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       【摘要】 
       目的研究茯苓的挥发性成分。方法利用有机溶剂－水蒸气蒸馏提取茯苓挥发性成分，用GC/ MS进行分离测定，结合计算机检索技术对分离化合物进行结构鉴定，应用色谱峰面积归一化法计算各成分的相对百分含量。结果茯苓超微粉中分离出131个成分，鉴定出67个化学成分，占挥发油总量的51.145%；茯苓普通粉中分离出103个成分，鉴出61个化学成分，占挥发油总量59.223%。茯苓2种粉末挥发油成分中，含有57种相同成分，其中含量最高的分别为α-柏木醇（茯苓超微粉7.936%）、反橙花叔醇（茯苓普通粉8.657%）。结论首次报道利用简便的有机溶剂－水蒸气蒸馏法提取茯苓超微粉挥发性成分，并将其与茯苓普通粉一起进行定性定量的对比研究。
       【关键词】  茯苓超微粉； 茯苓普通粉； 有机溶剂－水蒸气蒸馏； 挥发油； 气相色谱-质谱联用
       Determination of Chemical Constituents of the Volatile Oil from Micro-milling of Poria cocos and Ordinary Pulverization of Poria cocos
       LIAO Chuan，YANG Naijia*，LIU Jianhua，HUANG Jiancheng，DING Lina ，YUAN Yueling
       （College of Life Science of Guizhou University, Guiyang 550025 China；Guizhou Institute of Biotechnology Research and Development, Guiyang 550002, China）
       Abstract：ObjectiveTo study the chemical constituents of the volatile oil from Poria cocos.MethodsThe chemical compositions of the volatile oil of the plants which were obtained by organic- steam distillation with hexane were analyzed by GC-MS. The constituents were identified by their mass spectra. The relative percentage of the oil constituents was calculated from the GC peak areas. ResultsOne hundred and thirty-one kinds of chemical constituents in micro-milling of Poria cocos were separated,of which sixty-seven compounds representing 51.145% of the oil were characterized. One hundred and three kinds of chemical constituents in ordinary pulverization of Poria cocos were separated,of which  sixty-one compounds representing 59.223% of the oil were characterized. There were the same of fifty-seven components in the two oils.The most relative contents was α-Cedrol (micro-milling of Poria Cocos 7.936%)、trans-Nerolidol(ordinary pulverization of Poria Cocos 8.657%). ConclusionThis paper reported, for the first time, the composition of volatile oils of micro-milling of Poria cocos which were obtained by Organic-steam distillation with hexane，which was comparatively studied with ordinary pulverization of Poria cocos about qualitative and quantitative.
       Key words：Micro-milling of Poria cocos;  Ordinary pulverization of Poria cocos;   Organic-steam distillation;   Volatile oil;   GC-MS
       
