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       【摘要】 
       目的建立了内蒙古石菖蒲中总氨基酸的含量测定方法。方法采用分光光度法。结果标准曲线方程A=0.001 1C-0.019 9 (r=0.999 3)，平均回收率为97.10%，RSD为0.95%(n=6)。该法测得石菖蒲中总氨基酸的含量为0.62%，与氨基酸自动分析仪所测得的石菖蒲中总氨基酸的含量一致。结论该方法灵敏、简便、快速、准确可靠。
       【关键词】  石菖蒲; 总氨基酸; 分光光度法
       Determination of Total Amino Acid in Acours tatarinowii Schott.
        DONG Yu1,   SHI Renbing2*，CHEN Chaojun1
        （1.Innermongolian Medical College,Huhehaote 010059，China；2.Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100102，China）
        Abstract：ObjectiveTo establish a method for determination of total amino acid in A.tatarinowii Schott. MethodsUltra Violet-Visible absorption spectrophotometry was adopted.ResultsThe standard curve was A=0.0011C-0.0199 ,r=0.999 3,and the average recovery was 97.10%,RSD=0.95%(n=6).ConclusionThe guantitative method is simple,rapid and reliable.
        Key words：A.tartarinowii Schott.;  Total amino acid;  Spectrophotometry
        石菖蒲系天南星科（Araceae）菖蒲属（Acorus）石菖蒲A.tatarinowii Schott.的干燥根茎。具有化湿开胃、开窍豁痰、醒神益智等功效［1］。可用于脘痞不饥、神昏癫痫、健忘耳聋［2］等病症。
        有文献报道［3］石菖蒲中含有氨基酸，但对于其中总氨基酸含量测定未见报道。本文建立分光光度法测定石菖蒲药材中总氨基酸的含量的方法，此法简便、快捷，回收率在95%～105%之间。
        1  材料与仪器
        1.1  材料 石菖蒲药材(由同仁堂药材批发市场提供，产地：湖南，生产批号：401005732，经北京中医药大学中药学院生药系刘春生副教授鉴定为石菖蒲Acorus tatarinowii Schott.的干燥根茎),L-精氨酸对照品(中国药品生物制品检定所),其余试剂均为分析纯。
        1.2  仪器 U-2000型紫外可见分光光度计(日本日立公司)；SARTORIUS-BS124S型电子分析天平（德国赛利多斯股份有限公司）；KQ-500DE型数控超声波清洗仪（昆山市超声仪器公司）。
           2  方法
        2.1  检测波长的选择  精密量取样品液及阴性对照液各5.0 ml,分别置25 ml量瓶中,加水稀释到刻度,摇匀,精密量取上述两种溶液及对照品溶液2.0 ml,分别置25 ml量瓶中,照含量测定法,自“加水4.0 ml”起,制备供试品,在紫外可见分光光度计上扫描。结果,样品与对照品均在570 nm处有最大吸收,而阴性对照无干扰,故选择本品的检测波长为570 nm。
        2.2  对照品溶液的制备  精密称取105℃干燥至恒重的L-精氨酸对照品5.015 mg,置50 ml容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得(每毫升含精氨酸100.3 μg)。
        2.3  标准曲线的制备  分别精密吸取精氨酸标准液0.0, 1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0 ml,置25 ml量瓶中,分别加入水6.0,5.0, 4.0,3.0,2.0,1.0,0.0 ml,各加磷酸盐缓冲液(pH8.0)0.5 ml,再加2%茚三酮乙醇溶液0.5 ml,摇匀,置水浴中加热15 min,取出,放冷,分别加入蒸馏水至刻度,摇匀,以第1份为空白,采用分光光度法［4］，在570 nm波长处测定吸收度。以对照品加入量为横坐标,吸收度为纵坐标,绘制标准曲线（见图1）。经回归统计,得标准曲线方程：A=0.001 1 C-0.019 9,r=0.999 3表明精氨酸浓度在1.003～6.018 μg范围内与吸收度呈良好的线性关系。
