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       【摘要】 
       目的通过感舒的体内抗菌实验，观察其抗菌作用，为其治疗上呼吸道感染性疾病提供实验依据。方法金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌分别培养18h增殖后，用5%干酵母溶液稀释成不同浓度，分别对小鼠体内腹腔注射，选用80%～100%致死率的金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌的5%干酵母溶液，感染给药小鼠，观测给药小鼠在染菌后7 d内的平均存活天数和死亡率。结果中药感舒的1.00，0.50，0.25 g/kg剂量均能不同程度的抑制金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌感染小鼠的死亡率并延长平均存活天数。结论中药感舒具有一定的体内抗菌作用，与临床治疗上呼吸道感染效果相符。
       【关键词】  感舒； 体内抗菌； 金黄色葡萄球菌； 肺炎链球菌
       Study on the Antibacterial Effect of Ganshu in Infected Mice Body
        LIN Yanjun1* ，MIAO Shuyi1 ，LI Jiachuan1，ZHANG Yanyan2
        （1.Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chendu 611730，China; 2.Luzhou Medical College,Luzhou 646000，China）
        Abstract：ObjectiveThe antibacterial effect of Ganshu in infected mice was studied in order to provide experimental evidence for its clinical application.MethodsStaphylococcus aureus (SA) and Streptococcus pneumoniae (SP) were cultured for 18 hours, and then 5% yeast liquor was added each of them to a suitable level which made 80%～100% in fected mice death. Then each of the suitable bacterial liquor were inocutated into the abdominal cauity of mice who had given corresponding medicines for 3 days. Death rate and average survival time were both observed and analyzed within 7 days after in efected. ResultsGanshu high dose，middle dose and low dose could all depress the death rate and lengthen the average survival time of mice infected by SA and infected by SP. ConclusionThe 3 doses of Ganshu have remarkable effect on mice infected by SA and SP, showing its antibacterial effect in vivo.
        Key words：Traditional Chinese medicine;  Antibacterial effect in vivo;  Staphylococcus aureus;  Streptococcus pneumoniae
        感舒主要由鱼腥草、麻黄、甘草等组成，具有清热解毒之功效，临床上主要用于外感风热所致发热、咽喉肿痛、咳嗽等上呼吸道感染。现代医学研究表明，上呼吸道细菌感染以肺炎球菌、溶血性链球菌、葡萄球菌和流感嗜血杆菌等为多见。本实验应用中药感舒对金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌进行了体内抗菌实验。
        1  材料
        1.1   药物中药感舒由成都中医药大学提供，临床成人每日用量为3g。双黄连口服液，由哈药集团三精制药股份有限公司生产，批号07031324。头孢拉定胶囊，由江苏亚邦强生药业有限公司生产，批号：061226。
        1.2   动物KM小鼠，体重为（20±2）g，雌雄各半，由四川省医学科学院实验动物研究所生产，生产合格证号为SCXK（川）2004-15。
        1.3  菌株金黄色葡萄球菌临床分离株MSSA05-4，肺炎链球菌S-1，由成都中医药大学附属医院提供。
        1.4  试剂与设备干酵母（上海长琪贸易有限公司，批号20060125）。超净工作台(苏州安泰空气技术有限公司，NO.20010406),WH-2微型旋涡混合仪(上海泸西分析仪器厂)，立式自动电热压力蒸气灭菌器(LDZX-40BI型，上海申安医疗器械厂)。
        1.5  统计方法死亡数据为分类资料，用SPSS13.0 for windows 统计软件的fisher"s exact test检验进行统计分析。
        2  方法与结果
        2.1  中药感舒对金黄色葡萄球菌感染小鼠的保护作用
        2.1.1  预试验将金黄色葡萄球菌接种到普通肉汤培养基中培养18 h后［1］，进行细菌计数［2］，计数结果为9.2×109 CFU/ml，4℃冷藏待用。