       茯苓为常用中药，始载于《神农本草经》，被列为上品。是多孔菌科真菌茯苓的干燥菌核。味甘淡，性平，有健脾补中，养心安神，利水渗湿的功能。主治水肿尿少，痰饮眩悸，脾虚食少，便溏泄泻，心神不安，惊悸失眠［1］。近年来，茯苓中多糖的成分研究也引起了人们的广泛关注，但其挥发性成分系统性研究未见报道；采用水蒸气蒸馏法对茯苓超微粉、普通粉的挥发性成分提取以及挥发性成分的对比研究，也未见报道。
       1   仪器与材料
       1.1  仪器美国惠普公司（ Hcwlctt Packard）HP-6890/HP5973 GC-MS气质联用仪；挥发油提取仪；SYFM-8Ⅱ型超微粉碎机(济南松岳机器有限责任公司)；500 g摇摆式高速中药粉碎机（浙江温岭市大德中药机械有限公司）。
       1.2  试剂与材料正己烷（重蒸馏）、无水硫酸钠均为国产分析纯试剂。药材：茯苓普通粉(80目)、茯苓超微粉（300目）（均为同一批次灵芝药材，产地贵州遵义并经贵州仙龙饮片药业有限公司检验合格）。
       2    方法
       2.1    茯苓挥发性成分提取  取茯苓超微粉和普通粉各50 g，于磨口烧瓶中，加10倍量的水及适量的正己烷，采用《中国药典》挥发油提取装置［1］，加热，进行挥发油提取，分别获得无色，具有特殊气味的混合油状物2.9 ml（茯苓超微粉）、2.85 ml（茯苓普通粉）。收集上层油状物，用无水硫酸钠干燥作为供试品。
       2.2    茯苓挥发性成分定性定量分析取茯苓提取物10μl，进样，用GC/MS仪器进行分离测定。气相色谱条件：SE-30弹性石英毛细管柱30 m×250 μm×0.25 μm。柱温：60℃，保持2 min，以5℃·min-1升温至280℃， 在280℃温度下，保持2 min；气化室温度250℃；载气为99.999%的氦气；柱前压7.65 Psi ；载气流量1.0 ml/min; 进样量1μl；流速1 ml/min；分流比40:1。质谱条件：离子源为EI源；离子源温度230℃；四级杆温度150℃；电子能量70 eV；发射电流34.6μA；倍增器电压1 388V；接口温度280℃；溶剂延迟5 min；质量范围10～550 amu。定性分析：通过HP MSD化学工作站检索Nist98标准质谱图库和WILEY275质谱图库，同时结合有关质谱图文献解析，确认茯苓挥发性物质的化学成分。定量分析：通过HP MSD 化学工作站数据处理系统，按峰面积归一化法进行计算求出茯苓各化学成分的峰面积相对百分含量。
       3  结果
          
       茯苓超微粉、普通粉化学组分分别见图1～2，各化学成分的峰面积相对百分含量见表1。
       4  讨论
          
       GC/MS分析结果表明，茯苓超微粉中分离出131个成分，鉴定出67个化学成分，占挥发油总量的51.145%；茯苓普通粉中分离出103个成分，鉴出61个化学成分，占挥发油总量的59.223%。在检出的化合物中，茯苓超微粉、普通粉挥发性成分中，含有57种相同成分，其中含量最高的分别为α-柏木醇（茯苓超微粉7.936%）、反橙花叔醇（茯苓普通粉8.657%）。据报道［2］，灵芝经超微粉碎后菌丝绝大部分被打散成40μm以下片段,并有大量被打损的菌管细胞碎片，而灵芝普通粉只有部分的菌丝被打散，长度多为几百至几千微米，很少被打断；灵芝中的主要有效成分大多存在于细胞内部。破壁细胞内部的有效成分很容易从破碎的细胞两端及菌竹破裂的细胞碎片转移到溶剂中，作者认为茯苓超微的原理和灵芝是一样的。所以从茯苓超微粉中分离出较多的挥发性成分（比普通粉多28个成分），但其相对含量较灵芝普通粉低（从表1可得出：在57种相同成分中，普通粉相对含量比超微粉高的占41种，而超微粉相对含量比普通粉高的仅占16种，此16种主要是烯烃的反式结构、饱合醇类及环类化合物等），其原因可能是茯苓在超微粉碎过程中因研磨缸体内壁与碾辊之间或者碾辊之间的强烈摩擦、碰撞作用而产生的局部高温而导致部分挥发性成分的损失。
       图1  茯苓超微粉挥发性成分总离子流图（略）      
       图2  茯苓普通粉挥发性成分总离子流图（略）
       表1  茯苓超微粉与普通粉检出化学成分及峰面积相对百分含量（略）
       以上检测分析结果可以看出，同一批茯苓药材的粉碎程度不同其挥发油化合物组成和含量也不尽相同，说明茯苓挥发性成分是很丰富的，需从不同角度，采取不同方法对其进行研究，本研究虽确定了茯苓部分挥发性成分的化学结构、分子量及其相对百分含量，但还有部分成分特别是茯苓超微粉有较多成分尚未鉴定出来，有待进一步研究。
       【参考文献】
         ［1］ 国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社,2005:166，151，附录64.
       
       ［2］ 杨晓强,任华荣.灵芝微粉动态提取技术初探［J］. 齐鲁药事,2005,24(12):747.