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       【摘要】 
       目的对贵州余庆不同品种、不同采收期及不同加工方法栽培的吴茱萸进行质量对比研究，为吴茱萸GAP规范化种植提供科学依据。方法采用高效液相色谱法， Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为乙腈-水(56∶44)；流速为1.0 ml·min-1；检测波长为225 nm。 结果不同品种质量差异不大,不同采收期及不同加工方法的栽培吴茱萸质量存在较大差异。结论 能为贵州余庆栽培吴茱萸的品质优劣及GAP规范化种植和种植标准操作规程的制定提供一定的科学依据。
       【关键词】  吴茱萸； 吴茱萸碱； 吴茱萸次碱； 高效液相色谱
       Comparative Study on the Quality of Rutaecarpine in Yuqing
       LUO Jun, ZHANG Liyan*,YANG Yuqin,YANG Jialin,LI Jian,XIE Yu,ZHU Jinyi
       （Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guizhou  Guiyang  550002，China； Qian Long National Pharmaceutical Co., Ltd., Yuqing, Guizhou,564407，China）
       Abstract：ObjectiveThe comparative research  of the quality of Rutaecarpine  for  differrent sorts  of  Rutaecarpines at different adopting periods in different approaches in Guizhou could be used as scientific ground to the regular planting of Rutaecaopine GAP. MethodsThe samples were determined by HPLC. Diamonsil C18 column (250 mm ×4.6 mm, 5 μ m) was used, the mobile phase consisted of acetonitrile - water (56∶44) with flow rate at 1.0 ml·min-1 , and the detection wavelength was set at  225 nm. ResultsLittle difference was found in the quality of different varieties, but there was large difference in the quality of different harvest  periods and different processing methods of cultivation.ConclusionThis can provide scientific  ground for quality ,GAP regular planting  and standard planting ways of  Evodia Rutaecarpa  in Yuqing Guizhou Province.
       Key words：Evodia rutaecarpa;   Evodiamine ;   Rutaecarpine;    HPLC
       
       吴茱萸始载于《神农本草经》，主产于贵州、湖南、陕西、浙江、四川等地。为贵州著名道地药材、常用苗药，占全国总产量的30%左右。具有疏肝下气、温中散寒、开郁止痛、燥湿助阳功能［1］。目前，贵州余庆已按照GAP要求建立了具有一定规模的吴茱萸生产基地。因此，解决吴茱萸药材质量控制问题，对贵州余庆不同品种、不同采收期及不同加工方法栽培的吴茱萸进行质量对比研究，能为吴茱萸品质优劣及其GAP规范化种植和种植标准操作规程的制定提供科学依据。
       1   仪器与试药
       1.1   仪器Agilent1100高效液相色谱仪；AG135 型电子天平(梅特勒-托利多公司)；CH-250 型超声波清洗机（天津恒奥科技公司，功率250W，频率33kHz）。
       1.2   试药乙腈为色谱纯(天津市科密欧化学试剂开发中心)，水为娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯。
       
       吴茱萸样品采自贵州余庆吴茱萸GAP基地，经贵阳中医学院何顺志研究员鉴定为芸香科植物吴茱萸Evodia rutaecarpa（Juss.）Benth.,疏毛吴茱萸Evodia rutaecarpa（Juss.）Benth.var.bodinieri（Dode）Huang。
       
       吴茱萸碱（批号：11802－200504，供含量测定用）、吴茱萸次碱（批号：110801－200505，供含量测定用）均购于中国药品生物制品检定所。
       2   方法与结果
       2.1   色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水(56∶44)；检测波长为225 nm ；柱温：25℃，流速：1.0 ml·min-1；进样量为5μl；理论板数以吴茱萸碱峰计算应不低于3 000。
       2.2   对照品溶液  分别精密称取干燥至恒重的吴茱萸碱和吴茱萸次碱对照品适量，用甲醇制成浓度分别为0.025 6，0.0295 mg·ml-1的混合对照品溶液。
       2.3   供试品溶液  精密称取吴茱萸药材(粉碎，过60目)0.2 g，置50 ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，称重，超声处理20 min，放冷，补重，滤过，过0.45 μm微孔滤膜，即得。
       
