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       【摘要】 
       目的考查姜黄素对家鸭脂肪肝模型肝脂、血脂的干预效果，并研究其作用机制。方法复制家鸭脂肪肝模型，并用姜黄素进行干预，考查肝脂、血脂、肝脂酶、肝病理变化、一般情况，并进行统计分析。结果姜黄素具有降低家鸭脂肪肝模型肝TG、血TG、体重、肝指数，改善肝组织病理的作用，其中高、中剂量组显著低于模型组（P<0.01，P<0.05)。姜黄素有升高家鸭脂肪肝模型肝脂酶的作用，其中高剂量组显著高于模型组（P<0.05)。结论姜黄素具有降低家鸭脂肪肝模型肝脂、血脂的作用，且具有剂量依赖性。其作用机制可能与增加肝脂酶活性，促进脂质代谢，保护肝细胞有关。
       【关键词】  姜黄素； 脂肪肝； 家鸭； 肝脂； 血脂； 肝脂酶
       Mechanism and Interventional Effects of Curcumin on Liver Lipid and Serum Lipid in Model Ducks with Fatty Liver
        REN Yong-li，XU Zong-pei ，LIANG Ru-sheng, LIU Peng,LI Yuhong,SU Jing
        （Tianjin University of TCM,Tianjin 300193,China）
        Abstract：ObjectiveTo observe the interventional effects of curcumin on liver lipid and serum lipid in a model ducks with fatty liver and its mechanism. MethodsDuck model with fatty liver was established firstly. After treatment with curcumin,liver lipid ,serum lipid,hepatic lipase,hepatic pathological changes and the general physical state were observed in model duck.ResultsCompared with the model group ,high and medium dose of curcumin could obviously decrease liver triglyceride,serum triglyceride, the body weight,liver index and ameliorate liver pathological changes of model ducks.（P<0.01，P<0.05).Compared with the model group ,high dose of curcumin could obviously increase the HL activities of model ducks,（P<0.05). ConclusionCurcumin may decrease liver lipid ,serum lipid in a dose-dependent manner and the therapeutic mechanism may be related to Improving the HL activities ，increasing lipid metabolism and protecting liver cells.
        Key words：Curcumin；  Fatty liver；  Duck；  Liver lipid；  Blood lipid ；  HL
        天津中医药大学张伯礼院士根据中医理论和多年临床经验建立了治疗脂肪肝的经验效方“降脂清肝方”。在前期实验中已经成功地建立了家鸭脂肪肝模型，并对“降脂清肝方”全方及拆方进行了实验研究。实验结果表明“降脂清肝方”全方及拆方中姜黄、何首乌具有显著的抗脂肪肝作用。为了深入研究该方的抗脂肪肝作用，本次实验主要考查了姜黄中主要成分姜黄素对家鸭脂肪肝模型肝脂、血脂的干预效果及作用机制。现报道如下。
           1   材料与仪器
        1.1  动物及分组45日龄北京鸭70只，雌雄各半，由天津市精武禽类养殖有限公司提供。采用随机列表法分为7组，每组10只，即空白对照组（空白组）；脂肪肝模型组（模型组）；姜黄素高剂量组（高剂量组）；姜黄素中剂量组（中剂量组）；姜黄素低剂量组（低剂量组）；水煎姜黄组（姜黄组）；东宝甘泰组（东宝组）；
        1.2  试剂血清总胆固醇(TC)测定试剂盒、血清甘油三酯(TG)测定试剂盒、高密度脂蛋白（HDL）试剂盒、低密度脂蛋白（LDL）试剂盒由北京中生北控生物科技股份有限公司提供；肝脂酶(HL)由南京建成生物工程研究所提供。
        1.3  主要仪器200型半自动生化分析仪，荷兰威图；超速低温离心机，德国贝克曼；JJ2000型精密电子天平，常熟双杰测试仪器厂；友声ACS-A型电子秤，上海申衡电子有限公司制造；鸭填饲机，北京市泽恩德平科技开发有限责任公司；722RS型分光光度计，上海第二分析仪器厂。
