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       【摘要】 
       目的研究甘草酸对芍药苷大鼠肠吸收的影响。方法采用大鼠肠外翻模型研究芍药苷的肠吸收，并用反相高效液相色谱法测定大鼠肠黏膜内外两侧的芍药苷浓度。结果芍药苷在大鼠十二指肠、空肠、回肠和结肠均有吸收，甘草酸几乎抑制芍药苷在各个肠段的吸收。结论甘草酸能减少大鼠肠吸收，机理可能是促进了芍药苷的外排或者促进了芍药苷在大鼠体内的转化。
       【关键词】  芍药苷； 甘草酸； 肠外翻模型
       Influence of Glycyrrhizin on Intestinal Absorption of Paeoniflorin by the Everted Rat Gut Sac Model
       LI Na, CHEN Xijing*, WU Lei, LU Yang, HE Yan, SU Yunming
       （Key Laboratory of Drug Metabolism & Pharmacokinetics, China Pharmacological University, Nanjing, 210009, China; Heilongjiang University of Chinese Medicine, Haerbin 150040, China）
       Abstract：ObjectiveTo study the effects of glycyrrhizin on intestinal absorption of paeoniflorin by the everted rat gut sac model.MethodsUsed a simple RP-HPLC method for the determination of paeoniflorin in the Krebs fluid. ResultsPaeoniflorin could be absorbed in duodenum, jejunum, ileum and colon of rats, and glycyrrhizin could inhibit the absorption of paeoniflorin. ConclusionGlycyrrhizin can reduce the uptake of paeoniflorin, and the mechanism is that it can improve the efflux from intestinal cells or the biotransformation of paeoniflorin.
       Key words：Paeoniflorin;   Glycyrrhizin;   The everted rat gut sac model
       
       芍药甘草汤出自张仲景《伤寒论》，由白芍和炙甘草两味药组成，原方是白芍和炙甘草各12 g，功效是酸甘化阴,缓急止痛，主治拘挛疼痛诸证。甘草的主要活性代表成分有甘草酸、甘草次酸。甘草酸在大鼠体内可以代谢转化为甘草次酸。芍药苷是白芍的代表性活性成分。在研究甘草酸对芍药苷药代动力学影响时发现一个很有趣的现象：采用尾静脉注射和灌胃两种给药途径，甘草酸分别能增大和减小芍药苷的生物利用度，推测可能是甘草酸影响了芍药苷的吸收，因此设计了本实验，考察甘草酸对芍药苷的肠吸收起什么作用。
       1  材料与仪器
       1.1  仪器和试剂LC-10AT VP SHIMADZU高效液相色谱仪. SPD10AVP紫外检测器； HH2数显恒温水浴锅，常州国华电器有限公司；XW80A型旋涡混合器，上海医大仪器厂；Anke TGL16B高速离心机，上海安亭科学仪器厂。乙腈，色谱纯，美国Tedia公司；甲醇，色谱纯，美国Tedia公司。
       1.2  药品及动物芍药苷纯度98％,甘草酸纯度98％，西安富捷生物技术有限公司；SD大鼠12只，上海西普尔－必凯实验动物有限公司提供，动物合格证号：SCXK(沪)20032002，（180±20） g。
       2  方法
       2.1  HPLC系统条件HW2000色谱工作站。色谱柱为大连依利特 ODS 2 RPC18(4.6 mm×150 mm,5 μm)。流动相为乙腈-水(16/84, V/V), 流速1 ml·min-1。紫外检测波长231 nm,柱温为室温。
       2.2  Krebs液中芍药苷样品的处理及标准曲线的测定样品的处理：样品高速离心后取上清液20 μl进样。
       
