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       【摘要】 
       目的优选枸杞提取工艺。方法 以枸杞水提液中多糖含量为指标，采用均匀设计法筛选最佳提取工艺。结果枸杞提取工艺最好参数条件为加水量12倍，浸泡时间20 min，煎煮时间20 min，水提液枸杞多糖含量为333.4 mg。结论实验结果可为枸杞提取工艺的确定提供依据。
       【关键词】  枸杞； 提取工艺； 均匀设计
       Uniform Design Method for Optimizing the Extraction Technology of Lycium Barbarum L.
        ZHANG Yijun1, CHEN Li2
        （1.The First Hospital of Medical Institute of Shihezi University, Xinjiang,Shihezi  832008，China; 2.Hospital of Jinghe County, Xinjiang 833300, China）
        Abstract：ObjectiveTo optimize the extraction technology of Lycium barbarum L. MethodsSelect the contents of Lycium barbarum L. polycose from the extract solution as the target,use the uniform design method to optimize the extraction technology. ResultsThe optimum extraction technology were quantity of water 12times, soak time was 20min, decoction time was 20 min. The contents of Lycium barbarum L. polycose was 333.4mg.ConclusionThe result of this experiment can provide reference to the extraction technology of Lycium barbarum L.
        Key words：Lycium barbarum L.；  Extraction technology；  Uniform design
        枸杞为茄科植物宁夏枸杞Lycium barbarum L.的干燥成熟果实，味甘、性平，具有滋补肝肾、益精明目的功效［1］，在国内保健食品中使用率居首位［2］，现代药理研究证明枸杞具有免疫调节、降血糖、降血脂、抗衰老、抗肿瘤等作用，其药理作用与所含枸杞多糖（LBP）有关［3］。制剂中枸杞多糖含量与枸杞的提取工艺密切相关，因此选择适当的提取工艺对于提高制剂质量至为重要。文献报道的枸杞提取工艺筛选方法一般是3因素3水平的正交实验，本试验采用3因素9水平的均匀设计，以水提液的枸杞多糖含量为指标，以加水量、浸泡时间、煎煮时间为指标筛选枸杞最佳提取工艺。
           1  仪器与材料
        1.1  仪器250 ml烧杯、100 ml容量瓶、10 ml离心管、10 ml具塞刻度试管、1 ml移液管、5 ml移液管、可调温电炉（北京市光明医疗仪器厂）、十万分之一天平（北京赛多利斯天平有限公司）、UV2401PC紫外分光光度计（日本岛津）、均匀设计处理软件Uniform Design Version 2.20。
        1.2   试药枸杞药材购自石河子天方恒德医药公司，经石河子大学药学院中药系李鹏教授鉴定为茄科植物宁夏枸杞的果实。苯酚（重蒸）、浓硫酸均为分析纯。
        2  方法与结果
        2.1  供试液的制备精密称取枸杞药材6 g，称9份，按实验设计方案进行煎煮，煎两次，合并两次煎液，滤过，定容至100 ml，精密量取1.00 ml，置10 ml离心管内，加无水乙醇5 ml，混匀，4 000 r/min离心10 min,弃上清，沉淀加无水乙醇3 ml，混匀，4 000 r/min离心10 min,弃上清（重复一次），将离心管内的多糖用水溶解，转移至25 ml容量瓶定容，即得供试液。
        2.2  标准液的制备 精密称取105 ℃干燥至恒重的无水葡萄糖标准品25   mg用蒸馏水溶解后定容至250 ml量瓶中，摇匀即得（每1ml中含无水葡萄糖0.1 mg）。
