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       【摘要】 
       目的研究黄芩苷对大鼠离体小肠及胃平滑肌条收缩性的影响。方法以大鼠离体小肠及胃平滑肌条收缩性为研究模型，考察黄芩苷在高钙、低钙及正常克氏液中对平滑肌条收缩作用的影响；在正常克氏液中分别观察黄芩苷对新斯的明、乙酰胆碱、组胺及阿托品存在下平滑肌收缩性的影响。结果在高钙、正常钙及低钙不同条件下，黄芩苷在6.25～100 μmol/L范围内均剂量依赖性抑制小肠、胃平滑肌收缩，拮抗新斯的明、乙酰胆碱及组胺引起的收缩作用，且相加阿托品引起的抑制收缩作用。结论黄芩苷对小肠、胃平滑肌收缩具有明显抑制作用。
       【关键词】  黄芩苷； 平滑肌条； 拮抗作用； 相加作用
       Effects of Baicalin on the Contractility of Intestine and Gastric Strips of Rat
        XU Zhili, LIN Yuan, ZHANG Houli, CHEN Dapeng, LI Chuanxun, TANG Zeyao*
        (College of Pharmacology, Dalian Medical University, Dalian 116044，China)
        Abstract：ObjectiveTo investigate the effects of baicalin on the contractility of isolated intestine and gastric smooth muscle strips of rat. MethodsThe effects of baicalin on the contractility of isolated rat intestine and gastric strips were studied in Krebs" solution in the presence of high, normal and low concentrations of Ca2+ respectively. The observation of the effects of baicalin on the contractile activity in the presence of neostigmine, acetylcholine, histamine and atropine respectively were also studied.ResultsBaicalin inhibited the muscle contraction of isolated rat intestine and gastric strips in a dose-dependent manner, antagonized the stimulation induced by neostigmine, acetylcholine and histamine. Synergy inhibition on contractile activity was induced by concurrent use of baicalin and atropine. ConclusionBaicalin has prominent inhibition on the contractile activity of isolated rat intestine and gastric strips.
        Key words：Baicalin；  Strips of smooth muscle；  Antagonism；  Addition effect
        黄芩苷(Baicalin)是中药黄芩的主要有效成分之一，是从黄芩根中提取分离出来的一种黄酮类化合物，具有心肌缺血的保护、抗脑缺血、还可抗动脉粥样硬化、肝损伤的保护、抗哮喘、抗肿瘤、治疗胰腺炎、糖尿病大鼠肾脏的保护等广泛的药理作用［1］。关于黄芩苷对胃肠平滑肌收缩的影响尚未见报道。中医传统理论认为，黄芩清热燥湿，适用于湿热为患的病变，如胃肠湿热的泄泻痢疾［2］，故笔者认为其作用可能与胃肠平滑肌收缩有关。本实验通过观察黄芩苷对大鼠离体小肠及胃平滑肌条收缩性的影响，从而验证此推测并为黄芩苷用于胃肠疾病治疗提供药理学依据。