       标准曲线的测定：取空白Krebs 液90 μl ,精密加入10 μl系列浓度工作液，配成浓度分别为0.025，0.05，0.1，0.2，0.4，0.8  μg·ml-1，涡旋，高速离心，取上清液20 μl进样。利用加入芍药苷浓度与测得的芍药苷面积做线性回归，得标准曲线方程：Y＝202 408X－80.906 ，R2=0.999 7。
       2.3  方法精密度取Krebs液90 μl，精密加入10 μl 工作液，配成浓度为0.05，0.2，0.8 μg·ml-1，每个浓度做5管，样品的处理同标准曲线，计算精密度，用RSD表示。低、中、高3个浓度的精密度分别为1.26％，1.25％，2.26％。
       2.4  肠管外翻模型的制备将180 g左右大鼠禁食12 h，自由饮水，脱颈椎处死，取所需肠段，用Krebs 液冲洗肠段使基本无内容物为止。将肠段移至4 ℃通有95％氧气的Krebs液中，将肠外翻，一端结扎，另一端插入空心塑料管结扎，然后注满Krebs液，随即放入盛有37 ℃恒温Krebs 液的锥形瓶中，通入95％氧气，待用。
       2.5  芍药苷吸收实验根据实验安排，大鼠分为对照组和实验组，每组6只，每只取四段肠，分别为十二指肠、空肠、回肠和结肠，按照肠管外翻模型的制备方法制备肠囊。对照组锥形瓶中Krebs液含芍药苷20μM［1］，实验组锥形瓶中Krebs液含有芍药苷20μM和甘草酸11.67 μM，两组瓶中的Krebs液体积相同。将制备好的肠囊放入锥形瓶中，同时开始计时，于60 min时取样100 μl, 并立即补充空白Krebs液100 μl，在0，60 min取肠囊外液100 μl。取样结束后拿出肠段，在两端结扎处之间量肠段的长、宽，用来计算吸收表面积。
       3  结果
          
       芍药苷在四个肠段均有吸收，甘草酸能减少芍药苷在各个肠段的吸收，加入甘草酸后芍药苷在十二指肠、空肠、回肠和结肠的平均单位面积吸收量分别是原来的0.61，0.60，0.34，0.60倍。见图1。
       图1  甘草酸对芍药苷大鼠肠吸收的影响（略）  
       4  讨论
          
       芍药苷的口服生物利用度很低，在前面的实验结果中其生物利用度约为7％。药物外排转运体P-糖蛋白是药物生物利用度低的一个很重要因素，其广泛存在于肠上皮细胞、血脑屏障内皮组织、肝细胞和肾小管细胞等正常组织的细胞膜上。文献报道芍药苷可能同地高辛一样为P－糖蛋白（P-gp）底物，维拉帕米和奎尼丁可以显著增加芍药苷的肠吸收［1］。芍药苷在肠道菌群作用下能被代谢转化，其代谢物有活性。
       
       甘草酸和芍药苷的相互作用机制比较复杂，在芍药甘草汤中，甘草配伍芍药可以显著增加甘草酸、甘草次酸的血药浓度和生物利用度［2］，芍药甘草汤总苷的抗炎镇痛作用明显强于白芍总苷和甘草总苷［3］。无论从药代动力学角度还是药效学角度，都证明了芍药和甘草配伍的合理性。
       
       给大鼠联合静脉注射芍药苷和甘草酸，芍药苷的血药浓度增大，生物利用度也变大；给大鼠同时灌胃芍药苷和甘草酸后，芍药苷的峰浓度虽然有所增大，达峰时间提前，但是芍药苷的代谢消除加快，生物利用度反倒降低，说明甘草酸对芍药苷的吸收有很大影响。本实验采用体外模型，用外标法定量，样品离心后直接进样。结果显示，在肠囊外翻模型中，甘草酸减少芍药苷在十二指肠、空肠、回肠和结肠的吸收，回肠最明显，与灌胃结果趋势相同。 大鼠肠外翻实验操作虽然简单，但随机因素太多，还需用细胞吸收模型进一步确证。目前关于甘草酸和芍药苷的相互作用机制方面的研究不是很多，通过本实验结果初步推测甘草酸和芍药苷可能受同一转运体调节，在大鼠小肠和结肠，甘草酸竞争性抑制了芍药苷的吸收
       【参考文献】
         　［1］ Kelvin Chan, Zhong Qiu Liu , Zhi Hong Jiang, et.al. The effects of sinomenine on intestinal absorption of paeoniflorin by the everted rat gut sac model［J］. Journal of Ethnopharmacology, 2006, 103: 425.
       
       ［2］ 项 琪,程 刚,陈济民. 芍药甘草汤在大鼠体内药代动力学研究［J］. 中国药学杂志, 2000, 35 (9): 615.
       
       ［3］ 刘陶世，赵新慧，段金廒，等. 芍药甘草汤总苷抗炎镇痛作用的配伍研究［J］. 中药新药与临床药理, 2007,18 (6): 427.