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       【摘要】 
       目的研究解酒降脂保肝汤对大鼠酒精性脂肪肝的预防及作用机制。方法用白酒和高脂饮食灌胃法制作大鼠酒精性脂肪肝模型，以解酒降脂保肝汤进行治疗，与东宝肝泰治疗组作对比观察。治疗1个月后处死大鼠，取血及肝组织，检测肝功能（ALT，AST)、血脂（TC，TG）及内毒素（ET）和丙二醛（MDA），并对各组大鼠行病理学检查。结果灌胃10周后大鼠形成酒精性脂肪肝，经解酒降脂保肝汤治疗1个月后，血清ALT，AST，TC，TG以及血浆ET，MDA均显著降低，肝脏脂肪变及炎症显著改善。结论解酒降脂保肝汤可有效地防治大鼠酒精性脂肪肝，推测护肝、抗炎、抗内毒素及改善脂质过氧化状态为其主要作用机制。
       【关键词】  酒精性脂肪肝； 解酒降脂保肝汤； 大鼠； 实验研究
        Protective Effects of JiejiuJiangzhiBaogan Decoction (JJBD) on Alcoholic Fatty Liver and its Mechanism
        WEI Mei， QIU Rongxian，CHEN Dan ，LIU Qiru
        （Luzhou  Medical College ,Luzhou ,Sichuan,646000，China）
        Abstract：ObjectiveTo study the protective effects of JJBD decoction on alcoholic fatty liver and  its mechanisms. MethodsNormal rats were intragastrically infused with white wine and high fat diet and executed after 1 month.Serum ALT, AST, TC, TG and plasma ET, MDA level were determined respectively, and pathological changes were determined . ResultsRat model of alcoholic fatty liver was induced successfully after 10 weeks. In the groups of JJBD decoction, the levels of ALT，AST，TC，TG，ET，MDA were decreased significantly, and steatosis state and inflammation of liver were improved. ConclusionJJBD decoction can prevent fatty degeneration and inflammation in alcoholic fatty liver, and its main mechanisms may involve in recovery of liver function, anti-inflammation, anti-endotoxin, and lipid peroxide inhibiting.
        Key words：Alcoholic fatty liver;  JiejiuJiangzhi Bao gan decoction;  Rats;  Experiment research
        近年来，我国酒精性脂肪肝的发病率呈上升趋势，其危害性已引起人们的广泛关注。现代医学对该病的治疗，除了戒酒、对症外，目前尚无特殊疗法，而中药复方制剂以其独特的优势发挥着重要作用。我们对泸州医学院中西医结合肝病专家孙同郊教授在长期临床实践中总结出来的治疗酒精性脂肪肝有效经验方——解酒降脂保肝汤进行了实验研究，观察其对酒精性肝病的预防效果，揭示其治疗酒精性脂肪肝的作用机制，为临床应用提供实验依据，并为进一步研究和新药开发奠定基础。
           1  材料
