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胡枝子中化学成分及黄酮类物质提取与分析的研究进展
作者:张帆, 齐小花, 邹明强, 解瑞丽, 李锦丰, 张宏桂    
作者单位:基金项目:国家“十一五”科技支撑计划课题(No.2006BAK10B06) 中国检验检疫科学研究院,北京 100123; 北京中医药大学,北京 100102

《时珍国医国药》 2008年 第12期

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       【摘要】 
       从胡枝子属植物中已分离鉴定的化学成分包括黄酮、生物碱、萜类、有机酸及甾醇类等,以上成分具有抗炎抑菌、降血糖、抗氧化、抗辐射、抗癌、抗肿瘤以及增强免疫能力等药理活性。文章综述了胡枝子中的有效成分、黄酮类物质的提取、分析等方面的研究进展,为深入开展该类中药的研究提供了参考。
       【关键词】  胡枝子; 化学成分; 提取及分析
       Research Progress of Extraction and Analysis of Flavonoids and Chemical Constituents in Lespedeza bicolors Turcz.
       ZHANG Fan, QI Xiaohua, ZOU Mingqiang*, XIE Ruili, LI Jinfeng, ZHANG Honggui
       (Chinese Academy of Inspection and Quarantine, Beijing 100123, China; Beijing University of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100102, China)
       Abstract:Many compounds in Lespedeza bicolors Turcz. have been extracted and separated including flavonoids, alkaloids, terpenes, organic acids, and stigmasterols. These chemical constituents have been used for anti-inflammation, reducing blood sugar, antioxidation, anti-radiation, anticancer, and anti-tumor. This paper reviewed the research progress on extraction of flavonoids in Lespedeza bicolors Turcz, and chemical ingredients, which will provide reference to the subsequent study.
       Key words:Lespedeza bicolors Turcz.;  Chemical constituents;  Analysis and extraction
       
       豆科胡枝子属Lespedeza Michx.植物约六十余种,我国产26种,除新疆外,广泛分布于全国各省区[1]。中药胡枝子来源于双子叶植物豆科Leguminosae胡枝子属Lespedeza植物胡枝子Lespedeza bicolors Turcz.。《中华本草》[2]中记载,胡枝子Lespedeza bicolor Turcz.的枝叶具有清热润肺、利尿通淋、止血的功效;胡枝子根具有祛风除湿、活血止痛、止血止带、清热解毒的功效;而胡枝子花具有清热止血,润肺止咳的功效。
       1  化学成分
       
   
       胡枝子属植物多为民间常用中草药,从本属植物中已分离鉴定的化学成分包括黄酮、多羟基酚、生物碱、有机酸、甾醇类及二苯乙烯类等。
       1.1  黄酮类李景荣等从胡枝子中共分离出8种新的二氢黄酮后,1999年日本学者Toshio M[3]从Lespedeza homoloba的树皮中分离出15种新的异黄酮。2004年,俄罗斯学者Maximov O B[4]从Lespedeza bicolor的树皮中分离出两种新的异黄酮以及已知的化合物咖啡酸、儿茶酸、桦木酸、桦木素及β-谷甾醇。谭莉[5~7]从细梗胡枝子全草中共提取分离得到6个纯净化合物,经波谱分析和化学方法确定它们分别为5-羟基-6-甲基-2′-甲氧基-[6″,6″-二甲基吡喃(2″,3″:7,8)][6″′,6″′-二甲基吡喃(2″′,3″′:4′,5′)]-(2S)二氢黄酮(Ⅰ) ,山萘酚-3-O-α-L-鼠李糖苷(Ⅱ) ,山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅲ) ,槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷(Ⅳ) ,山萘酚-3,7-O-α-L-二鼠李糖苷(Ⅴ) ,槲皮素-7-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅵ) 。其中,化合物I为结构新颖的新化合物。目前,已分离鉴定的黄酮类包括黄酮、异黄酮、黄酮醇、双氢黄酮、双氢异黄酮、查尔酮和花青素等近百种化合物。
       1.2  多羟基酚类1999年,日本学者Toshio M[8]从Lespedeza homoloba的树皮中分离出11种新的多羟基酚类化合物。
       1.3  生物碱类生物碱是从胡枝子属植物中最早分离到的一类成分,但到目前为止仅从该属植物中分离鉴定了两个生物碱类化合物,分别为尼葛林(Nb, Nb-dimethyltryptamine) 和lespedamine (Na-methoxy-Nb,Nb-imethy1trypta-mine)[1]。
       
