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       【摘要】 
       目的研究复方护肝口服液对小鼠急性化学性肝损伤的保护作用。方法分别采用四氯化碳（CCl4）和D-半乳糖胺（D-GlaN）建立小鼠急性肝损伤模型，测定各组动物血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性，并测定肝匀浆丙二醛（MDA）含量。结果在CCl4肝损伤实验中，复方护肝口服液高、中、低剂量组ALT，AST和MDA均比模型组明显降低(P<0.01)；在D-半乳糖胺肝损伤实验中，高剂量组血清AST比模型组降低（P<0.05），MDA和ALT均比模型组明显降低(P<0.01)；中、低剂量组AST，ALT比模型组均降低（P<0.05），MDA则明显降低（P<0.01）。结论复方护肝口服液对小鼠急性化学性肝损伤有一定的保护作用。
       【关键词】  复方护肝口服液； 肝损伤； 四氯化碳； D-半乳糖胺
       Protective Effects of Compound Hugan Oral Solution on  Acute Chemical Hepatic Injury in Mice
        LI Li1, MO Yisheng2, WANG Dongmei2 , WANG Naiping1,  ZHANG Xingshen1, PANG  Xuequn3
        （1.  Guangxi Traditional Chinese Medical University, 2. Dept. of Pharmacology, The Third Affiliated Hospital of Guangxi Medical University , Nanning 530001, China； 3. A Pharmacy Apprentice in 2007, Cuangxi Traditional Chinese Medical University, Nanning 530001, China）
        Abstract：ObjectiveTo study the protective effects of Compound Hugan Oral Solution on acute chemical hepatic injury in mice. MethodsThe models of CCl4 and DGlaN induced liver injury in mice were used to study the protective effects of Compound Hugan Oral Solution. The activities of ALT, AST and MDA were detected. ResultsIn the experiment induced by Carbon tetrachloride , ALT , AST and MDA in the high, middle and low dosage groups decreased as compared with the model group (P<0.01). On the experiment induced by D-galactosamine, AST was decreased(P<0.05) in the high dose group as compared to the model group, and AST ,MDA were decreased (P<0.01). In the middle and low dosage group, ALT and AST were decreased (P<0.05), MDA was decreased markedly (P<0.01). ConclusionCompound Hugan Oral Solution has good protective effects on acute chemical hepatic injury in mice.
        Key words：Compound Hugan Oral Solution ;    Hepatic injury;  Carbon tetrachloride ;    D-galactosamine
        复方护肝口服液由茵陈、栀子、苍术、车前草等多味中药组成，为民间验方，曾作为医院制剂应用于临床，对肝炎具有一定的治疗效果。复方中茵陈Artemisia capillaris Thunb.是临床常用的利胆退黄中药，具有利胆、保肝、解热、镇痛、消炎、扩张冠状动脉、降压、利尿、平喘、抗凝以及预防辐射等作用，也能使小鼠肝P450含量增加和肝/体重比增大 ［1］；栀子来源于茜草Rubiaceae 植物栀子Gardenia jasmi noides Ellis 的干燥成熟果实，可退黄疸、利胆、有明显的利胆作用和保肝作用，可使模型小鼠ALT活性下降,肝细胞坏死、肝细胞变性等明显改善［2］；苍术为菊科植物茅苍术Atracty lodes. lancea ( Thunb. ) DC. 或北苍术A tractylodes chinensis (DC. ) Koidz. 的干燥根茎［3］，味甘、苦,性温,归脾、肾、肝经［4］。现代药理学研究表明,苍术具有抗溃疡、抗心律失常、降血压、利尿、保肝、抗炎、抗菌等作用［3］；车前草Plantago asiatica L.为车前科车前属多年生草本，以种子和全草入药［5］。现代研究表明车前草具有利尿、镇咳、平喘、祛痰、抗炎、护肝等作用［6］。本实验采用CCl4，D-GalN 建立小鼠急性化学性肝损伤模型，研究该复方的保护作用及其作用机制，为其进一步开发应用奠定实验基础。
           1  器材
        1.1   动物 清洁级小鼠,雌雄各半，体重（20±2）g,由广西中医学院实验动物中心提供，桂医动字11004号。