        SPF级SD大鼠50只，雄性，体重（200±20）g，由四川大学动物科提供；解酒降脂保肝汤（由泸州医学院附属中医院制剂室生产，批号20060507）；东宝肝泰（由中国通化东宝药业股份有限公司生产，批号20060123）。红星二锅头酒（北京酿酒总厂生产，浓度：56度，相当于10.2 mol/L）；高脂饲料（自制，普通饮料/猪油=85/15，每1 000 g饲料中加入15 g硫酸亚铁、10 g猪胆酸钠、50%胆固醇充分混匀，制成成形饲料，60℃烤干）。鲎试剂药盒（购自上海伊华医学科技有限公司，批号20060402）；MDA试剂盒（购自南京建成生物工程有限公司，批号20061007）。
           2  方法
        2.1  动物及分组将50只大鼠随机分成两组：正常对照组（10只），给予普通饲料，灌服生理盐水15 ml/kg；模型组（40只），按15 ml/kg灌服56%红星二锅头酒，1次/d，同时给予高脂饲料。10周后造模成功，随机取正常对照组和模型组大鼠各10只，处死大鼠，快速分离血清及血浆，保存于-70℃，待测肝功能及ET和MDA，取肝组织送病理检测。从11周起，将剩余的27只模型组大鼠随机分成3组，每组9只，分别灌胃解酒降脂保肝汤（高剂量组浓度为每天10 g/kg，低剂量组浓度为每天5 g/kg）、东宝肝泰组（浓度为每天0.9 g/kg）。1月后结束实验，最后1次灌胃后禁食12 h，处死动物，分离血清、血浆，于-70℃低温保存，取新鲜肝组织送病理检测。
        2.2  检测指标 ①肝功能检测；②MDA ，ET检测：按试剂盒说明操作。③肝组织病理（HE染色）：常规取材、脱水、包埋、切片、HE染色，光镜下观察病理变化。
        2.3  统计学处理 计量资料用±s表示，行方差齐性检验后单因素组间方差分析t检验，在SPSS10.0软件下进行。
       3  结果
        3.1  大体标本肉眼观察正常对照组肝脏表面光滑，柔软而富有弹性，呈暗红色，边缘锐利，切面光洁；模型组肝脏体积增大，整个肝脏呈奶黄色，并见局灶性黄白色变性灶，包膜紧张，边缘钝厚，切面油腻。各治疗组之间肉眼观察差别不明显，色泽较暗，质地、弹性均介于模型组与正常组之间。
        3.2  光镜下观察HE染色：正常肝组织肝小叶结构完整，肝细胞索以肝小叶中央静脉为中心呈放射状排列，肝细胞大小一致，胞核居中，肝细胞无变性坏死，无炎细胞浸润；模型组部分肝小叶呈中度脂肪变性，单个大脂滴将细胞核挤向一侧，可见酒精小体，部分肝组织呈气球样变性，可见淤血、小灶坏死及少量炎细胞浸润；东宝肝泰组肝细胞呈轻度脂肪变性，部分肝细胞肿胀，少量肝细胞再生；解酒降脂保肝汤小剂量组部分肝细胞呈轻度脂肪变性，轻度肿胀，肝细胞再生较明显；解酒降脂保肝汤高剂量组少见肝细胞呈脂肪变性，部分肝细胞轻度肿胀，肝细胞再生明显。见图1。
        3.3  解酒降脂保肝汤对酒精性脂肪肝模型大鼠肝功能的影响结果见表1。表1  各组大鼠血清肝功能指标检测情况 与正常对照组比较， △△P<0.01；与模型组比较，＊P<0.05，＊＊P<0.01；与东宝肝泰组比较，●P>0.05；与低剂量组比较，＃P>0.05
        从表1可以看出，模型组与正常组比较，血中ALT，AST，TC，TG均明显升高（P<0.01）；东宝肝泰组、解酒降脂保肝汤高、低剂量组与模型组比较，均能显著降低血中ALT，AST，TC，TG（P<0.05，P<0.01）；各用药组间大鼠的ALT，AST，TC，TG水平差异不明显，无统计学意义（P>0.05）。
        3.4  解酒降脂保肝汤对酒精性脂肪肝模型大鼠血浆内毒素（ET）和血清丙二醛（MDA）含量的影响结果见表2。表2  解酒降脂保肝汤对酒精性脂肪肝模型大鼠血浆ET、血清MDA的影响由表2可见，模型组与正常组比较，血中ET，MDA均明显升高（P<0.01）；东宝肝泰组能显著降低血中ET,MDA（P<0.05），解酒降脂保肝汤高、低剂量组与模型组比较能极显著显著降低血中ET，MDA（P<0.01）；解酒降脂保肝汤高剂量组在降低ET，MDA方面明显优于东宝肝泰组（P<0.05）。
           4  讨论