        选取小鼠36只，随机分为6组，每组6只，雌雄各半，分别为5个菌液稀释组和一个对照组。每组分别腹腔注射以5%干酵母［3］生理盐水溶液稀释的菌溶液（稀释度分别为10-1，10-2，10-3，10-4，10-5）(0.5ml/只)以及5%干酵母生理盐水溶液(0.5 ml/只)作为对照，观察染菌后2 d内动物的死亡率，并选取感染死亡率为在80%～100%的稀释浓度作为正式实验的感染菌液浓度［4］。
        预试结果：5%干酵母对照组无动物死亡，10-4稀释浓度的菌液（即菌落浓度为9.2×105 CFU/ml）致死率为83.33%，确定为本次实验感染的菌液浓度。
        2.1.2  正式实验选取健康小鼠140只，体重为18～22 g，雌雄各半，随机分为7组，即空白对照组、模型对照组、双黄连对照组、头孢拉定对照组,感舒高剂量组、感舒中剂量组和感舒低剂量组。各组动物按剂量连续灌胃给药3 d（空白对照组和模型对照组给予等量蒸馏水，头孢拉定对照组在感染菌前1 d开始给药1次），1次/d。感染前小鼠禁食12 h，第3天，给药后30 min，根据菌株毒力的预试情况选用使80%～100%小鼠死亡的金黄色葡萄球菌的干酵母悬液（9.2×105 CFU/ml）0.5 ml/只，给小鼠腹腔注射造成感染（空白对照组注射等量干酵母生理盐水溶液）。感染后6h再给药1次，继续给药1 d［5］，观察和记录各组动物感染后7d内的反应情况以及死亡数。结果见表1。
        2.1.3  结果结果表明，与空白组对照比较，模型对照组的动物死亡率为83.3%（P<0.01），表明浓度为9.2×105 CFU/ml金黄色葡萄球菌的干酵母悬液能明显引起小鼠死亡，造模成功。与模型对照组比较，两个阳性药组，即双黄连口服液组与头孢拉定组死亡率明显降低（P<0.05或P<0.01），且平均存活天数要明显增加；感舒高、中、低各剂量组死亡率明显降低（P<0.05或P<0.01），且平均存活天数较模型组小鼠要明显增加。提示感舒具有对抗金黄色葡萄球菌对小鼠感染致死的作用，显示了其一定的体内抗菌作用。表1  感舒对金葡菌感染小鼠的保护作用
        与空白对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；n=18
        2.2  中药感舒对肺炎链球菌感染小鼠的保护作用
        2.2.1  预试验方法同“2.1.1”项下。预试结果：5%干酵母对照组无动物死亡，10-4稀释浓度的菌液（即菌落浓度为6.3×106 CFU/ml）致死率为85.7%，符合致死率在80%～100%之间试验菌液感染要求，确定为本次实验感染的菌落浓度。
        2.2.2  正式实验方法同“2.1.2”项下。见表2。
        2.2.3  结果表2结果表明，与空白对照组比较，模型对照组的动物死亡率为90.0%（P<0.01），表明浓度为6.3×106 CFU/ml肺炎链球菌的干酵母悬液能明显引起小鼠死亡，造模成功。与模型对照组比较，双黄连对照组和头孢拉定对照组小鼠的死亡率明显降低（P<0.01），且平均存活天数增加；感舒3个剂量组的小鼠死亡率均明显降低（P<0.01），且平均存活天数均增加。提示感舒对肺炎链球菌致小鼠感染死亡具有明显的保护作用，显示了感舒具有一定的体内抗菌作用。表2  感舒对肺炎链球菌感染小鼠的保护作用 与空白对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；n=20
           3  讨论
        体内抗菌实验［2］，也即药物对感染动物的预防和保护作用研究，不仅能反映药物对细菌固有的直接作用，还能反映药物对机体反应性的影响，特别是非特异抵抗力的影响、药物达到感染部位的能力、机体对药物的灭活和代谢等，因此体内抗菌实验是最重要的抗菌作用的研究方法，很多情况下是判定药物有无临床价值的抗菌作用的最主要的指标，故体内抗菌实验对于研究中药的抗微生物作用有重要的意义。
        我们经过多次预实验，我们发现小鼠体内感染金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌的急性死亡期主要集中在48h之内，之后存活小鼠可逐渐恢复健康，在正式实验前，可提前2天进行细菌致死浓度的预试，过早预试会导致菌液放置过久而毒力改变，同时动物饲养时间延长而导致动物个体差异过大；过晚预试则来不及观察细菌的毒力情况。因此，选择正式实验前两天进行预试比较合适。另外，死亡动物尸解发现，金黄色葡萄球菌还可以引起明显的小鼠小肠炎性坏死，肺炎链球菌可引起肺部感染坏死，但此2项指标是否能作为今后体内抗菌实验的客观指标有待进一步研究。
        感舒为纯中药复方制剂，实验表明该药对金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌感染均具有不同程度的保护作用，显示了其具有一定的体内抗菌作用。同时，在另一实验中，观察了该药对鼠流感病毒FM1株感染小鼠肺指数的影响，结果显示给药组小鼠肺充血水肿等炎性病变减轻，肺指数明显降低，显示了其一定的体内抗病毒作用，均与其临床上治疗上呼吸道感染性疾病效果相符。
       【参考文献】
         ［1］ 钱存柔,黄仪秀.微生物学实验教程［M］.北京:北京大学出版社,1999.
       
       ［2］ 陈 奇.中药药理研究方法学［M］.北京:人民卫生出版社,1993:251,278.
       
       ［3］ 曹 杰,屠 静,邓 娟.干酵母悬液对肺炎链球菌荚膜恢复的影响［J］.中华微生物学和免疫学杂志,2004,24(12):1003.
       
       ［4］ 徐叔云,卞如濂,陈 修,等.药理实验方法学,第3版［M］.北京:人民卫生出版社,2002:1647.
       
       ［5］ 王银叶,刘晓岩,刘光慧,等.感冒康宁颗粒抗菌、抗病毒及解热作用研究［J］.中国新药杂志.2003,12(12):1005.