        1.2   药物与试剂 将复方中的中药用水提取两次，过滤后浓缩至适量备用。联苯双酯，广州星群（药业）股份有限公司，批号：DF40126。四氯化碳(CCl4)，分析纯，重庆川江化学试制厂，批号：20050426；D-半乳糖胺(D-GlaN),启东就丰工贸有限公司 ，批号：20060307。丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定试剂盒,天门冬氨酸氨基转移酶(AST)测定试剂盒，丙二醛(MDA)测定试剂盒，均由南京建成生物工程研究所提供。
        1.3   仪器 紫外可见光分光光度计：Agilent8453；高速微量离心机：LG16-W，北京医用离心机厂；高速低温离心机：德国Biofuge strutos；超声波细胞破碎机：JY92-IID，宁波新芝科器研究所。
           2    方法
        2.1  对CCl4致急性肝损伤的影响 取健康小鼠72只，雌雄各半，体重（20±2）g，随机分为6组，每组12只，分别为正常对照组、模型组、联苯双酯对照组（200mg/kg）、复方护肝口服液高剂量组(30g生药/kg)、复方护肝口服液中剂量组(15g生药/kg)和复方护肝口服液低剂量组(7.5g生药/kg)，分别灌胃给药，复方护肝口服液高、中、低剂量、联苯双酯均按0.2ml/10g给药，正常组和模型组灌胃给蒸馏水0.2ml/10g，连续7d，1次/d。于末次给药8h后，除正常对照组外，其余各组均腹腔注射0.08%CCl4花生油溶液0.1ml/10g，禁食过夜不禁水，16h后全部小鼠摘眼球取血，离心，分离出血清，测定ALT，AST。采血后,迅速解剖,取出肝脏，在同一肝小叶上取一小块肝组织用冰冷生理盐水漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重，加生理盐水制成10%肝匀浆，测其肝匀浆中MDA含量。
        2.2  对D-GlaN致急性肝损伤的影响 动物分组及给药方法同“2.1”项。于末次给药8 h后，除正常对照组外，其余各组均腹腔注射D-GlaN溶液（450 mg/kg）0.1 ml/10 g，禁食过夜不禁水，动物处理及指标测定方法同“2.1”项。
        2.3   数据处理 所有数据均以±s表示，采用t检验进行统计学处理。
       3   结果
        3.1  对CCl4致小鼠急性肝损伤的影响 各组血清中ALT，AST和MDA含量测定结果详见表1。表1  复方护肝口服液对CCl4致急性肝损伤小鼠血清ALT，AST 和肝匀浆MDA的影响与正常组比较, △△ P<0.01;与模型组比较, **P<0.01；n=12
        由表1可知，CCl4模型组小鼠ALT，AST和MDA含量明显高于正常对照组(P＜0.01),表明造模成功。复方护肝口服液高、中、低剂量组小鼠各项指标较CCl4 模型组均有显著下降(P＜0.01)。结果提示复方护肝口服液对四氯化碳造成的急性肝损伤有一定的保护作用。
        3.2  对D-GlaN致小鼠急性肝损伤的影响各组血清中ALT，AST和MDA含量测定结果见表2。表2  复方护肝口服液对D-GlaN致急性肝损伤小鼠血清ALT，AST和肝匀浆MDA含量的影响与正常组比较, △△ P<0.01;与模型组比较, *P＜0.05，**P<0.01；n=12
        由表2可知，D-GlaN模型组小鼠ALT，AST和MDA含量明显高于正常对照组(P<0.01)，表明造模成功。复方护肝口服液高、中、低剂量组小鼠各项指标较D-GlaN 模型组均有显著下降(P＜0.05，P＜0.01)。结果提示复方护肝口服液对D-半乳糖胺造成的急性肝损伤有一定的保护作用。
           4  讨论
        本实验采用CCl4和D-GlaN建立小鼠急性肝损伤模型。CCl4是经典的化学性肝损伤动物模型的肝毒物，D-GlaN肝损伤模型的病理改变与人类病毒性肝炎的病理改变较为接近，且此两种模型均可造成实验动物血清ALT，AST升高和肝组织结构病理改变，重复性好。资料表明CCl4致肝损伤是典型的脂质过氧化［7］ ，CCl4进入机体后，经肝微粒体酶细胞色素P450催化生成三氯甲基自由基(CCl3 )和三氯甲基过氧自由基(OOCCl3)，二者能与亚细胞结构的脂质和蛋白质发生共价结合，抑制肝细胞内的甘油三酯以极低密度脂蛋白的形式运出肝外，造成肝细胞内质网等膜性成分的脂质过氧化，脂质分解代谢紊乱，从而损伤肝细胞，胞质液成分ALT，AST等释至胞外，血清ALT，AST活性明显增高 ［8］ 。因此，血清中的ALT，AST水平的高低可以敏感反映肝细胞膜的受损程度。本实验CCl4和D-GlaN肝损伤组与正常对照组比较，ALT和AST明显升高，给予复方护肝口服液后ALT和AST明显下降，提示复方护肝口服液具有保护肝细胞膜的作用,能使细胞膜通透性降低，抑制细胞内酶释放，从而改善肝损伤,促进肝功能的恢复。D-GlaN损伤肝脏的机制是D-GlaN为肝细胞毒剂，进入体内后，与磷酸尿苷(UDP)结合形成UDP-半乳糖胺，致使磷酸尿苷耗竭，从而使依赖其生物合成的核酸、糖蛋白、脂糖等物质合成受抑制，细胞器受损、膜损害、钙离子内流入细胞。此外，D-GlaN还可通过产生自由基引起脂质过氧化，造成肝细胞损伤；还可使肥大细胞脱颗粒释放组胺，造成结肠水肿，使肠源性内毒素吸收增加，引起内毒素中毒损伤肝脏。MDA为脂质过氧化的最终产物，可严重破坏细胞膜结构，导致细胞肿胀坏死，其血清及组织中的含量反映了组织过氧化损伤的程度和细胞受损程度［9］。在本实验中经CCl4和D-GlaN造模的小鼠肝组织中的MDA含量明显升高，反映了脂质过氧化与肝损伤的关系，给予复方护肝口服液后，CCl4和D-GlaN肝损伤小鼠肝组织中MDA含量明显下降，说明复方护肝口服液对清除自由基，抑制脂质过氧化反应，维持细胞质膜的正常结构，避免细胞受损有一定的作用。
        实验结果表明， 复方护肝口服液对化学性肝损伤有多种环节的保护作用，其机理可能是降低肝内脂质过氧化反应，清除自由基，保护肝细胞膜，维持膜的正常通透性等。以上研究为复方护肝口服液在临床上的应用奠定了药理学基础。
       【参考文献】
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