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       【摘要】 
       目的建立薄层-紫外分光光度(TLC-UV)法测定多序岩黄芪根中芒柄花素的含量。方法在25℃、最大吸收波长248 nm处测定芒柄花素的吸收度。结果此法线性范围0.01～0.06mg/ml内，r=0.999 6，平均回收率为97.55%，RSD为1.6%（n=8）。结论操作方法简便，灵敏度高，结果准确。
       【关键词】  多序岩黄芪根； 芒柄花素； 薄层-紫外分光光度法
       Determination of Formononetin in Hedysarum Polybotrys  Hand.Mazz. Herd by TLCUV Spectrophotometry
        HAI Liqian·taoerdahong，KANG Xinping，ZENG Lingli， HU Dabaierdi
        (School of Pharmacentical Sciences, Xinjiang Medical University, Urumqi 830054, China)
        Abstract:ObjectiveTo develop a TLC-UV method for the deterncination of formononetin sequence Hedysarum roots in.MethodsThe formononetin was extracted by methanol and was separated with TLC,the content of Formononetin was determined at 248 nm with UV spectrophotometry method.  ResultsThe standard curve was y=7.086x～0.019 3，r=0.999 6，the average recovery was 97.75%，and RSD was 1.6%. ConclusionThe method is simple，and sensitive.
        Key words:Hedysarum Polybotrys；  Hand；  Formononetin；  TLCUV
        多序岩黄芪Hedysarum polybotrys Hand.-Mazz.为豆科（Leguminosae) 岩黄芪属植物。以根入药，因其根皮呈红棕色，故名红芪。主要有补气、利尿、托毒、排脓、敛疮生肌等功效。主治气短、心悸、慢性肾炎等［1］。多序岩黄芪主产于甘肃、新疆、青海、内蒙古等地，资源丰富。据文献报道，芒柄花素（Formononetin）具有雌激素样、抗氧化及提高免疫力等作用。多序岩黄芪根中主要的化学成分芒柄花素含量高，用TLCUV法测定多序岩黄芪根中芒柄花素含量尚未见报道。本文报道用TLCUV法测定多序岩黄芪根中芒柄花素含量。
        1  仪器与材料
        1.1  样品来源  多序岩黄芪购于甘肃，由北京大学药学院天然药物学系杨虎彪教授鉴定。
        1.2  仪器与试剂  S54紫外分光光度仪(上海棱光)；超声清洗仪；硅胶G薄层板（青岛海洋）；微量注射器（上海高鸽工货有限公司）；芒柄花素对照品（中国药品生物制品检定所）；所用试剂均为分析纯。
           2  方法与结果
        2.1  对照品溶液的制备 精密称取干燥恒重的芒柄花素对照品20 mg于50 ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0.4 mg/ml标准对照液，贮存备用。
        2.2  供试品溶液的制备 精密称取多序岩黄芪根粉2 g，置100 ml容量瓶中，加甲醇20 ml，超声提取30 min，温度40℃，提取3次，过滤，摇匀。再精密吸取2 ml至25 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，贮存备用。
        2.3  芒柄花素的薄层层析展开  吸取天山岩黄芪提取液与芒柄花素对照品同时点在薄层板上，以石油醚∶醋酸乙酯（1∶1）为展开剂展开，距前沿一定距离时取出，晾干，在紫外灯下观察。色谱图见图1。图1看出，天山岩黄芪中存在芒柄花素和其它化学成分。
        图1  芒柄花素的薄层展开图
        2.4  芒柄花素波长的选择精密吸取1 ml芒柄花素对照品溶液置于25 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，以甲醇为空白溶液，在S-54紫外分光光度计上扫描吸收光谱图，扫描波长范围200～400 nm，得知芒柄花素在214，248，302 nm处有吸收峰，248 nm处吸收峰最大，则选择248 nm为测定波长。见图2。
        图2  芒柄花素紫外光谱图
        2.5  标准曲线的绘制   分别精密吸取芒柄花素溶液0.5，1，1.5，2，2.5，3 ml置于10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，以甲醇为空白溶液，置于紫外分光光度计下，在248 nm处测定吸光度，以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标,绘制标准曲线,回归方程：Y=7.028 6X-0.019 3，相关系数r=0.999  6，所以，芒柄花素在0.01～0.06 mg/ml浓度范围内，吸收度与点样浓度之间呈良好的线性关系。
        2.6  精密性实验 精密吸取供试品溶液10 μl，点于薄层板上，以石油醚∶醋酸乙酯（1∶1）为展开剂展开，晾干，在紫外灯下观察并定位斑点位置，刮下对照品和与对照品相同位置的供试品斑点的硅胶，置于容量瓶中，加适量甲醇，超声洗脱15 min，过滤滤液至10 ml的容量瓶中，用甲醇定容，于波长248  nm处连续测定5次吸光度，计算RSD值得0.8%，结果表明，本方法精密性良好。 
        2.7  稳定性实验  精密吸取供试品溶液与对照品溶液品10 μl，点于薄层板上，按“2.6”项下方法处理，于波长248 nm处连续测定0，0.5，1，2，3，4，5，6 h范围内的吸光度，计算RSD值得1.8%，说明样品在6 h内芒柄花素的吸收度较稳定。
        2.8  重复性实验  精密吸取供试品溶液10 μl，点于薄层板上，共5份，按“2.6”项下方法处理，于波长248 nm处测定吸收度，计算RSD值为0.3%，说明样品重复性较好。
        2.9  回收率实验  精密称取红芪根粉1.0 g，共8份，分成4组 每组2份。第1组作为本底值，在第2组，第3组，第4组中分别加入芒柄花素对照品溶液2.0，4.0，6.0 ml，按“2.6”项下方法处理，于波长248 nm处测定吸收度。根据回收率公式计算，平均回收率为97.55%，RSD=1.6%（n=8）。
        2.10   红芪中芒柄花素的含量测定精密吸取供试品溶液10 μl，共5份，按“2.6”项下方法处理，于248 nm处测定吸光度，计算含量，结果是多序岩黄芪根中芒柄花素的含量为28.80 μl/ml。
        3  讨论
        TLC-UV法测定序岩岩黄芪根中的芒柄花素含量，方法简便快速，精密度、稳定性和重复性均良好，可作为准确含量测定用。本实验可为多序岩黄芪的产品开发提供一定的理论依据。
       【参考文献】
         ［1］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：104.