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       【关键词】  中药水
        摘要：目的：比较8种中药的水煎剂与免煎颗粒剂对56株临床分离金黄色葡萄球菌的体外抑菌效果。方法：采用M-H琼脂稀释法检测8种中药水煎剂与免煎剂对MSSA，MRSA的抑菌作用，测定最低抑菌浓度MIC50和MIC90，并加以比较。结果：8种中药抑菌强度不同，五倍子抑菌效果最好；除五倍子、连翘外，其余中药水煎剂抑菌效果比相应的免煎颗粒剂好。结论：中药水煎剂与免煎颗粒剂抑菌效果的差异，可能与制备工艺及原药材品质有关。
        关键词：中药水煎剂；免煎颗粒剂；抑菌作用；最低抑菌浓度
        The in Vitro Antibiotical Effect of the Single Chinese Herbal Decoction and the Single Herbal Concentrate-granules against Clinical Bacterial Strains
        WANG Yuhong, ZHANG Zhiqing, LI Zhongxing, WANG Xiuhua
        (The Second Hospital of Hebei Medical University,Shijiazhuang 050000, China)
        Abstract:Objective:To compare the in vitro antibiotical effect of Chinese herbal decoction and single herbal concentrate-granules for 8 traditional Chinese medicines against clinical Staphylococcus aureus Rosenbach.Methods:The antibiotical effect of single herbal decoction and single herbal concentrate-granules for 8 traditional Chinese medicines against MSSA and MRSA was detected and compared by M-H agar dilution method,with MIC50 and MIC90 determined.Results:Eight traditional Chinese medicines showed different antibacterial activities ,with Galla Chinensis being the most potent.The antibiotical effect of single herbal decoction was better than that of single herbal concentrate-granules for Chinese traditional medicines except Galla Chinensis and Fructus Forsythiae.Conclusion:Difference of antibiotical effect between single herbal decoction and single herbal concentrate-granules maybe related to preparation technologies and qualities of raw medicinal materias.
        Key words:Traditional Chinese Single herbal decoction;Single herbal concentrate-granules;Antibiotical effect;MIC
        中药水煎剂作为中医临床用药的传统剂型，疗效确切，但有调配、携带、煎煮不便等缺点。免煎颗粒剂是经过现代化制药技术提取、分离、浓缩、干燥、制粒、包装而成的颗粒状剂型［1］，不必煎煮，直接冲服，适应快节奏社会生活，是对传统中药饮片的改革。免煎颗粒剂正在逐渐取代传统汤剂，在临床中推广使用，但它是否保持了传统汤剂的药效，国内外还无定论。本实验选取了有抑菌作用的8种中药，采用先进的中药抑菌实验方法，比较中药水煎剂与免煎颗粒剂对临床分离56株金葡菌的体外抑菌效果，探讨中药免煎剂与水煎剂的生物等效性，并筛选对MSSA、MRSA效果显著的中药，为临床应用提供依据。
           1实验材料
        1.1药材黄连(Rhizoma Coptidis)、黄芩(Radix Scutellariae)、五倍子(Galla Chinensis)、五味子(Frictus Schisandrae)、黄柏(Cortex Phellodendri)、连翘（Fructus Forsythiae）、乌梅（Fructus Mume）、大黄（Radix et Rhizoma Rhei），以上品种的中药饮片由河北医科大学第二医院提供，梅傲岭副主任中药师鉴定；免煎颗粒由三九医药股份有限公司提供。
        1.2仪器及培养基微量多点接种仪（北京医科大学昆仑药物发展研究所）；Mneller-Hinton琼脂（简称M-H琼脂，美国BD公司生产，批号030420）。
        1.3菌种金黄色葡萄球菌：从我院临床病人的血液、尿液等标本分离而得，其中甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（Methicillin-sensitive Staphylococcus，MSSA）28株，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistance Staphylococcus，MRSA)28株，由河北省临床检验中心鉴定。
           2实验方法
        2.1中药水煎剂溶液的制备称取中药饮片50 g置砂锅中，加10倍量水浸泡过夜,加热至沸，改用文火煎煮30 min，趁热滤过，滤渣另加8倍量水，同法煎煮30 min，滤过，合并两次滤液于烧杯中［2～3］，水浴浓缩后放凉至室温，50 ml容量瓶定容，倒入输液瓶中，盖薄膜，压胶塞和铝盖，高压灭菌（表压0.7 kg/cm2，115℃，30 min），取出放凉备用，得每1 ml相当于原药材1 g（1∶1）的中药水煎剂溶液。
