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       【关键词】  珍珠
        摘要：目的：探讨珍珠梅醋酸乙酯提取物对S180荷瘤小鼠体内的肿瘤抑制作用及机理。方法：按照标准方法给36只小鼠接种S180肉瘤后，给予珍珠梅提取物10 d，观察瘤重及体重，免疫组织化学方法检测肿瘤组织中的bcl2和p53蛋白，比色分析法检测血清SOD，GSHPx的活性及MDA含量的变化。结果：给予珍珠梅醋酸乙酯提取物的小鼠瘤重明显小于对照组，实验组与对照组体重变化无显著性差异；对照组的bcl2和p53蛋白的表达率明显高于实验组，实验组的SOD，GSHPx活性高于对照组，而MDA含量低于对照组。结论：珍珠梅醋酸乙酯提取物对小鼠S180肿瘤有抑制作用，并有可能影响bcl2和P53的表达及清除体内自由基。
        关键词：珍珠梅；S180肉瘤；bcl2蛋白；p53蛋白；自由基
        Study on the Anti-tumor Effect in vivo of Sorbaria sorbifolia Extract and Its Mechanism
        ZHANG Xuewu, JIN Yuanzhe, MENG Fanping
        (College of Medicine, Yanbian University,Yanji,Jilin,133000, China)
        Abstract:Objective:To study the antitumor effects of Sorbaria sorbifolia ethyl acetate extract and its mechanism.Methods:Thirty six mice were inoculated with the sarcocarcinoma 180 according to the standard method,after 10 days,weighed the tumor and body.The expressions of bcl2 and p53 proteins in the tissue were studied by immunohistochemistry; and the activities of SOD, GSHPx and the content of MDA were detected by colorimetric method in serum.Results:The tumor of the test groups were lighter than that of control group,and there was no remarkable difference between the control and test groups in body weight. The expression frequency of bcl2 and p53 proteins differed significantly among groups. Sorbaria sorbifolia extract increased the SOD,GSHPx and decreased MDA level in serum.Conclusion:Sorbaria sorbifolia ethyl acetate extract can resist the mouse tumor. It might influence the expression of the blc2 and p53, and clear the free radical.
        Key words:Sorbaria sorbifolia;Sarcocarcinoma 180;bcl-2 proteins;p53 proteins;Free radical
        珍珠梅Sorbaria sorbifolia属蔷薇科植物，又称“山高粱”“八木条”，广泛分布于云南、贵州、四川、湖北、甘肃、宁夏及东北，有活血化瘀、消肿止痛、治骨折及跌打损伤的作用，其主要成分为黄酮类化合物［1］。1980年代初期国内学者研究发现珍珠梅水提物有抗缺氧作用［2］，我们曾研究过珍珠梅醋酸乙酯提取物对亚硝酸钠和四氯化碳对急性肝损伤具有保护作用［3］。本次实验研究珍珠梅对小鼠S180肉瘤的抑瘤率，以及免疫组织化学方法检测肿瘤组织中的bcl-2和p53蛋白；比色分析法检测血清SOD，MDA及GSH-Px含量的变化，旨在阐明珍珠梅的抑瘤作用及可能机理。
           1材料与方法
        1.1珍珠梅生物活性成分的制备茎、叶、花，采集于吉林省延吉市市郊。醋酸乙酯提取物：醋酸乙酯分3次浸泡珍珠梅，温度为40℃，12 h/次，合并3次滤液，用旋转蒸发器减压浓缩，获珍珠梅醋酸乙酯提取物浸膏(1 g珍珠梅有效成分相当于33.3 g生药)。
        1.2动物昆明种小鼠，体重为18～22 g，雄性，由延边大学医学院动物科提供。
        1.3S180细胞株由吉林大学预防医学研究所提供。
        1.4试剂P53，bcl-2 及S-P试剂盒均为福建迈新生物技术开发公司产品；SOD，GSH-Px 及MDA试剂盒为南京建成生物工程研究所产品，其他试剂均为国产分析纯。
