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       【关键词】  高效液
        摘要：目的：建立珍珠梅中芦丁含量的测定方法。方法：采用YMC-pack ODS-A(4.6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱，流动相为甲醇水溶液(35∶65)；柱温25℃；流速0.4 ml・min1。检测波长为256 nm。结果：此法线性范围1.0～6.0 μg，r=0.999 0。平均回收率为98.8%，RSD为1.15%(n=5)。结论：测定方法简便，精密度高，准确性好，可以作为珍珠梅中黄酮的测定方法。
        关键词：珍珠梅；反相高效液相色谱法；芦丁；含量测定
        Study on Determination of Rutin in Sorbaria sorbifolia by RP-HPLC Assay
        GUAN Liping1, JIN Qinghao1, ZHENG Yunhua1, ZHANG Xuewu2
        (1.College of Pharmacognosy, Yanbian University, Yanbian, Jilin 133000, China; 2.Medical College, Yanbian University, Yanbian, Jinlin 133000, China)
        Abstract:Objective:To establish a RP-HPLC method for the determination of rutin in Sorbaria sorbifolia.Methods:YMC-pack ODS-A(4.6 mm×250 mm,5 μm) column was used. The mobile phase consisted of methanolwater(35∶65) with flow rate 0.4 ml・min1and column temperature at 25℃,at detection wavelength of 256 nm.Results:The method was liner within the range of 1.0～6.0 μg(r=0.999 0). The average recovery of assay was 98.8% and RSD 1.15%(n=5).Conclusion:The method appeared to be simple and rapid, highly accurate and precise. It can used for the quantitative determintion of flavone in Sorbaria sorbifolia.
        Key words:Sorbaria sorbifolia;RP-HPLC;Rutin;Determination
        珍珠梅Sorbaria sorbifolia属蔷薇科植物，又称“山高粱”“八木条”，广泛分布于云南、贵州、四川、湖北、甘肃、宁夏及东北，有活血化瘀、消肿止痛，治骨折及跌打损伤的作用。其主要成分为黄酮类化合物［1］。其药理作用有抗缺氧作用、保护肝脏及抗肿瘤作用等［2，3］。芦丁为珍珠梅中一种黄酮类化合物，具有多种生物活性，主要用于防治心脑血管疾病等作用［4，5］。芦丁为珍珠梅中含量较高的活性成分。目前尚未见有利用RP-HPLC法测定珍珠梅中芦丁含量的报道。本实验建立了利用此法测定珍珠梅中芦丁的含量方法。
           1仪器与试药
        1.1仪器SCL-10Avp型高效液相色谱仪(日本岛津)；SPD-10Avp型紫外-可见检测器(日本岛津)；XW-80A旋涡混合器(上海青浦沪西仪器厂)；AS3120A型超声波清洗脱气器(奥特宝恩斯仪器有限公司)；AT-261型电子天平(METTLER)。
        1.2试药甲醇(色谱纯)，芦丁(对照品，中国药品生物制品检定所)；样品采自吉林省延吉市市郊，由延边大学药学院刘永镇教授鉴定为真品。
           2方法与结果
        2.1色谱条件色谱柱为YMC-pack ODS-A(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为甲醇水溶液(35∶65)；柱温为25℃；流速为0.4 ml・min1。
        2.2供试品溶液的制备称取干燥并切成细段的珍珠梅50 g，用6倍量75%乙醇浸泡过夜，水浴加热回流2 h，提取2次，合并滤液，减压蒸除滤液，干燥得粗品。精密称取提取物100 mg，加入少量甲醇溶解，移入50 ml量瓶中，定容，摇匀，用微孔滤膜过滤，作为供试液，备用。
        2.3对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品50 mg，置于50 ml量瓶中，加入甲醇溶解，定容于50 ml，所得浓度1 mg/ml，备用。
        2.4线性范围考察精密吸取对照品1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 μl进样，按色谱条件测定峰面积积分值，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准吸收曲线，并用最小二乘法求回归方程。回归方程为：Y=146 826 8.4X-222 415.2，相关系数为r=0.999 0。HPLC色谱图见图1。
       
    a芦丁对照品溶液b珍珠梅样品溶液1.芦丁色谱峰
        图1芦丁HPLC色谱图（略）
        2.5精密度实验精密吸取对照品供试液10 μl，按“2.1”项下条件，连续进样5次，测得峰面积，结果RSD=1.16%，说明仪器和色谱条件均具有良好的精密度。
        2.6重线性实验分别取同一供试样品5份，同法制备，按“2.1”项下条件，测定峰面积，RSD=2.07%，结果显示该方法具有较好的重线性。
        2.7稳定性实验在室温条件下，将样品按测定方法处理后，分别在2.0，4.0，8.0，12.0，24.0 h，进样10 μl/次，得峰面积的RSD=1.12%(n=5)。结果表明该溶液在24 h内的含量基本保持不变。
        2.8回收率实验精密称取已知含量的样品，加芦丁对照品适量，按“2.2”供试品溶液的制备方法操作，测定平均回收率为98.8%，RSD为1.15%(n=5)。
        2.9含量测定取3批珍珠梅，按“2.2”所述方法制备供试品溶液，注入高效液相色谱仪，在256 nm处测定峰面积，根据线性回归方程测定含量。结果见表1。
        表1样品含量测定的结果（略）
           3讨论
        本实验利用高效液相法测定珍珠梅中芦丁的含量尚属首次。该方法简便、准确，重现性好，为珍珠梅药物的开发提供了质量控制标准。
           参考文献：
        ［1］江苏新医学院.中药大辞典［M］.上海：上海科学技术出版社，1994：88.
        ［2］张学武，金海玲，赵红，等.珍珠梅提取物对四氯化碳所致大鼠急性肝损伤的保护作用［J］.中国中医药科技，2001，8(6)：373374.
        ［3］Zhang XW,Zhang XB,Quan JS,et al. Inhibitory effect of sorbifolia on DEN-induced precancerous hepatic foci and its antioxidative activies in rats［J］.肿瘤防治杂志，2003，10(11)：11371140.
        ［4］刘诗平，陈尚猛，朱卫东.槲皮素及其衍生物活性的研究进展［J］.中草药，1991，22(4)：182184.
        ［5］李茂星，谢景文，葛欣.芦丁的药效学研究进展［J］.华西药学杂志，2000，15(6)：450451.
        (1.延边大学药学院，吉林 延吉133000；2.延边大学医学院，吉林 延吉133000)