           1  器材
        1.1  动物 科研用SD大鼠，雌雄各半，体重(200±20)g，大连医科大学实验动物中心提供。
        1.2  药品和试剂 黄芩苷购自中国药品生物制品检定所，用二甲基亚砜溶解为100 mmol/L，使用前用双蒸水稀释至10 mmol/L。克氏液成分：氯化钠114.0 mmol·L-1，氯化钾4.7 mmol·L-1，氯化镁1.2 mmol·L-1，氯化钙2.5 mmol·L-1，磷酸二氢钠1.8 mmol·L-1，葡萄糖11.5 mmol·L-1，碳酸氢钠18.0 mmol·L-1，pH 7.4。高钙克氏液中氯化钙5 mmol/L，低钙克氏液中氯化钙1.25 mmol/L，pH 均为7.4。
        1.3  仪器 HW-400S恒温平滑肌槽，BL-420F生物机能实验系统，成都泰盟科技有限公司产品。
           2  方法
        2.1  方法 实验前大鼠禁食48 h，不禁水，猛击头部令其急死，立即剖开腹腔，轻轻剪取小肠2 cm，除去肠系膜并用克氏液冲洗干净，对角线固定于通气管和张力换能器之间，置入37℃恒温克氏液浴槽中并通以95%O2和5%CO2，稳定后记录正常小肠活动作为对照，然后滴加不同浓度黄芩苷并记录稳定后3 min内小肠活动变化。取出胃迅速放入克氏液中，剪出胃底部，沿胃小弯剪开胃腔，去除黏膜，平行剪开5～6道使形成较长胃底条，取2 cm胃底条下端固定于浴槽下部通气侧弯钩上，上端与换能器相连，放入37℃克氏液浴槽中并通以95%O2和5%CO2，稳定约50 min，记录张力曲线及给予不同浓度黄芩苷且稳定后10 min内胃平滑肌条收缩振幅。
        2.2  统计处理  以正常克氏液中稳定的收缩波平均振幅为100%，其余为与其相比所得相对值，实验结果以±s表示，t检验，P＜0.05具有显著性意义。
           3  结果
        3.1  黄芩苷对大鼠离体小肠运动的影响
        3.1.1  不同Ca2+浓度条件下，黄芩苷对离体小肠收缩振幅的影响见图1。由图1可见，5 mmol/L的高Ca2+克氏液中离体小肠收缩振幅为169.1%，2.5 mmol/L正常Ca2+克氏液中为100.0%，1.25 mmol/L低Ca2+克氏液中为40.8%。加入终浓度6.25，12.5，25，50，100 μmol/L黄芩苷，可见在各种Ca2+浓度下，随着黄芩苷浓度逐渐增加，大鼠离体小肠收缩振幅均呈现剂量依赖性抑制。高Ca2+克氏液中，6.25 μmol/L的黄芩苷即呈显著性抑制 (P<0.05)；而正常克氏液及低Ca2+克氏液中，12.5 μmol/L的黄芩苷显示明显抑制作用 (P<0.01)，6.25 μmol/L的黄芩苷也呈抑制效应但无统计学显著性。至黄芩苷浓度达100 μmol/L时，小肠收缩振幅在高钙克氏液中由169.1%降至53.0%，正常克氏液中由100.0%降至33.5%，低钙克氏液中由40.8%降至15.1%，下降幅度高钙克氏液＞正常克氏液＞低钙克氏液。
        3.1.2  离体小肠中，黄芩苷对新斯的明、乙酰胆碱、组胺的拮抗作用及与阿托品的相加作用见图2。1，4，7，10组均为正常克氏液中小肠收缩，2，5，8组分别为加入新斯的明（1 μmol/L）、乙酰胆碱(0.35 μmol/L)、组胺（40 μmol/L）后，分别呈现显著增加小肠收缩振幅(P<0.01)，组11为加入阿托品（1 μmol/L）后显著抑制小肠收缩振幅 (P<0.01)，而组3，6，9，12为各自再加入黄芩苷（25 μmol/L）后，对新斯的明、乙酰胆碱、组胺的小肠收缩振幅均呈显著拮抗作用 (P<0.01)，与阿托品的抑制小肠收缩性呈显著相加作用 (P<0.01)。
        3.2  黄芩苷对大鼠胃平滑肌条运动的影响
        3.2.1  不同Ca2+浓度条件下，黄芩苷对胃平滑肌条收缩振幅的影响在终浓度分别为1.25，2.5，5 mmol/L的3种Ca2+浓度克氏液中，高钙克氏液中收缩振幅为162.8％，正常Ca2+克氏液中收缩振幅为100.0%，低钙克氏液中收缩振幅为44.4％；分别加入6.25，12.5，25，50，100 μmol/L的黄芩苷，大鼠离体胃平滑肌条收缩振幅呈剂量依赖性抑制，在12.5～100 μmol/L浓度范围内，黄芩苷在各种克氏液中均显著抑制大鼠离体胃平滑肌条的收缩振幅 (P<0.05，P<0.01)。至黄芩苷浓度达100 μmol/L时，小肠收缩振幅在高钙克氏液中由162.8%降至75.5%，正常克氏液中由100.0%降至48.6%，低钙克氏液中由44.4%降至26.1%，下降幅度高钙克氏液＞正常克氏液＞低钙克氏液。见图3。