       1.4  甾醇类学者们分别从截叶铁扫帚、多花胡枝子、L.nakaii T.Lee、L.maritima Nakai中分得β-谷甾醇、豆甾醇和菜油甾醇3种甾醇类成分[1]。
       1.5  有机酸类日本学者松浦信等人从截叶铁扫帚叶中分得琥珀酸。我国申文吉等从大叶胡枝子茎皮中分离出白桦脂酸和正廿二酸[1]。
       1.6  二苯乙烯类1999年,日本学者Toshio M[5]从Lespedeza homolobade树皮中分离出1种新的二苯乙烯类化合物,命名为Lespedezol H1。
       2  有效成分提取及分析
       
   
       从中药中提取有效成分的方法通常包括有溶剂提取法、水蒸气蒸馏法以及升华法等。近年来,一些新的技术如微波辅助提取、超临界流体萃取及超声场强化等技术被广泛应用于中药有效成分的提取。常用的有效成分的分析方法也包括比色法、色谱法等。胡枝子中含有的化学成分较多且药用价值极高,所以近年来关于胡枝子有效成分提取及分析方面的研究较为广泛。
       2.1  提取工艺研究首先,选择不同的提取剂对提取有效成分的得率影响较大。陈乃东等[9]通过测定春花胡枝子黄酮粉的得率及黄酮含量来选择不同的提取剂时发现,用水、乙醇、甲醇为提取剂,黄酮粉的得率乙醇>甲醇>水,而使用甲醇为提取剂黄酮得率为5.66%,明显大于分别以乙醇与水为提取剂黄酮得率的4.55%,2.31%。
       
       周守标[10]和陈乃东等[11]采用索氏提取器对春花胡枝子中黄酮类物质进行提取,获得最佳的工艺流程为:杀青→烘干后粉碎→过筛→乙醚脱脂→70%乙醇回流提取→石油醚除杂质→合并提取液并浓缩→烘干得粗黄酮粉。
       
       王文清等[12]采用超声提取法、热回流提取法、浸渍提取法进行细梗胡枝子中槲皮素和芦丁的提取,以反相高效液相色谱法测定,结果表明采用热回流提取法槲皮素和芦丁的提取率均最高。
       
       申文吉等[13]在研究大叶胡枝子的化学成分时使用的提取工艺为:取大叶胡枝子茎皮切碎,用丙酮冷提取3次,回收丙酮后的溶液用醋酸乙酯萃取,醋酸乙酯溶液用无水硫酸钠脱水,后减压回收得浸膏,然后对浸膏进行分析研究。
       2.2  常见的分析方法比色法是春花胡枝子中黄酮含量测定中最常见的分析方法[9~11]。实验以芦丁为标准试剂于510 nm处测其铝盐吸光度,用最小二乘法求其线性回归方程制备工作曲线,利用该工作曲线再根据样品中的吸光度值来测出黄酮含量。一般而言,该方法工作曲线的线性相关系数均可达0.99以上。
       
       王文清等[12]在进行细梗胡枝子中黄酮类化合物槲皮素和芦丁的测定中则采用了反相高效液相色谱法。使用Lichrosorb C18柱(150.0 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈-纯化水-磷酸(47∶53∶0.2)为流动相,流速为1.0 ml·min-1,检测波长为370 nm,柱温为40℃。回收率、稳定性、重复性等方法学指标均良好,且灵敏、简便。实验证明该方法可用作胡枝子药材质量控制的有效分析方法。
       