       对照品、样品色谱图如图1～3。
       图1  对照品色谱图（略）
       图2  吴茱萸色谱图（略）
       图3  疏毛吴茱萸色谱图（略）
       2.4  线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液2，4，6，8，10，12，14μl进样，于225 nm处分别测定吴茱萸碱和吴茱萸次碱的峰面积。以进样量（μg）为横坐标（X），以峰面积（A）为纵坐标（Y）计算回归方程：吴茱萸碱：Y=8 863.8 X+ 8.047 9，r=1.000 0，吴茱萸次碱：Y=4 596.5X-2.512 6，r= 0.999 95。结果表明，吴茱萸碱、吴茱萸次碱在0.051 2～0.358 4 μg，0.059～0.413 μg范围内线性关系良好。
       2.5   精密度实验精密吸取混合对照品溶液5 μl，连续进样6次，在上述色谱条件下测定峰面积，结果吴茱萸碱和吴茱萸次碱峰面积RSD分别为0.34%，0.23%，表明精密度良好。
       2.6   重复性实验精密称取同一样品6份，按上述供试品溶液的制备方法和色谱条件测定，结果吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量RSD分别为1.30%，2.81%，表明该方法的重复性良好。
       2.7  稳定性实验精密称取吴茱萸药材0.2 g，按供试品溶液的制备方法处理，在同一色谱条件下分别在2，4，6，8，10 h进样测定，结果吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量RSD分别为1.67%，2.53%，表明样品在8h内基本稳定。
       2.8  加样回收率实验精密称取已知含量的吴茱萸药材0.1 g，分别精密加入吴茱萸碱和吴茱萸次碱对照品溶液，按供试品溶液制备方法处理，测定吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量，计算回收率。 吴茱萸碱、吴茱萸次碱平均回收率分别为98.2%，102.0 %，RSD分别为0.95%（n=6），1.5%（n=6）。
       2.9  样品测定
       2.9.1  不同品种吴茱萸含量测定本实验比较不同品种之间吴茱萸总碱的差异。结果见表1。
       表1  不同品种吴茱萸含量测定结果（略）
       2.9.2  不同采收期吴茱萸含量测定本实验比较不同采收期吴茱萸之间吴茱萸总碱的差异。结果见表2。
       表2  不同采收期吴茱萸含量测定结果（略）
       2.9.3  不同加工方法吴茱萸的含量测定比较不同加工方法吴茱萸之间吴茱萸总碱的差异。结果见表3。
       表3  不同加工方法吴茱萸药材含量测定结果（略）
       3  结果与讨论
          
       贵州余庆主要栽培品种疏毛吴茱萸、吴茱萸质量差异不大，均高于《中国药典》标准。 而不同采收期对疏毛吴茱萸和吴茱萸质量有明显影响，疏毛吴茱萸在9月下旬采收最佳，吴茱萸应于9月中旬采收较好；疏毛吴茱萸应采取直接晒干或55℃烘干加工方法，而吴茱萸50℃烘干效果最好。
       3.1  提取方法选择本实验以甲醇作为提取溶剂，对索氏提取、加热回流提取、超声提取和冷浸提取4种提取方法进行对比研究，结果超声提取时吴茱萸碱、吴茱萸次碱含量最高，说明超声提取较完全。同时对超声时间进行考察，结果表明超声处理时间对吴茱萸碱、吴茱萸次碱含量无显著影响。
       3.2  提取溶剂选择 根据吴茱萸碱、吴茱萸次碱结构特点和溶解性质，在实验中选择了甲醇、70%乙醇、75%乙醇、80%乙醇、乙醇、醋酸乙酯进行考察，结果发现除甲醇外，其余提取溶剂所得色谱峰峰形和分离度均较差，故选择甲醇作为提取溶剂。
       3.3  提取溶剂量选择  分别对甲醇15，25，35，45，55 ml进行考察。结果表明不同提取溶剂量对吴茱萸碱、吴茱萸次碱含量无明显影响，25 ml即可将吴茱萸碱、吴茱萸次碱提取完全。
       3.4  流动相选择  根据有关文献，分别考察了不同比例的乙腈-0.04%辛烷璜酸钠［1］（《中国药典》方法）、乙腈-水［2］、甲醇-水［3］，结果发现以《中国药典》方法为流动相时分离度达不到要求且峰拖尾现象较严重，同时辛烷璜酸钠对色谱柱有一定损伤作用，故未采用。而以乙腈-水（56∶44）为流动相时，色谱峰分离度好，峰形好，保留时间适中，因此选定此系统为测定流动相。
       
       致谢：贵阳中医学院冉懋雄研究员帮助收集样品并对论文撰写进行了指导，在此表示衷心感谢！
       【参考文献】
         　［1］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：人民卫生出版社,2005：118.
       
       ［2］ 夏玉凤,戴 岳,张艳立.疏毛吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量的动态变化［J］.中国野生植物资源,2006, 25(10): 53.
       
       ［3］ 张霄翔,段永军,郭树森.异位康颗粒的质量标准研究［J］.中成药,1998,20(10):10.