        2  方法
        2.1  用药及造模方法
        采用标准动物的等效剂量折算系数法［1］参照家兔系数确定给药剂量。以成人等效剂量2倍作为姜黄素低剂量，4倍为中剂量，8倍为高剂量，姜黄和东宝肝泰剂量均为等效剂量的2倍。如下：
        姜黄素高剂量80 mg·kg-1·d-1·ig；中剂量40 mg·kg-1·d-1·ig；低剂量20 mg·kg-1·d-1·ig。由天津一方科技提供（纯度95%）。
        姜黄1.4 g·kg-1·d-1·ig。由天津中医药大学研究中心提供。
        东宝甘泰0.35 g·kg-1·d-1·ig，市售，通化东宝药业股份有限公司生产。产品批号：050707。
        采用高糖饮食复制家鸭脂肪肝模型［2］。 造模同时每日按上述药物与剂量于餐后30 min灌胃1次，空白组、模型组给予等量蒸馏水。
        2.2  检测指标
        2.2.1  一般情况观察实验期间家鸭的毛发、形态、进食、粪便及死亡情况。
        2.2.2  体重实验开始前（0 d），7 d，14 d，21 d，28 d称量各组家鸭体重。
        2.2.3  肝指数实验结束（28 d），剖腹取肝称重，计算肝指数(肝指数=肝湿重/体重×100%)。
        2.2.4  肝脏TG，TC取肝右叶同一部位0.3 g肝组织，用无水乙醇∶丙酮（1∶1）制成10%匀浆液抽提脂质，4℃，3 000 r/min离心10 min，静置48 h后，取上清液用半自动生化分析仪测定TG，TC含量。
        2.2.5  血清TG，TC，HDL，LDL实验结束，停止供食供水12 h，颈静脉取血,据试剂盒说明检测TG，TC，HDL，LDL。
        2.2.6  肝脂酶(HL)活性取肝右叶同一部位0.3 g肝组织，用生理盐水制成10%匀浆液，4℃，2 500 r/min离心10 min，取上清液0.05 ml按试剂盒操作表进行检测，同时应用考马斯亮蓝法检测匀浆上清液蛋白含量，并依据公式计算出HL的活性。
        2.2.7  肝脏的病理学改变实验四周末剪断颈静脉放血处死，迅速剖腹，去除网膜及附属组织，取出完整的肝脏，首先进行肉眼观察其颜色、形态。
        再取肝右叶相同部位肝组织2 cm×2 cm×0.3 mm做病理标本，所有标本均用10%中性甲醛液固定，石蜡包埋，连续切片，HE染色，光镜下评估肝脂肪变性程度。判断标准按照脂变细胞占肝细胞的比例进行脂变程度分级［3］。见表1。表1  肝细胞脂肪变性程度判断标准
        2.3  统计学处理用Spss11.5软件包进行统计学处理，数据用±s 表示，计量资料比较用方差分析（ONE- WAY ANOVA）；计数资料比较用非参数检验（Nonparametric Tests）。
        3  结果
        3.1  一般情况空白组家鸭毛发光泽，体态活泼，反应敏捷，食量、排泄物均正常，无死亡情况；模型组毛色欠光泽，活动明显减少，个别家鸭见青绿色粪便；姜黄素各组以及姜黄组、东宝组各种外在表现均优于模型组。
        3.2  体重实验初始，各组家鸭体重无显著差异（P>0.05）；实验期间，各组体重均直线升高。实验第21天时，模型组体重3.79 kg，显著高于空白组3.64 kg，P<0.05；给药组高，中剂量组为3.62，3.64 kg，显著低于模型组3.79，P<0.05。实验第28天时，体重变化规律同21 d时。见表2。表2  各组家鸭体重的比较与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05；n=10
        3.3  肝脏TG，TC及肝指数模型组家鸭肝组织TG非常显著高于空白组，P<0.01；各给药组TG较模型组均有降低，其中高、中剂量组、姜黄组、东宝组，非常显著低于模型组，P<0.01。
        模型组家鸭肝组织TC较空白组无显著差异，P>0.05；给药组中高剂量组、姜黄组、东宝组非常显著低于模型组，P<0.01。
        模型组家鸭肝指数非常显著高于空白组，P<0.01；各给药组肝指数较模型组均显著降低（P<0.01，P<0.05）。见表3。
        3.4  血清TG，TC，HDL，LDL模型组家鸭血清TG非常显著高于空白组，P<0.01；各给药组TG较模型组均有降低，其中高剂量组、姜黄组、东宝组，非常显著低于模型组，P<0.01；中、低剂量组，显著低于模型组，P<0.05。
        模型组家鸭血清TC，非常显著高于空白组，P<0.01；各给药组TC较模型组均有降低，其中高、中剂量组，显著低于模型组P<0.05。表3  各组家鸭肝组织TG及TC的比较与空白组比较，**P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；n=10
        模型组家鸭血清HDL，非常显著高于空白组，P<0.01；各给药组HDL较模型组无显著差异，P>0.05。
        模型组家鸭血清LDL，显著高于空白组，P<0.05；给药组中东宝组，显著低于模型组，P<0.05；其余各组较模型组无显著差异，P>0.05。见表4。表4  各组家鸭血清TG，TC，HDL，LDL的比较与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01 ；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；n=10
