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       【关键词】  高效
        摘要：目的：测定金青感冒颗粒中绿原酸的含量。方法：采用高效液相色谱法（HPLC）测定，色谱柱为Waters Symmetry  C18（5 μm，3.9 mm×150 mm不锈钢柱），流动相为乙腈0.05 mol/L KH2PO4（H3PO4调pH 3.0）水（8∶50∶42），检测波长325 nm。结果：平均回收率为98.43%，RSD=2.20%。结论：该方法简便、准确，可用于金青感冒颗粒的质量控制。
        关键词：高效液相色谱法；金青感冒颗粒；绿原酸
        金青感冒颗粒是由金银花、大青叶、板蓝根、鱼腥草等9味中药制成的纯中药制剂，具有辛凉解表，清热解毒之功效，用于感冒发热，头痛咳嗽，咽喉疼痛。本方收载于部颁标准第14册，但标准中仅收载了鉴别项，未有含量测定方法，为了提高本品的质量标准，保证临床疗效，选择本方中君药金银花中抗菌消炎的有效成分绿原酸［1］作为指标，采用高效液相色谱法［2］，为有效地控制本品质量提供了可靠的实验数据。
           1仪器与试药
        1.1仪器Waters 600E高效液相色谱仪，2996PDA检测器；Waters 717自动进样器。
        1.2试药绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号为110753-200212）；乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯；金青感冒颗粒由西安天一制药有限责任公司提供。
        2实验方法与结果
        2.1样品溶液的制备取本品装量差异项下的颗粒，研细，取细粉约0.8 g，精密称定，置25 ml棕色量瓶中，滴加甲醇约1.5 ml使湿润，继续加50%甲醇约20 ml，超声处理20 min，放冷，加50%甲醇至刻度，摇匀，离心（3 000 r/min）10 min，精密量取上清液5 ml，置10 ml棕色量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
        2.2对照品溶液的制备取绿原酸对照品2 mg，精密称定，置10 ml棕色量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 ml，置25 ml棕色量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1 ml中含绿原酸40 μg）。
        2.3色谱条件与进样分析Waters Symmetry  C18，5 μm，3.9 mm×150 mm不锈钢填充柱。流动相为乙腈0.05 mol/L KH2PO4（H3PO4调 pH 3.0）水（8∶50∶42）；流速1.0 ml/min；检测波长325 nm；柱温35℃。
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，以外标两点法计算含量。在上述色谱条件下，样品中绿原酸与其它成分色谱峰完全分离，阴性对照无干扰。见图1。
        2.4线性关系考察精密称取绿原酸对照品10.78 mg，置10 ml棕色量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，再从中分别精密量取0.5 ，1.0，1.0，1.0，1.0，2.0 ml，分别置200，200，100，50，25，25 ml棕色量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，分别吸取上述不同浓度的溶液各20 μl，注入液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积值为纵坐标，进样浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=59 949X-26 235，r=1.000。表明绿原酸对照品在2.695～86.24 μg间呈良好线性关系。
        2.5精密度实验精密吸取同一对照品溶液20 μl，连续进样6次，RSD=0.15%。
        2.6稳定性试验取同一份对照品溶液分别于0，1，2，4，8，24 h进样测定，结果表明绿原酸色谱峰面积无明显改变，RSD=0.40%。
        2.7重现性实验取同一批号金青感冒颗粒样品5份，按样品分析方法测定绿原酸含量，RSD=0.95%，样品中绿原酸平均含量为1.19 mg/g。
        图1金青感冒颗粒绿原酸对照品、供试品及阴性对照的色谱图（略）
        2.8回收率实验取已测含量的样品（批号030701）粉末约0.4 g，精密称定，精密加入绿原酸对照品溶液（1.044 mg/ml）0.5 ml，按“样品测定”项下方法进行提取，测定，计算，得平均回收率为98.43%，RSD=2.20%，结果见表1。
        表1金青感冒颗粒绿原酸回收率试验结果（略）
           3讨论
        3.1金青感冒颗粒为收载于部颁标准14册的品种，其质量标准项下无含量测定。本实验采用君药金银花中有效成分绿原酸为指标，以高效液相色法测定含量来控制本品质量，操作简便，重现性好。
        3.2样品提取方法的选择，曾试用超声、回流及溶剂萃取等方法，结果以超声提取操作简便，样品含量较高，供试液杂质少。
        3.3经实验，绿原酸对照品及供试品溶液，采用棕色量瓶，测定结果较为稳定。
           参考文献：
        ［1］国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分手册［M］.北京：人民卫生出版社，1986：209210.
        ［2］张丹，李章万，姜焱.HPLC测定金银花、茵陈及其几种中成药中绿原酸的含量［J］.药物分析杂志，1996，16(2)：8385.
        (山东省生物药物研究院，山东 济南250014)