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       【摘要】 
       目的通过对种子生活力等指标的测定，为完善水飞蓟种子检验标准操作规程提供实验依据。方法采用2,3,5-氯化三苯四氮唑(TTC)染色法测定种子的活力。结果种子生活力测定最佳条件：温度为40℃，TTC浓度为0.4%，染色时间为30min。结论TTC染色率为95%。
       【关键词】  水飞蓟； 种子； 2，3，5-氯化三苯四氮唑； 生活力
       Determination of the  Viability of  Silybum marianum Seed Produced in Ningxia
        DONG Lin, FU Xue-yan, QAN Hong-feng, XU Li-sheng
        （Ningxia Medical College, Yinchuan, 750021, China）
        Abstract：ObjectiveTo provide the experiment for consummate the Silybum marianum seed viability certification standard through the target determination of the seed and so on. MethodsDetermine the seed viability by the TTC dyeing method. ResultsThe optcivul conltions of Seed viability was as fouows: the temperature was 40 ℃, the TTC density was 0.4%, and the dyeing time was 30min. ConclusionTTC dyeing rate is 95%.
        Key words：Silybum marianum;  Seed;   TTC;   Viability
        种子活力是种子生理学的一个新领域［1］，对药用植物而言，种子活力的高低不仅会影响植物的生长，而且直接影响到药材质量，以及人们的用药安全。目前，国内外对种子活力的研究局限于农作物、蔬菜种子，而对于中药材种子的研究报道还较少，这极大限制了中药材种子研究技术的发展。水飞蓟来源于菊科植物水飞蓟 Silybum marianum (L.) Gaertn.的干燥成熟果实，其性凉，味苦，归肝、胆经，具有清热解毒，舒肝利胆的功效。本实验对宁夏六盘山地区水飞蓟种子进行生活力等指标的测定，得到了较满意的结果。
           1   仪器与试药
        水飞蓟种子采自宁夏六盘山，经宁夏固原药检所鉴定为水飞蓟 Silybum marianum (L.) Gaertn.种子；2,3,5-氯化三苯四氮唑（TTC）试剂由北京中昊生物有限公司提供；稀甘油、水合氯醛试液均按《中国药典》2005年版Ⅰ部附录ⅩⅤB规定方法配制。
        Olympus双目显微镜；分析天平（1/103）（上海精密科学仪器有限公司）；DHJ-9140A型电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）。
        2   方法与结果
        2.1  种子净度的测定依据《GB/T 3543.3 农作物种子检验规程》，将样品分成净种子、废种子、其他植物种子、杂质4部分，分别称重（0.5 g以下精确至0.001 g，1～9 g者精确至0.01 g）。将所称量的各数据记录下来，按以下公式计算净度：
        种子净度（%）=（试样质量－废种子质量－夹杂物质量）/试样质量×100%。
        试样质量为4.98 g，废种子质量为0.579 2 g，夹杂物质量为0.241 5 g，由公式得种子的纯净度为83.5%。
        2.2  种子水分的测定依据《GB/T 3543.6 农作物种子检验规程》，采用恒温烘干法测定，首先精密称量恒重后的称瓶(M1)，然后精密量取药用植物种子鲜重(G)，均匀铺在称瓶里，将称瓶迅速放入烘箱中，保持（105±2）℃，5h后取出，放入干燥器冷却40 min后，称取称瓶的重量(M2)。以上称量重复3次，取其平均值，通过下列公式计算种子水分：水分（%）= G－(M2－M1)/G×100%。经称量，G=4.901 3 g，M1=39.860 9 g，M2=44.475 8 g，由公式得种子的水分为5.8%。
        2.3  千粒重的测定依据《GB/T 3543.7 农作物种子检验规程》，种子经过净度分析后，随机数取1000粒，重复3次称重。实验测得千粒重为28.0526g。
        2.4   生活力测定
        2.4.1  因素水平考察选择TTC溶液浓度、染色时间、染色温度3个因素，每个因素选择3个水平，设定因素水平表，见表1。表1   因素水平表
        2.4.2  溶液的配制称取磷酸二氢钾9.078 g，磷酸氢二钠11.876 g，分别溶于1 000 ml蒸馏水中，按体积比为2∶3混合，作为缓冲液；称取TTC药品1g，溶于100 ml缓冲液中，得1%TTC溶液，pH为6.5～7.5，存放于棕色试剂瓶中，放于暗处，备用。使用时以蒸馏水稀释成不同浓度。
        2.4.3   染色将浸好的种子沿中轴纵切（两部分均含胚及胚芽），放入培养皿中，每个培养皿中100粒。将不同浓度的TTC溶液滴入直至浸没种子，置恒温箱中观察。另取100粒种子放入100℃的沸水中蒸煮10 min后，取出，染色，作为参照。
        2.4.4   实验结果以染色率为指标进行分析，结果及方差分析见表2～3。表2  L9(34)正交实验结果表3  方差分析
        方差来源离差平方和自由度方差F值显著性PA203321016.527.85<0.05B17772888.524.34<0.05C7532376.510.32 D（误差）73236.5  
        F0.05(2,2)=19.0, F0.01(2,2)=99.0
        由R值可知，各因素对试验结果的重要次序为A>B>C，由方差分析可知，TTC溶液浓度和染色时间对染色率有显著性影响， 染色温度对染色率的影响无显著性差异，且温度升高到40℃以上，染色率有下降的趋势。综合各种因素，选定种子生活力测定最佳条件为A2B3C2，即TTC浓度为0.4%，染色时间为30 min，温度为40℃。
        2.4.5   种子生活力测定条件验证试验为考察上述测定条件，按该条件进行重复试验3次，测定水飞蓟种子染色率，结果平均得率为95%。
           3  讨论
        种子检验是保证种子质量的主要手段。统一标准的检验方法及程序是保证检验公证性和可靠性的前提条件［2］。目前我国的中药材种子只是药材生产中的一种副产品,无种子质量监督、检验和管理机构，种子检验研究也刚刚起步。种子活力是种子质量的一个综合指标，本实验通过对宁夏产中药材水飞蓟种子生活力等指标的测定，确定种子的纯净度、千粒重、水分及生活力，为完善水飞蓟种子检验标准操作规程提供实验依据。
       【参考文献】
         ［1］ 吴德敏.用生活力预测种子发芽率相关性实验研究［J］.中国种业,2003,4:31.
       
       ［2］ 颜启傅，毕辛华译.国际种子检验规程(1976 )［M］.北京:技术标准出版社,1980:3.