        3.5  肝组织HL空白组及各给药组HL活性均高于模型组，其中高剂量组、东宝组，显著高于模型组，P<0.05。见表5。表5   各组家鸭肝组织HL的比较与模型组比较，△P＜0.05；n=10
        3.6   肝脏的病理学改变大体肉眼观察：空白组家鸭肝脏外观颜色鲜红,边缘锐利,质软而富有弹性。模型组家鸭肝脏外观呈奶油黄或红黄相间,体积明显增大,边缘变钝,质地变软,切面略带油腻感。各给药组肝脏外观有不同程度的改善。
        空白组10例鸭肝组织均未见脂肪变性。模型组10例鸭肝组织均存在脂肪变性，其中“++”脂肪变性1例，≥“+++”6例。镜下可见肝细胞出现弥漫性大泡为主脂肪变性，且1～2区较3区为重，部分肝细胞胞浆疏松，未见明显炎细胞浸润及脂肪肉芽肿，汇管区大致正常，界板完整。东宝组、姜黄组以及高、中、低剂量组均仅有部分例数鸭肝组织存在脂肪变性。东宝组仅1例为“>＋”脂肪变性，而中剂量姜黄素无“>＋”脂肪变性例数。其余各组脂变程度不同。组织学评分由专业的病理老师评估，模型组比较空白组，脂变程度非常显著加重，P＜0.01；各给药组较模型组均能显著降低家鸭肝脏的脂变程度（P＜0.05，P＜0.01）。见表6。 表6  肝细胞组织学的影响
       4  讨论
        脂肪肝是多种疾病和原因引起的肝内脂质(主要为甘油三酯 )蓄积过多的一种病理状态。当肝内脂质含量超过肝脏湿重的5%或肝组织切片光镜下每单位面积见1/3以上肝细胞有脂滴存在时，称为脂肪肝［3］。近年来，我国脂肪肝的发病率逐年提高，已占到平均人口的10%［4］。其中非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)在一般人群中的患病率大约为20%,且可能是所有肝病中最常见的疾患［5］。因此防治脂肪肝的发生与发展具有重要意义。现代临床上多用保肝、降血脂类西药和健脾补肾、化浊祛瘀类中药进行干预，收到了一定效果。在实验研究中，中药复方虽层出不穷，但总体上对复方的研究还比较表浅，为此我们有必要对有效复方进行深入探究。
        在前期实验中，我们已经成功的复制出高糖饮食诱导的家鸭脂肪肝模型，且已证实降脂清肝方防治脂肪肝确有显著效果。并进一步对其进行拆方研究，探讨了全方中不同药味组成对脂肪肝的影响，发现单味药中姜黄及何首乌治疗脂肪肝效果显著，且姜黄降肝TG效果更突出。中药姜黄，性温、味辛苦，入肝、脾经，有活血行气作用。姜黄中含有姜黄素、挥发油、糖及微量元素等，其中姜黄素是主要活性成分，具有一定的生理活性。为了深入探讨姜黄降脂肪肝的作用机制，我们对其主要成分姜黄素进行了进一步研究。近年来，许多实验研究也表明姜黄及其主要成分姜黄素具有调节糖脂代谢和一定的保肝作用，因此被广泛运用于高血脂、肝炎等相关性疾病的防治中［6］。
        本实验结果显示，姜黄及其姜黄素能明显减轻实验动物体重、肝脂数，还能明显的调节血脂和肝脂水平，并有升高肝脂酶的作用。在病理客观指标上姜黄素各剂量组与姜黄组、东宝组均能改善脂肪变性程度，且姜黄素高、中剂量组优于阳性对照药组。提示姜黄素抗脂肪肝与剂量呈一定的量效关系，总体上姜黄素高、中剂量优于低剂量姜黄素的抗脂肪肝作用。姜黄素防治脂肪肝的主要机制为：①降低肝脏和血液TG、TC含量，以降TG明显，抑制内源性TG的合成，改善脂质在体内的分布及在内脏器官的沉积； ②增加肝细胞膜及肝细胞中HL的活性，加强肝脏中TG的分解，以达到减少肝细胞TG堆积的作用，也进一步佐证了HL在脂肪肝发病中的重要作用［7］； ③保护肝细胞，减轻肝脏的病理损害，促进肝细胞损伤修复。本研究证实，姜黄及姜黄素可用于防治脂肪肝，并为临床防治脂防肝提供了实验研究的可靠依据。
       【参考文献】
         ［1］ 徐叔云，卞如濂，陈 修.药理实验方法学，第3版［M］.北京：人民卫生出版社，2003：202.
       
       ［2］ 苏 菁，徐宗佩，刘 鹏，等.脂肪肝、高脂血症、糖尿病复合动物新模型的建立［J］.天津中医药，2005，22（4）：326.
       
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       ［4］ 卢书伟，蔡皓东，崔振宇，等.脂肪肝的药物治疗［J］.中国新药杂志，2001，10（12）：937.
       
       ［5］ Falck-Ytter Y,Younossizm,Mmrchisinig, et al.Clinical features and natural history of non-alcoholic steatosis syndromes［J］.Sem in Liver Dis, 2001, 21: 17.
       
       ［6］ 沃兴德，洪行球，魏佳萍，等.姜黄醇提取物对高脂血症患者脂代谢及肝肾功能的影响［J］.浙江中医学院学报，1999，23（1）：20.
       
       ［7］ 倪燕君，刘厚钮，张顺才，等.肝脂酶、脂蛋白脂肪酶在脂肪肝发病中的作用［J］.中华消化杂志，1999,19(5):324.