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       【摘要】 
       目的研究青梅茎中提取岩白菜素的最佳工艺。方法以岩白菜素含量为指标，比较冷浸提取、超声提取、回流提取3种方法提取物中岩白菜素含量。并以正交实验确定回流提取的最佳工艺。结果3种提取方法中回流提取的提取物中岩白菜素含量最高，正交实验优化条件为：料液比为1：15，提取时间为1.5 h，提取次数1次。结论在此最佳参数组合下，岩白菜素的含量为0.23%。
       【关键词】  青梅； 岩白菜素； 提取工艺
       Study on the Extraction Technology of Bergenin from the Stem of Vatica Mangachpoi Blanco
       MO Zhengrong, CAI Renwen, LI Jiuhui,CHEN Guangying*,HAN Changri 
       （Key Lab of Tropical Medicinal Plant Chemistry of Hainan Province, College of Chemistry & Chemical Engineering, Hainan Normal University, Haikou 571158, China）
       Abstract：ObjectiveTo study the best extraction technology of bergenin from the stem of Vatica Mangachpoi Blanco growing in Hainan.MethodsThe cold-soaked extracting,ultrasonic extraction and heat reflux extraction technologies were respectively used for extraction of bergenin. According to the orthogonal design,the optimum reflux extraction was sought through experimental investigation.ResultsThe optimum parameters of extracting bergenin were as follows:extracting for 1.5 hours,one time,and 1:15 of the ratio of material and solvent.ConclusionThe yielding content of bergenin was 0.23% at the condition of optimum parameters.
       Key words： Vatica mangachpoi Blanco;   Bergenin;   Extraction technology
       
       青梅Vatica mangachpoi Blanco系龙脑香科(Diptercocarpaceae)青梅属(Vatica genus)植物，主要分布于海南保亭、三亚、东方、白沙、乐东、万宁和琼中等地［1］。在民间，海南青梅叶长期用作杀菌消毒、治疗肝炎及提取中药龙脑香。
       
       通过对青梅茎的有效成分的提取、分离、纯化及结构鉴定，确定青梅中含有岩白菜素(bergenin ) ［2］。岩白菜素主要作用是止咳祛痰，但近年的药理实验发现岩白菜素还具有抗炎、护肝、抗溃疡、提高免疫等作用［3］。陈光英等［4］用高效液相色谱法测定青梅茎皮中岩白菜素的含量，其含量为0.8%。
       
       由于青梅茎中含有大量的岩白菜素，而青梅茎中岩白菜素的提取工艺研究还未见报道，因此，为了充分利用青梅药用植物，本实验拟对青梅茎岩白菜素的提取工艺进行实验和比较，以期优化、筛选出理想的提取工艺。
       1  器材
          