        2.3  最大吸收波长的确定   准确吸取供试液和标准液各0.2 ml，分别加水至2.00 ml,各精密加入5%苯酚溶液1.00 ml摇匀，迅速精密加入浓硫酸5.00 ml，放置5 min，置沸水浴加热15 min取出，再置冰水中冷却15 min。精密量取蒸馏水2.00 ml，自“各精密加入5%苯酚”起同法操作，作为空白对照，在紫外分光光度计上于400～800 nm范围扫描，结果供试液与标准液在490 nm均有最大吸收，所以选择490 nm作为最大吸收波长。
        2.4  标准曲线的制备准确吸取标准溶液0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00，1.20 ml分别置具塞试管中，分别加水至2.00 mL，各精密加入5%苯酚溶液1.00 ml摇匀，迅速精密加入浓硫酸5.00 ml，放置5 min，置沸水浴加热15 min取出，再置冰水中冷却15 min；精密量取蒸馏水2.00 ml，同法做空白对照，在490 nm处测定吸光度，得吸光度和质量浓度得回归方程A=58.419C+0.023 4，R2=0.999 5。结果表明葡萄糖浓度在0.0015～0.012 5 mg·ml-1范围内与吸光度呈良好线性关系。
        2.5  精密度实验  精密量取样品液0.2 ml按“2.3”项下方法操作，平行测定5次，RSD为0.5%,结果表明该方法精密度良好。
        2.6  重复性实验取样品液5份，每份0.2 ml按“2.3”项下方法操作，测定，RSD为3.6%,结果表明该方法重现性良好。
        2.7  回收率实验精密吸取同一供试溶液0.2 ml，取9份，每3份分别精密加入葡萄糖标准液0.2 ml、0.4 ml、0.6 ml，按“2.3”项下方法测定，计算回收率，平均回收率为97.6%，RSD为2.46%，表明该法回收率良好。
        2.8  均匀实验设计 
        2.8.1   指标、因素、水平的确定 选择水提液中枸杞多糖含量作为指标，以加水倍数、浸泡时间、煎煮时间作为考察因素，每个因素取9个水平，因素水平表见表1。 
        2.8.2  实验安排及结果选用U9（95）表安排试验，并按“2.1”项下方法制备供试液，分别精密吸取1～9号各0.2 ml，按“2.3”项下方法操作，测定供试液多糖含量。均匀实验安排及结果见表2。表1  枸杞子均匀设计实验因素水平表2  枸杞子浸提工艺均匀设计实验安排及结果  y为实测多糖含量mg，＾y为计算多糖含量mg，相对百分误差＝（y-＾y）/y 100％
        2.9  均匀设计实验结果处理与工艺筛选
        2.9.1  均匀设计实验结果处理 采用Uniform Design Version 2.20对实验结果进行逐步回归分析，得回归方程Y=278.335 2+12.609 3A-1.491 2B-2.196 1C，剩余标准差S=6.760 1，复相关系数R=0.996 9，检验值F=158.058 2，自由度f1=3，f2=3，F检验的临界值Fα(3，3)=5.39。F>Fα，回归方程显著。
        2.9.2   工艺参数优化及验证实验  从回归方程可以看出因素A项的回归系数为正，说明加水量取水平的上限值为好，因素B、C的回归系数为负，说明浸泡与煎煮时间取水平的下限为好。根据回归方程进行优化预测：A=12倍，B=20 min，C=20 min，预测的转化率＝355.9 mg。按上述优化条件精密称取枸杞药材6 g，加水12倍，浸泡20 min，煎煮20 min，煎两次，结果：煎煮液的枸杞多糖含量为333.4%，相对百分误差为6.7％。
       3  讨论
        均匀设计实验结果处理采用逐步回归的方法，有时由于实验误差点的存在会导致得到的回归方程不显著，这就需要判断误差点并将其删除再进行回归计算，误差点一般通过计算指标的实验值与回归计算值之差的相对百分误差来判断 ［4］。本实验结果初步回归计算得到的回归方程不显著，通过分析得到的相对百分误差项，发现7号与8号相对百分误差较大，将其作为误差点进行试删除，得到了线性关系很好的回归方程。其余7个实验点的相对百分误差均小于10%（见表2相对百分误差项），说明回归模型较好，7、8号实验点确系误差点。
        验证实验结果得到的枸杞多糖含量高于所有均匀设计实验点，参数优化成功。最好参数条件为A=12倍，B=20 min，C=20 min，枸杞多糖含量为333.4 mg。
       【参考文献】
         ［1］ 国家药典委员会.中国药典［S］.北京:化学工业出版社,2004:174.
       
       ［2］ 党 毅,肖 颖.中药保健食品研制与开发［M］.北京:人民卫生出版社,2002:2.
       
       ［3］ 植 飞,郑卫平,陈 平,等.枸杞多糖水提工艺的优选［J］.中药材,2004,27(12):948.
       
       ［4］ 李瑞雪.均匀设计在药物研究开发中的应用［M］.成都：四川科学技术出版社，2000：87.