        2.2免煎颗粒剂溶液的制备用分析天平精密称取中药免煎颗粒适量（相当于原饮片50 g），置烧杯中，蒸馏水溶解，50 ml容量瓶定容，药液倒入输液瓶中，盖薄膜，压胶塞和铝盖，高压灭菌（表压0.7 kg/cm2 ，115℃，30 min ），取出放凉备用，得每1 ml相当于原药材1 g（1∶1）的中药免煎颗粒剂溶液。
        2.3药液稀释及含药平板制备排列无菌试管10只，于2～10号管中各加生理盐水10 ml，于1号管、2号管分别加入1 g/ml中药水煎剂或中药免煎颗粒剂溶液10 ml，2号管混匀后取出10 ml加入3号管，3号管混匀后取出10 ml放入4号管,如此连续稀释至9号管，从9号管取出的10ml弃掉，第10管只有生理盐水作对照。这样1～9号管均含有10 ml倍比稀释的药液，浓度分别为1 000，500，250，125，62.5，31.25，15.63，7.82，3.91 mg/ml（即1∶1，1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128，1∶256）。
将已配好的无菌M-H琼脂溶化，在无菌操作下吸取M-H琼脂16ml置于三角瓶中，再从1号管中取出4ml药液置于同一瓶中，摇匀，倒入平板，凝固后备用，得1号含药平板，含药量为200 mg/ml（1∶5）。2～10号平板的制备同1号，这样1～9号含药平板药物含量分别为200，100，50，25，12.5，6.25，3.125，1.563，0.782 mg/ml（即1∶5，1∶10，1∶20，1∶40，1∶80，1∶160，1∶320，1∶640，1∶1 280）,10号平板为空白对照。
        2.4菌液制备将56株金黄色葡萄球菌新鲜培养物（菌落）用生理盐水稀释制成菌液，浓度相当于0.5麦氏比浊管。
        2.5接种方法用多点接种仪分别吸取56株金黄色葡萄球菌菌液，并将菌液点种于每种中药的1～10号平板上。于37℃培养箱中培养24 h，记录每号平板的菌落生长数及未生长数。
        2.6数据处理根据含药平板的菌落生长数及未生长数计算出不同浓度药物的累积抑菌率：累积抑菌率%=未生长的菌落数/（未生长的菌落数+生长的菌落数）×100%，并确定药物抑制50%，90%细菌时的最低药物浓度，即MIC50，MIC90。
           3结果
        8种中药水煎剂及免煎颗粒剂对56株MSSA，MRSA的抑菌作用见表1～2。
        表18种中药水煎剂、免煎颗粒剂对28株MSSA的抑菌作用（略）
        表28种中药水煎剂、免煎颗粒剂对28株MRSA的抑菌作用（略）
        从表1～2可以看出，8种中药对MRSA、MSSA有不同程度抑制作用。8种水煎剂中，五倍子抑菌效果最好，黄连、五味子、乌梅次之，连翘、黄芩、大黄较弱，黄柏最差。8种免煎剂中，五倍子抑菌作用最好，五味子、乌梅次之，连翘、黄连、黄芩较差，大黄、黄柏最差。
        同一中药水煎剂与免煎剂相比：黄柏两种剂型对MSSA抑菌效果相当，对MRSA其水煎剂抑菌强度是免煎剂的2倍；五倍子两种剂型抗菌能力相当，对MSSA，MRSA都有强大的抑制力；连翘两种剂型抑菌作用相当；黄连两种剂型抑菌活性相差悬殊，其水煎剂对MSSA的抑菌作用可比免煎剂强32倍、对MRSA可比免煎剂强15倍；大黄水煎剂对MSSA的抑菌作用可比免煎剂强15倍、对MRSA比免煎剂强3～4倍；五味子水煎剂抑菌强度是免煎剂的4倍；黄芩、乌梅水煎剂的抑菌强度是免煎剂的2倍。除五倍子外，其余中药对MSSA抑制作用显著，而对MRSA则较差。
           4讨论
        实验选用临床菌株，均从病人分泌物中得到，有多样性、复杂性，实验得出药物对临床菌株的抑菌作用，并进一步反映出药物对金黄色葡萄球菌所致感染的临床效果。MRSA对多种抗生素耐药,MRSA所致人类感染已引起全世界关注。实验结果显示，五倍子、五味子、乌梅的水煎剂、免煎剂及黄连的水煎剂对MRSA有较好抑菌效果，是值得研究和开发的抗感染中药。本实验采用中药抑菌实验方法，培养基用M-H琼脂。以往所用的营养琼脂中某些成分会与中药抗菌物质结合而钝化药物的抗菌作用，而M-H琼脂则无这种成分，能大大提高抑菌实验的灵敏度［4］。在接种细菌方法上，改以往的手工方法为多点接种仪接种细菌，易于操作，取菌量一致，保证了结果的准确性［5］。
        本实验通过对比8种中药水煎剂和免煎剂的抑菌效果发现，免煎剂抑菌作用大多弱于水煎剂。两种剂型药效的不同，首先与其制备工艺有关：免煎颗粒为保证良好的溶解性，制备时过筛滤过次数多；水煎剂提取液过滤次数相对少，“杂质”成分相对多，而中药抗病原微生物作用，除所含特异性成分发挥作用外，往往还受其它因素的影响，制剂中的杂质、鞣质等非特异性成分均可影响病原微生物的生长［6］，另外，免煎颗粒与水煎剂的制备中提取时间、提取次数、加水量等因素的不同可能会影响提取出的有效成分的含量。可见，应更深入研究中药药效成分，改进和完善免煎颗粒制备工艺。其次，实验所用中药饮片经鉴定是质量可靠的地道药材，其疗效确切；免煎颗粒原药材的来源、质量直接影响药效，生产厂家必须严把药材来源、质量关。
        参考文献：
        ［1］蒙光容,王一目.“单味中药浓缩颗粒”含义初探［J］.中国中药杂志, 2000, 25（9）：570571.
        ［2］王.如何煎制中药汤剂［J］.首都医药，2000，7（2）：5555.
        ［3］李财坐.论中药汤剂煎煮与疗效［J］.时珍国医国药，1999，10（9）：655655.
        ［4］李仲兴,王秀华，赵建宏,等.应用M-H琼脂进行连翘体外抑菌实验的效果观察［J］.中国中药杂志,2000,25(12):742744.
        ［5］李仲兴,王秀华，赵建宏,等.应用M-H琼脂进行黄连对252株临床菌株的体外抑菌活性研究［J］.中草药,2001,32（4）:337339.
        ［6］刘青云,胡月娟.清热药［A］.李仪奎，姜名瑛.中药药理学，第1版［M］.北京:中国中医药出版社,1992:4978.
        (河北医科大学第二医院，河北 石家庄050000)