长261 nm为条件测定5α雄甾烷3β17α二醇；在以正已烷-醋酸乙酯（100∶8.5）测定3α羟基-5β-雄甾烷17酮、3α-羟基-5α-雄甾烷-17酮-3α-羟基雄甾烷4烯17酮、3β羟基-雄甾烷-5烯-17酮、3β羟基-5α雄甾烷17酮，检测波长261 nm。
       6.2  测定麝香酮的含量［12］以ODSC18柱（4.6 mm×250 mm）；流动相：95%乙腈水溶液；流速：1.0 ml/min；检测波长：分别在254 nm和365 nm进行双波长检测为分析条件，采用柱前衍生法，将对照和样品分别与2，4二硝基苯肼盐酸溶液反应，制得2，4二硝基苯肼衍生物麝香酮腙后进样分析的方法，对天然麝香、养香和原香中麝香酮的含量进行了测定。
       7  蟾酥
       
       本品为蟾蜍科动物中华大蟾蜍或黑眶蟾蜍的干燥分泌物。含蟾毒内酯：脂蟾毒苷元、华蟾毒苷元、蟾毒灵、远华蟾毒精、日蟾毒它灵、蟾毒它灵、蟾毒它里宁、去乙酰华蟾毒它灵、去乙酰华蟾素精、蟾毒它里定、华蟾毒精。此外，尚含蟾蜍碱等。
       7.1  蟾酥中华蟾毒苷元与脂蟾苷元的测定王京辉等［13］将样品用甲醇水浴提取，以C18柱（4.6 mm×250 mm）流动相：0.5%磷酸二氢钾乙腈（50∶50）（磷酸调节pH值为3.25±0.02）；流速0.8 ml/min；柱温：40℃；检测波长：296 nm为分析条件，对不同产地的9个样品中的蟾酥中华蟾毒苷元与脂蟾毒苷元进行了测定比较。
       7.2  华蟾毒精和脂蟾苷元的测定杜立颖等［14］将样品用甲醇超声提取，以安宫黄体酮为内标，以C18柱（4.6 mm×250 mm）；流动相：甲醇水（6∶4）；检测波长：282 nm；流速：前30 min为1.0 ml/min，后30 min为2.0 ml/min为条件，对华蟾毒精和脂蟾苷元进行了测定。
       7.3  蟾皮与水烫蟾皮中脂蟾毒苷元的测定王晓娟等［15］以C18柱（4.6 mm×250 mm）；流动相：甲醇水（65∶35）；流速：1.2 ml/min；检测波长：298 nm为分析条件，对经氯仿回流提取，乙醇定容后的蟾皮与水烫蟾皮中脂蟾毒苷元的进行了测定。
       8  蛇胆
       
       本品为游蛇科动物乌梢蛇或其它种蛇的胆囊。含牛磺胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺去氧胆酸、胆酸与石胆酸等。
       
       刘卓妍等［16］以YWGC18柱（4.6 mm×250 mm）；流动相：30%乙腈水溶液，15%磷酸调pH至3；流速：0.8 ml/min；检测波长：210 nm为色谱条件，对18种蛇的蛇胆中牛磺胆酸进行了测定。
       9  熊胆
       
       本品为熊科动物黑熊或棕熊的干燥胆。含胆酸类：牛黄熊去氧胆酸、牛黄鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、胆酸、鹅去氧胆酸与牛黄酸；还含磷胆类；磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇与磷脂酰乙醇胺等。
       9.1  牛黄熊去氧胆酸和牛黄鹅去氧胆酸的测定张启明等［17］将样品用流动相溶解，超声提取，离心处理后，以甘氨胆酸为内标，以C18柱（3.9 mm×300 mm），预柱：ODS柱（13 mm）；流动相：甲醇-0.03 mol/L磷酸缓冲液（68∶32），pH 4.4～4.5；流速：0.8 ml/min；检测波长：205 nm为条件，对8份熊胆粉，4份熊胆中的牛黄熊去氧胆酸和牛黄鹅去氧胆酸进行了测定。
       9.2  熊去氧胆酸的测定李杏珍等［18］以C18柱（3.9 mm×300 mm）；流动相：取0.1 mol/L磷酸氢二钠及磷酸二氢钾贮备液各10 ml，置1 000 ml量瓶中，加甲醇750 ml，再加水至刻度，摇匀，用磷酸调pH至3，流速：A泵输送上述流动相0.9 ml/min，B泵输送重蒸馏水0.1 ml/min；柱温：40℃；检测波长：205 nm为条件，对15份不同产地的引流熊胆胆汁中熊去氧胆酸进行了测定。
       9.3  磷脂类化合物的测定卢学清等［19］以P-E硅胶柱（4.6 mm×150 mm）；保护柱硅胶60柱（4.6 mm×40 mm）；流动相：乙腈甲醇冰醋酸（65∶35∶0.5）；流速：1.5ml/min；检测波长：205 nm为分析条件对6种熊胆中磷脂类化合物：磷脂酰肌醇，磷脂酰乙醇胺，磷脂酰胆碱进行了测定。
       10  其它
       
       土鳖虫、蜈蚣、全蝎、斑蝥、水蛭、虻虫等虫类药中均含尿嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤与脲苷。刘丽芳等［9］以流动相：0.05 mol/L磷酸氢二铵溶液（pH 8.4）；流速：0.8 ml/min；检测波长：254 nm为分析条件对虫类药中的尿嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤与脲苷含量进行了测定。
       
       从以上的总结可以看出，动物药的分析多对C18位固定相，以水、甲醇、乙腈为流动相，紫外检测，分析条件要求不高，分析的指标成分和有效成分较多，有利于动物药的质量控制。
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