        目前，酒精性脂肪肝的确切发病机制尚不十分清楚，但普遍认为其与乙醇及其氧化产物的毒性有密切关系，近年来有人提出了以氧应激和脂质过氧化为中心的“二次打击”假说［1］。MDA是脂质过氧化的整合物，它可以反映人体的氧化反应并通过多种途径对肝细胞造成损害［2］，正常情况下，肝细胞具有抗氧化作用，可以随时清除不断生成的有害自由基，阻断自由基的链式放大反应，从而起到保护肝细胞的作用。但是，当大量饮酒后，氧化抗氧化机制失去平衡，自由基和脂质过氧化产物就会损害细胞膜的脂质和蛋白质，最终导致肝细胞结构与功能的损害。本实验结果表明，酒精性脂肪肝大鼠模型组血清MDA水平明显高于正常对照组，东宝肝泰组、解酒降脂保肝汤高、低剂量组与模型组比较均能显著降低血中MDA含量。这一方面证实了MDA在酒精性脂肪肝发病机制中的重要作用，另一方面也证实了解酒降脂保肝汤确有降低MDA的作用，其疗效优于东宝肝泰。
        此外，内毒素在酒精性脂肪肝发生发展中也起着非常重要的作用，它可以通过激活Kupffer细胞造成继发性肝损害［3］。长期摄入酒精者，肠道的通透性增加，从而诱导低水平的内毒素血症，并诱导Kupffer细胞大量释放超氧化物和细胞因子，继而产生肝脏损害。因此，积极地预防内毒素血症，可有效地减少动物因摄入乙醇后造成的肝损害。本实验结果证实了内毒素在酒精性脂肪肝发病中具有重要作用，同时也证实了在解酒降脂保肝汤对肝脏的保护作用机制中，降低血浆内毒素水平为其特点之一。
        我院中西医结合肝病专家孙同郊教授通过长期大量临床实践，结合现代医学知识，认识到酒精性脂肪肝以脾虚肝郁，湿浊内蕴，血脉瘀阻为其主要病机，治当醒酒解毒，健脾疏肝，祛湿化浊，活血化瘀。认为解酒毒是治疗酒精性脂肪肝区别于其它类型脂肪肝的主要特点，立解酒降脂保肝汤方（由枳椇子、葛根、柴胡、泽泻、丹参、山楂等12味药物组成），以图解酒毒，降脂保肝之功效。方中枳椇子养阴生津、润燥止渴、凉血，能清热利尿、解酒毒，主治酒毒、烦热、口渴、呕吐、二便不利等症。现代研究表明，枳椇子可加快乙醇的代谢，提高谷胱甘肽过氧化酶的活性，降低乙醇所致的ALT，AST，MDA升高等作用［4］；葛根解肌退热、生津透疹、升阳止泻、解酒毒，现代药理研究证实其有较强的抗脂质过氧化作用；柴胡解表退热、疏肝解郁、升阳，有抗炎、抗氧化、降血脂、保肝之功效；泽泻利水渗湿、泻热，有较好的降血脂、抗脂肪肝、抗炎作用［5］；丹参活血化瘀，能抗内毒素所致的肝损害［6］。处方以枳椇子、葛根醒脾解酒、祛湿化浊为主药；臣以柴胡等疏肝理气，丹参等活血化淤，泽泻等清热解毒、除湿化浊；辅以山楂助脾胃运化、行气散淤。全方配伍精当，药证相合，共奏醒酒解毒、疏肝健脾、祛湿化浊、活血化瘀之功效。
        本实验以白酒灌胃加喂食高脂饲料制作酒精性脂肪肝大鼠模型，从肝脏病理及血清肝功能检测结果可以看出，造模完全成功。模型组大鼠有脂肪肝形成及明显的肝脏损害，经解毒降脂保肝汤治疗后上述指标均显著降低，说明解毒降脂保肝汤有较好的保肝、降脂、解酒毒的功效。其中，能有效地降低血清MDA和血浆内毒素，清除氧自由基、改善脂质过氧化状态为其作用特点。
       【参考文献】
         ［1］ Arteel GE. Oxidants and antioxidants in alcohol induced liver disease［J］.Gastroenterology,2003，124：778.
       
       ［2］ 张秀明，李健高，魏明竞，等.现代临床生物检验学，第1版［M］.北京：人民卫生出版社，2001：1089.
       
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       ［4］ 于斌如，汤银红. 枳椇子的研究进展［J］.时珍国医国药，2004，15（9）：608.
       
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       ［6］ 许 峰，陆伯刚，姚 智，等.丹参及丹参素对内毒素刺激下大鼠柑橘使细胞分泌因子影响的动态观察［J］.中国危重急救医学，1995，8（5）：262.