        1.5方法
        1.5.1体内抑瘤实验取36只小鼠，随机分成3组：实验Ⅰ组，实验Ⅱ组，对照组。每组12只在无菌条件下，取传代第9 d的S180肉瘤小鼠腹水，用生理盐水以1∶3比例稀释，给每只小鼠右腋窝部皮下注射0.2 ml，相当于2×105瘤细胞/只小鼠。对照组每天灌胃生理盐水，剂量为10 ml/kg,实验Ⅰ，Ⅱ组每天灌胃珍珠梅提取物分别为16.7，8.4 g/kg，连续给予受试物10 d。实验期间让动物自由进食和饮水。
        1.5.2观察指标在动物荷瘤第11天,将小鼠称重，眼球取血并分离血清，进行生化指标的测定。立即取出肝脏全部标本均用中性福尔马林固定，石蜡包埋，5 μm连续切片。用免疫组织化学染色方法，按S-P试剂盒说明书检测P53及blc-2蛋白。处死后的小鼠剥离瘤体称重。根据动物荷瘤第1天与第11天体重之差计算各组动物平均体重变化幅度。肿瘤生长抑制率采用下列公式计算。
抑制率=对照组平均体重-实验组平均体重〖〗对照组平均体重×100%
        1.5.3免疫组织化学结果判定bcl-2阳性者为细胞膜或细胞浆有棕黄色颗粒；p53阳性者为细胞核有棕黄色颗粒。P53和bcl-2蛋白表达强度，根据阳性物质着色深浅及阳性细胞数的多少分为4级：无阳性细胞或阳性细胞少于10%或背景同空白对照者为(-)；每张切片少于25%的细胞明显呈阳性为弱阳性(+)；25%细胞明显呈阳性为阳性(++)；多于50%细胞呈阳性为强阳性(+++)。
        1.6统计学处理数据以±s表示，应用SPSS 10.0统计软件进行方差分析、秩和检验，两两比较用q检验。
           2结果
        2.1S180荷瘤小鼠的抑制作用结果见表1～2。
        表1珍珠梅醋酸乙酯提取物对S180荷瘤小鼠的抑制作用(±s)分组（略）
        从表1中可以看出，实验Ⅰ组，实验Ⅱ组的小鼠瘤重明显低于对照组，其抑瘤率分别达46%，57%，而实验组间无显著性差异。
        如表2所示：至动物荷瘤第11天，各组荷瘤小鼠体重增重变化无显著性差异(P＞0.05)。
        表2珍珠梅醋酸乙酯提取物对S180荷瘤小鼠的体重变化（略）
        2.2珍珠梅醋酸乙酯提取物对S180荷瘤小鼠p53，bcl-2表达的影响见表3。与对照组比较，实验组p53，bcl-2表达明显低于对照组(P＜0.05)。
        2.3SOD，GSH-Px及MDA在各组动物血清中的变化实验Ⅰ组，Ⅱ组血清SOD、GSH-Px的活性均高于对照组(P＜0.05)，而MDA的量明显低于对照组(P＜0.05)。见表4。
        表3珍珠梅醋酸乙酯提取物对S180荷瘤小鼠的P53，bcl-2表达的影响（略）
           3讨论
        本实验观察不同浓度的珍珠梅醋酸乙酯提取物对S180肉瘤的抑制作用，大、小剂量组间的抑制作用均超过45%，表明珍珠梅在动物体内有较强的抑瘤作用。
        bcl-2和P53是近年来研究肿瘤细胞凋亡的基因［4］。bcl-2基因能使细胞长期存活，抑制细胞凋亡，产生恶性细胞克隆。野生型p53能监控细胞内DNA的状态，防止突变或受损的DNA复制与转录，促进受到改变的细胞凋亡，保证细胞按细胞周期生长，其可能机理可能有两条途径：一条是激活促进凋亡的bcl-2家族的凋亡促进因子bad；另一条是通过缉获依赖细胞周期蛋白激酶(CDKs)的抑制物来实现，CDKs是细胞维持正常周期所必需的。野生型p53基因在抑制恶性增殖过程中起着重要的作用，其编码蛋白可促进药物诱导的肿瘤细胞凋亡。它在恶性肿瘤中多产生突变，形成突变型p53蛋白，从而失去对恶性肿瘤的控制，突变型p53蛋白可以通过免疫组织化学方法检出。本实验结果显示，实验组bcl-2和p53的阳性表达率均低于对照组(P＜0.05)，说明珍珠梅提取物可能起到下调抑癌基因表达的作用，从而使肿瘤缩小，这可能是珍珠梅抑瘤作用的机理之一。
        表4珍珠梅醋酸乙酯提取物对S180荷瘤小鼠血清SOD、GSH-Px及MDA的影响(±s)（略）
        现已证明，在癌变的诱发和促发阶段均有自由基参与。各种诱癌因素和促癌因素通过各自的转化途径，终使自由基水平增加，从而参与癌变过程。SOD、GSH-Px是属于体内消除自由基和脂质过氧化物的酶类，与体内其他酶类及抗氧化剂组成一个自由基的防御系统，以清除过多的自由基，MDA是自由基代谢的产物。本实验中对照组SOD、GSH-Px活性均显著低于实验组，而MDA含量显著高于实验组。说明珍珠梅可以通过清除自由基抑制肿瘤的生长，这可能是珍珠梅抑制肿瘤生长的另一个重要机理。
           参考文献：
        ［1］江苏新医学院.中药大辞典［M］.上海：上海科学技术出版社，1994：88.
        ［2］李亦秀，张永春，李文汉.中草药山高粱的抗缺氧作用的初步研究［J］.哈医大学报，1981，4(1)：11.
        ［3］金海玲，张学武，赵红，等.珍珠梅对四氯化碳所致大鼠急性肝损伤的保护作用［J］.世界华人消化杂志，2002，10(7)：783783.
        ［4］王忱，谢广茹，史玉荣，等.甘草多糖的体内抑瘤作用及其机制的研究［J］.临床肿瘤学杂志，2003，8(2)：8585.
        (延边大学医学院，吉林 延吉133000)