        3.2.2  胃平滑肌条运动中黄芩苷对新斯的明、乙酰胆碱、组胺的拮抗作用及与阿托品的相加作用见图4。1，4，7，10组均为正常克氏液，2，5，8组分别显示加入新斯的明（1 μmol/L）、乙酰胆碱（0.35 μmol/L）、组胺（40 μmol/L）后显著增加胃收缩振幅 (P<0.01)，11组为加入阿托品后显著抑制胃收缩振幅 (P<0.01)，而组3，6，9，12各自加入黄芩苷（25 μmol/L）后，对新斯的明、乙酰胆碱、组胺的促进胃收缩均呈现显著拮抗作用 (P<0.01)，与阿托品的抑制胃收缩呈现相加作用 (P<0.01)。
           4  讨论
        在不同Ca2+浓度条件下，不同浓度黄芩苷对大鼠离体小肠及胃平滑肌条收缩性的影响，尽管程度大小不同，但均显示黄芩苷对胃肠平滑肌收缩产生显著抑制作用。不同Ca2+浓度、不同黄芩苷浓度下的胃、肠组织收缩趋势一致。表明胃与肠组织的生理功能特点具有相近性。本实验结果显示在高钙水平条件下，黄芩苷对离体大鼠胃、肠收缩抑制作用更明显，相同浓度的黄芩苷作用下高钙克氏液中抑制幅度最大，正常克氏液中次之，低钙克氏液中胃、肠收缩受到的抑制最小。
        组胺是药理作用活跃的生物胺，对胃肠、支气管平滑肌产生较强烈收缩。有研究表明组胺不仅可激动H1受体，同时可直接促进肌球蛋白轻链激酶的活性，促进肌球蛋白轻链磷酸化，增强平滑肌收缩［3］。据报道黄芩苷对离体大鼠肠系膜动脉在低浓度时表现为收缩作用，而在高浓度时则表现为松弛血管平滑肌作用，机制是抑制了蛋白激酶的收缩作用［4］。本实验中黄芩苷拮抗组胺对平滑肌的收缩作用，提示黄芩苷也许与组胺存在对肌球蛋白轻链激酶竞争性拮抗作用。
        新斯的明具有抗胆碱酯酶作用，使乙酰胆碱蓄积，对胃肠道平滑肌可以产生类似乙酰胆碱的M样作用，促进平滑肌收缩，但起效、持续的时间较乙酰胆碱短、弱。阿托品为M受体阻断剂，能阻断乙酰胆碱的M作用，抑制平滑肌收缩。本实验结果表明黄芩苷拮抗新斯的明、乙酰胆碱对大鼠离体胃、肠平滑肌的收缩作用，相加阿托品对大鼠离体胃、肠平滑肌的抑制作用。提示黄芩苷可能具有M受体阻断样作用，提示其抑制胃、肠平滑肌收缩机制可能与阻断M受体有关。关于黄芩苷对胃肠平滑肌作用的分子机制需要进一步研究。
       【参考文献】
         ［1］ Chang CP, Huang WT, Cheng BC, et al. The flavonoid baicalin protects against cerebrovascular dysfunction and brain inflammation in experimental heatstroke［J］. Neuropharmacology, 2007, 52(3):1024.
       
       ［2］ 北京中医学院中药教研室. 药性歌括四百味白话解, 第4版［M］.北京：人民卫生出版社, 1993：12.
       
       ［3］ Srinivas SP, Satpathy M, Guo Y, et al. Histamine-Induced Phosphorylation of the Regulatory Light Chain of Myosin II Disrupts the Barrier Integrity of Corneal Endothelial Cells［J］.Invest Ophthalmol Vis Sci, 2006, 47(9)：4011.
       
       ［4］ Huang Y, Wong C M, Lau C W, et a1. Inhibition of nitric oxide/cyclic GMP-mediated relaxation by purified flavonoids, baicalin and baicalein, in rat aoritc rings［J］.Biochem Pharmaco1, 2004, 67：787.