       此外,还有采用微分脉冲极谱法和紫外分光光度法进行胡枝子中黄酮类化合物测定的报道[12]。由于不常用,故不赘述。
       3  药理活性
       
   
       胡枝子来源于双子叶植物豆科胡枝子,主要含有黄酮类成分,一些药理作用主要也是与含有黄酮类成分有关。黄酮类化合物(flavonoids compounds)是植物次生代谢产物,广泛地存在于自然植物中,以游离态或与糖结合为苷的形式存在,不仅种类繁多,而且结构复杂,表现出多种多样的药理活性。现代药理学研究表明,该药所含的多种黄酮类化合物能降低血中残余氮,改善肾功能,影响离体子宫的作用,此外还具有抗炎、抗早孕、抗过敏及止痛等作用[1]。因此,研究胡枝子中黄酮类化合物的含量有助于探索其有效成分与疗效间的关系。
       4  小结
       
   
       胡枝子所含化学成分复杂,具有多种生物活性。黄酮类化合物是胡枝子中的主要活性成分,对肾功能的作用显著。因此黄酮类化合物的提取、分析在中药开发中具有重要的研究意义。迄今为止,国内通常采用的提取方法尚停留在传统的热回流和索氏提取方法,致使黄酮类物质提取率不高,需进一步将微波辅助萃取、超临界流体萃取等新技术应用于提取过程中,以减少能耗并提高产率。目前黄酮类物质的分析多采用比色法,因干扰因素多而难于测准。高效液相色谱法集分离和测定为一体,简便、高效、快捷,可实现准确的定量分析。因此,深入研究胡枝子中有效成分的快速高效提取方法,开发并建立准确的定量分析方法是非常必要的,这将会为中药胡枝子的进一步开发利用提供有力的支持。
       【参考文献】
          [1] 王 威, 闫喜英, 王永奇, 等. 胡枝子属植物化学成分及药理活性研究进展[J]. 中草药, 2000, 31(2): 144.
       
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       [3] Toshio M, Mitsuaki S, Kyoji Y, et al. Antioxidants from Lespedeza homoloba(II)[J]. Phytochemistry, 1999, 52: 311.
       
       [4] Maximov O B, Kulesh N I, Stepanenko L S, et al. New prenylated isoflavanones and other constituents of Lespedeza bicolor[J]. Fitoterapia, 2004, 75: 96.
       
       [5] 谭 莉. 细梗胡枝子抗氧化活性成分研究[D]. 北京化工大学, 2007:2.
       
       [6] Li Tan, Xiu-Feng Zhang, Bao-Zhen Yan, et al. A novel flavonoid from Lespedeza virgata (Thunb.) DC.: Structural elucidation and antioxidative activity[J]. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2007, 17: 6311.
       
       [7] 谭 莉, 张秀凤, 刘 扬, 等. 细梗胡枝子全草中5 种黄酮化合物的结构解析[J]. 中草药, 2008, 39(2): 189.
       
       [8] Toshio M, Mitsuaki S, Haruko N, et al. Antioxidants from Lespedeza homoloba(I)[J]. Phytochemistry, 1999, 52: 303.
       
       [9] 陈乃东, 周守标, 罗 琦, 等. 不同提取剂对春花胡枝子黄酮含量及抑菌活性影响的研究[J]. 中国卫生检验杂志, 2007, 17(2): 193.
       
       [10] 周守标, 陈乃东, 胡金蓉, 等. 春花胡枝子黄酮大孔树脂纯化工艺研究及纯化前后抗氧化性变化比较[J]. 中国实验方剂学杂志, 2006, 12(12): 2.
       
       [11] 陈乃东, 胡金蓉, 周守标, 等. 春花胡枝子黄酮的提取及其抗氧化能力测定[J]. 中国林副特产, 2006, 5: 1.
       
       [12] 王文清, 罗晓梅, 张 飞, 等. 反相高效液相色谱法测定细梗胡枝子中槲皮素与芦丁的含量[J]. 医药导报, 2006, 25(2): 151.
       
       [13] 申文吉, 李景荣, 丁南平, 等. 大叶胡枝子化学成分研究[J]. 中国药科大学学报, 1991, 22(3): 148.

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