       大连依利特公司UV230紫外检测器，P230高压恒流泵（双泵），EC2000工作站；日本SHIMADZU十万分之一天平；甲醇为色谱纯, 水为重蒸水, 其余试剂为分析纯；岩白菜素标准品（购自芜湖尔塔医药科技有限公司）；青梅药材采自海南万宁，经海南师范大学生命科学学院钟琼芯副教授鉴定为龙脑香科青梅属植物Vatica mangachpoi Blanco，样本保存在海南师范大学热带药用植物化学重点实验室内。
       2  方法
       2.1  色谱条件［4］色谱柱：Kromasil C18 (250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：A：0.5% 冰乙酸水溶液（V/V），B：甲醇。梯度洗脱，洗脱条件如下：0 min(A:80,B:20 V/V)；10 min(A:65,B:35 V/V)；25 min(A:64,B:36 V/V)；30 min(A:0,B:100 V/V)；42 min(A:20, B:80 V/V)；流速：0. 4 ml· min-1；检测波长274 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μl。在此色谱条件下，青梅茎中岩白菜素样品与岩白菜素对照品相比较，保留时间基本一致，在274 nm波长处其它色谱峰干扰小，青梅茎岩白菜素得到较好的分离而且含量较高，见图1和图2。
       图1  岩白菜素对照品的HPLC图谱（略）
       2.2  标准曲线的绘制精密称取干燥至恒重的岩白菜素对照品10 mg , 置于25 ml 容量瓶中，加甲醇溶解并定容，制成浓度为0.4 mg·ml-1 的储备液。以此为母液配制浓度为0.2 mg·ml-1溶液；再以0.2 mg·ml-1为母液，配制浓度为0.1 mg·ml-1的溶液；依次类推，配制成浓度分别为0.05 ，0.02 5，0.012 5 mg·ml-1的标液［4］。精密吸取不同浓度的对照品溶液各10μl，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标，对照品进样质量为横坐标，进行回归分析，则回归方程为Y＝3961.7X-103.4，R2=0.999 1，结果表明，在0.125～4 μg之间，峰面积与进样量之间的线性关系良好。该定量分析方法可用于青梅茎提取液中岩白菜素含量的检测分析。
       图2  青梅茎岩白菜素样品的HPLC图谱（略）
       2.3  不同提取方法提取物中岩白菜素的含量比较［5］称取青梅茎粗粉1.0 g 3份，分别加15倍量95％的乙醇，用冷浸提取法冷浸两次，1天/次；超声提取法提取两次，20 min/次；回流提取法提取两次，1.5 h/次。分别合并两次提取液，过滤，浓缩定容置10 ml容量瓶,备用。按“2.1”项色谱条件测定岩白菜素含量，结果表明，用回流提取法得到的提取物岩白菜素含量最高。所以以下实验选择回流提取法进行提取条件优化筛选。
       2.4  回流提取法提取条件优化筛选［6～8］
       2.4.1  回流提取法单因素实验
       2.4.1.1  不同提取溶剂对提取物岩白菜素含量的影响采用水、石灰水和浓度分别为30%，40%，50%，60%，70%，80%，95%的乙醇作为提取溶剂进行筛选实验，结果表明，用乙醇提取的岩白菜素含量比用水、石灰水提取的都要高，不同浓度的乙醇提取的岩白菜素含量也不同，60%的乙醇为溶剂提取岩白菜素的含量最高，因此选择60%乙醇为最佳提取溶剂。
       2.4.1.2  提取时间对提取物岩白菜素含量的影响分别以1，1.5，2，2.5，3 h为提取时间进行筛选实验，结果表明：随着提取时间的延长，所提取的青梅茎中的岩白菜素的含量逐渐减少，2 h后岩白菜素含量趋于较稳定的状态，故认为1 h为适宜提取时间。
       2.4.1.3  提取次数对提取物岩白菜素含量的影响选择提取次数分别为1次、2次、3次进行筛选实验，结果表明：提取次数为1次时，岩白菜素含量最高，之后略有下降并趋于较稳定的状态。因此，以1次为较理想的提取次数。
       2.4.1.4  提取料液比对提取物岩白菜素含量影响选择料液比1：10，1：15，1：20，1：25分别进行实验，结果表明：随着料液比的增大，所提取岩白菜素的含量逐渐增大，当料液比为1：15时，出现最大值，之后下降。因此，认为料液比以1：15为最佳值。
       2.4.2  回流提取法多因素正交实验在上述单因素实验的基础上，选取了料液比 (A)、提取次数 (B)、提取时间(C)作为考察因素，分别称取1.0g 青梅茎粗粉，以岩白菜素的含量作为考核指标，按3因素3水平进行正交实验，其正交实验设计见表1，正交实验结果统计见表2。
       表1  回流提取法多因素正交实验设计（略）
       表2  L9(34) 回流提取法多因素正交实验结果统计（略）
       以正交实验法优选了乙醇回流提取青梅茎中岩白菜素的提取工艺，结果表明，各因素对提取效果的影响主次关系为提取料液比(A) >提取次数（B）>提取时间（C），确定最佳提取工艺为：提取料液比1:15， 提取次数1，提取时间1.5 h。
       2.5  最佳工艺验证称取青梅茎粗粉1.0 g，平行3份。按上述正交实验法优选的最佳工艺条件进行实验。结果见表3。
       表3  最佳工艺条件验证（略）
       3次重复最佳工艺验证表明，本工艺设计合理，稳定可行。
       3  结论
          
       本实验确定了回流提取法提取青梅茎岩白菜素的工艺条件。单因素实验最佳条件为：60%乙醇为提取溶剂、提取料液比为1:15，提取次数为1，提取时间为1h。正交实验最佳工艺为：提取料液比1:15，提取次数1，提取时间1.5 h。在优化条件筛选时，以正交实验结果为准。
       
       青梅茎中岩白菜素的含量为0.23%，而青梅茎皮中岩白菜素的含量为0.8%，主要是由于青梅茎比青梅茎皮含有较多的纤维素所致。
       【参考文献】
         ［1］ 吴德邻. 海南及广东沿海岛屿植物名录［M］.北京：科学出版社,1994 ,58.
       
       ［2］ 莫峥嵘，陈光英，韩长日，等.青梅茎的化学成分研究（Ⅰ）［J］.中山大学学报（自然科学版），2007， 46(2)：126.
       
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       ［4］ 陈光英，蔡宝华，吴晓鹏，等.HPLC法测定青梅茎皮中岩白菜素［J］.中草药，2008，39(5):776.
       
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