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       【关键词】  人参皂苷
        摘要：目的：建立人参皂苷Rg1、Re的含量测定方法。方法：采用HPLC色谱法，流动相为乙腈0.05%磷酸(199∶801)，检测波长为203 nm,Echrom C18柱。结果：人参皂苷Rg1在0.032～0.192 mg/ml范围内线性良好；人参皂苷Re在0.024～0.144 mg/ml范围内线性良好。平均回收率为97.59%，RSD为1.64%。结论：该方法简便稳定，准确，重现性好，可用于控制人参药材的质量。
        关键词：人参；人参皂苷Rg1；人参皂苷Re；高效液相色谱法
        人参作为贵重药材，含有人参皂苷和多糖等成分。具有大补元气、复脉固脱、补脾益气，生津，安神的功效。用于体虚欲脱，肢冷脉微，脾虚食少，肺虚喘咳，津伤口渴，内热消渴，惊悸失眠，阳痿宫冷；心力衰竭，心原性休克等。本文参考《中国药典》2000年版Ⅰ部人参项下含量测定方法［1］，建立了人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的含量测定方法。结果表明，本实验所建立的方法含量重现性良好，专属性强，数据比较稳定。
           1仪器与试药
        1.1仪器Agilent 1100型高效液相色谱仪；色谱柱：Echrom C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)Echrom工作站；AE240型双量程电子分析天平(十万分之一)。
        1.2试剂高效液相用试剂为色谱纯，其余均为分析纯。
        1.3对照品为中国药品生物制品检定所提供(人参皂苷Rg1，批号0703-200221，供含量测定用；人参皂苷Re，批号110754-200218，供含量测定用)。
        1.4药材人参购自安徽亳州市场，经鉴定符合《中国药典》要求。
           2方法学考察
        2.1色谱条件流动相为乙腈0.05%磷酸(199∶801)，检测波长为203 nm,Echrom C18柱，理论塔板数按人参皂苷Re峰计算不得低于2 500。
        2.2对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rg1对照品8.00 mg，人参皂苷Re对照品6.00 mg，置10 ml量瓶中，加甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀；精密量取1 ml，置5 ml量瓶中，加甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得(每1 ml含人参皂苷Rg1 0.160 mg，人参皂苷Re 0.120 mg)。
        2.3供试品溶液的制备取本品适量，粉碎成细粉(过4号筛)，取约1.0 g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇50 ml，精密称定重量，回流提取3 h，冷却，用甲醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液25 ml，置水浴上蒸干，残渣加饱和氯化钠溶液15 ml分次溶解，转移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取6次，15 ml/次。合并正丁醇液，用氨试液洗涤4次，30 ml/次。再用正丁醇饱和的水洗涤2次，30 ml/次。合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解，移至5 ml量瓶中，并加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液。
        2.4测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，测定。
        2.5线性关系的考察精密吸取混合对照品溶液(每1 ml含人参皂苷Rg1 0.800 mg，人参皂苷Re 0.120 mg)0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 ml分别置5 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得到不同浓度的对照品溶液。分别精密吸取10 μl，注入液相色谱仪进行测定，测得各峰面积。结果见表1～2。以人参皂苷Rg1对照品溶液的浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，得回归方程为y=3 761.508 9x+2.989 3,r=0.999 0；以人参皂苷Re对照品溶液的浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，得回归方程为y=2 972.404 8x-1.182,r=0.999 2。
        表1人参皂苷Rg1的线性关系考察结果（略）
        结论：人参皂苷Rg1在0.032～0.192 mg/ml范围内线性良好；人参皂苷Re在0.024～0.144 mg/ml范围内线性良好。
        2.6精密度实验精密吸取同一对照品溶液(人参皂苷Rg1 0.160 mg/ml，人参皂苷Re 0.120 mg/ml)，连续进样5次，10 μl/次。分别进行测定。结果见表3～4。
        表3人参皂苷Rg1精密度实验结果（略）
        表4人参皂苷Re精密度实验结果（略）
        结论：该方法精密度良好。
        2.7稳定性实验取供试品1.0 g(批号为030418)，照供试品溶液的制备方法进行操作，制备一份供试品溶液，间隔一定时间进样10 μl，进行测定。结果见表5。
        表5稳定性实验结果（略）
        结论：供试品溶液在制备后9 h内，人参皂苷Rg1T 人参皂苷Re的总量基本稳定。
        2.8重现性实验精密称取同一批号(批号为030418)样品，制成5份供试品溶液，分别进样10 μl，进行测定。结果见表6。
        结论：该方法重现性良好。
        2.9加样回收率实验精密称取5份已知含量(0.50 mg/g)的样品(批号为030418)约1.0 g，分别精密加入混合对照品溶液(人参皂苷Rg1 0.800 mg/ml，人参皂苷Re 0.600 mg/ml)1 ml，照供试品溶液的制备方法操作，分别制成5份样品溶液，各进样10 μl，测定，计算样品的含量及回收率。结果见表7。
        表6人参皂苷Rg1重现性实验结果（略）
        2.10样品的含量测定取人参药材(批号分别为030418，031026，040119)照供试品溶液的制备方法分别制得3批样品的供试品溶液，依法进行含量测定，样品测定结果见表8。
        表8样品中人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的总量测定（略）
           3讨论
        3.1供试品溶液的制备方法考察为了使人参皂苷的提取更完全，对处理后的水层用水饱和的正丁醇振摇提取多次，并用薄层色谱的方法对水层是否残留人参皂苷作了相应的鉴别，在第6次时薄层色谱未检出人参皂苷，故提取次数定为6次；人参皂苷属于末端吸收，存在很多影响因素，为了使人参皂苷的理论板数和分离度达到要求，故加氨试液洗涤正丁醇层4次，加正丁醇饱和的水洗涤正丁醇层2次，尽量除去在203 nm处干扰人参皂苷测定的杂质。
        3.2配制流动相时，乙腈与0.05%磷酸的比例一定要准确，否则会影响出峰结果。先取规定量的0.05%磷酸加入量瓶中，再取规定量的乙腈，摇匀，用乙腈补加到刻度，这样得到的流动相稳定，测得的结果重现性也好。曾尝试先取一定量乙腈加入量瓶中，再取一定量的0.05%磷酸加入量瓶，摇匀，用0.05%磷酸补加至刻度配得流动相，用此流动相测得的结果重现性不好。
           参考文献：
        ［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：66.
        (河南仲景保健药业有限公司，河南 郑州450001)