        2.4  样品溶液的制备  取石菖蒲药材饮片5 g，加水50     ml，煎煮两次，1 h/次，煎煮液过滤后，调pH至4,通过732型强酸性H型阳离子交换树脂柱,用蒸馏水洗至中性,再用2 mol/L氨水缓慢洗脱,直至洗脱液不显茚三酮反应,收集洗脱液,浓缩，低温蒸干，得干膏38.93 mg。精密称取干膏约20 mg,蒸馏水定容于25 ml量瓶，备用。
        2.5  精密度实验 精密量取样品溶液5.0 ml,照含量测定法,制备供试品,连续测定5次,结果RSD=0.81%,表明本方法的精密度良好。
        2.6  稳定性实验 精密量取本品5.0 ml,照含量测定法,制备供试品,分别于0,15,30,45,60,90 min测定,结果RSD=0.93%,表明本品供试品溶液在1.5 h内稳定性良好。
        2.7  重复性实验  取石菖蒲药材饮片5 g，照样品溶液的制备方法，重复制备5份样品,照含量测定法，分别进行测定,结果RSD=0.46%,表明本方法的重复性良好。
        2.8  加样回收实验 精密称取已知含量的石菖蒲药材饮片2.5 g,置50 ml量瓶中，分别加入L-精氨酸对照品约15 mg, 照样品溶液的制备方法，重复制备6份样品,照含量测定法，分别进行测定,计算回收率，结果表明，L-精氨酸的加样回收率为97.10%，RSD为0.95%，结果见表1,表明本法具有良好的回收率。
       3  结果与分析
        3.1  样品含量测定  取本品精密量取样品液5.0 ml,置25 ml量瓶中,加水稀释到刻度,摇匀,精密量取2.0 ml,置25 ml量瓶中,加水4.0 ml,磷酸盐缓冲液(pH 8.0)0.5 ml,再加2%茚三酮乙醇溶液0.5 ml,摇匀,置水浴中加热15 min,取出,放冷,加蒸馏水至刻度,摇匀,在570 nm波长处测定吸收度,随行空白,从标准曲线上读出供试品溶液中总氨基酸的重量,计算,即得样品的测定结果见表2。表1  样品加样回收实验结果 表2  石菖蒲中总氨基酸含量测定结果
        3.2  酸度的影响  在用强酸型阳离子交换树脂富集石菖蒲中氨基酸时，将药材提取液分别用2 mol/L盐酸调pH2，4，5，6后，再分别过阳离子交换树脂柱，结果表明：药材提取液调pH至4时，树脂对氨基酸的吸附最完全。
        3.3  上样流速的影响  在用强酸型阳离子交换树脂富集石菖蒲中氨基酸时，当上样流速为1 ml/min时，树脂对氨基酸的吸附最完全。
        3.4  树脂柱径高比的影响  分别将调pH至4的药材提取液经过径高比为1∶30，1∶50，1∶70的强酸型阳离子交换树脂柱，结果表明：径高比为1∶50和1∶70的明显优于径高比为1∶30的树脂柱，但径高比为1∶50和1∶70的没有很大差异，故选用径高比为1∶50的树脂柱。
        3.5  氨水洗脱液浓度的影响  分别选用1，2，3 mol/L的氨水洗脱已吸附饱和的强酸型阳离子交换树脂柱，结果表明：2 mol/L的氨水洗脱树脂柱，氨水用量较少，且洗脱完全。
           4  结论
        多年来人们认为石菖蒲的主要有效成分是挥发油，故对其的化学药理研究也集中在挥发油部分。而部分现代药理的结果及前人水煎用药的方式提示：非挥发性部分，尤其是水提部分不容忽视。本课题组对石菖蒲挥发油部分及非挥发性部分进行了系统的成分分离（另文发表），并且，本文首次对石菖蒲中总氨基酸进行了含量测定，该法测得石菖蒲中总氨基酸的含量为0.62%，与氨基酸自动分析仪所测得的石菖蒲中总氨基酸的含量基本一致。表明该方法灵敏、简便、快速、准确可靠。 本研究为合理、有效地开发、利用石菖蒲药材奠定了基础。
       【参考文献】
         ［1］ 肖培根.新编中药志，第1卷［M］.北京：化学化工出版社，2002：284.
       
       ［2］ 国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：62.
       
       ［3］ 陈 俐，廖卫平.石菖蒲药理作用的实验研究［J］.广州医学院学报，2002，30（4）：75.