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       【摘要】 
       目的研究软肝颗粒（HG颗粒）对CCl4（四氯化碳）复合法致肝纤维化大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总蛋白(TP )、白蛋白（ALb）及球蛋白（Glob）含量的影响。方法70只SD大鼠，除空白对照组10只外，其余各组大鼠皮下注射CCl4，同时给予高脂饲料和20%乙醇喂养6周建立肝纤维化大鼠模型，存活大鼠用分组软件按性别、体重随机分为5组，分别予HG颗6，3，1.5 g/kg 3个剂量组、复方鳖甲软肝片1.0 g/kg灌胃治疗4周。对照观察两药物对模型大鼠血清ALT，AST，TP，Alb及Glob的影响。结果模型大鼠血清ALT、AST活力显著增高，血清TP含量略升高，Alb含量显著降低，Glob含量显著升高。HG颗粒治疗后降低ALT和AST活性，降低TP和Glob含量，增加Alb含量，复方鳖甲软肝片亦可降低ALT，AST活性，降低TP和Glob含量，增加Alb含量。综合疗效HG颗粒优于复方鳖甲软肝片。结论HG颗粒能有效治疗CCl4复合法所致肝纤维化大鼠。
       【关键词】  HG颗粒； 丙氨酸氨革转移酶； 天冬氨酸氨基转移酶； 总蛋白； 白蛋白； 球蛋白
       Effects of HGKL on ALT，AST，TP，Alb and Glob in Blood Serum of HF Model Rats Induced by Carbon Tetrar-chloride Compounded Other Factors
       BI Hongzheng, XUE Jingli, HUANG Guojun, ZHANG Jintao, WANG Chunyao
       （Basic Medical College of Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, China; Laboratory Animal Center of Zhengzhou University, Zhengzhou  450052, China; Pharmacy College of Chengdu University of TCM, Chengdu   610075, China）
       Abstract：ObjectiveTo explore the effects of HGKL on ALT，AST，TP，Alb and Glob in blood serum of HF model rats. MethodsSeventy SD rats excluding ten in blank group, were injected hypodermicly by carbon tetrar-chloride,at the same time they were fed with the high fat food and 20% ethyl alcohol for six weeks to establish HF model rats.Existing rats were divided into five groups based on sex and weight by grouping software.The HF rats were administered HGKL 6，3，1.5 g/kg and FFBJRGP 1.0g/kg respectivly for four weeks. ALT，AST，TP，Alb and Glob in blood serum were determined.ResultsActivities of ALT and AST in blood serum of model rats increased markedly as compared with blank group. The content of TP increased softly,Alb decreased markedly,Glob increased markedly. Compared with model group, activities of ALT and AST，and the contents of TP and Glob in HGKL groups decreased，Alb increased. Activities of ALT and AST in FFBJRGP group decreased，contents of TP and Glob decreased，contents of Alb increased.The comprehensive action of HGKL was better than that of FFBJRGP. ConclusionHGKL has protective effects on HF rats induced by CCl4 compounded other factors.
       Key words：HGKL；  ALT；  AST；  TP；  Alb；  Glob
       
       肝纤维化(hepatic fibrosis)是各种慢性肝病进展中由于肝内纤维生成与降解失衡，导致过多的胶原在肝内沉积所致，常伴有炎症并可发展为肝硬化［1］。肝纤维化是慢性肝病重要的病理特征，也是肝硬化发生的前奏和必经中间环节。阻断肝纤维化的发生和发展，对防治肝硬化和慢性肝病具有重要意义［2］。美国著名肝病学家Hans Popper指出:“谁能阻止或延缓肝纤维化的发生，谁将治愈大多数慢性肝病”。软肝颗粒(HG颗粒)是由丹参、桃仁等中药组成的复方制剂, 此方来源于知名专家的多年临床经验总结，对肝纤维化有着良好的治疗效果。本实验旨在观察HG颗粒对CCl4 及高脂和乙醇造成的肝纤维化大鼠ALT，AST，TP，Alb及Glob的影响，评价其疗效。
       1   材料与方法
       1.1   药物、动物、仪器与试剂HG颗粒 10 g生药/袋，成都中医药大学中药炮制制剂学教研室提供，批号：041014。主要成分：丹参、桃仁、白芍、柴胡、黄芪、汉防己、冬虫夏草等；复方鳖甲软肝片 0.5 g/片，内蒙古福瑞中蒙药科技有限公司出品，批号：20030710。成分： 鳖甲、三七、赤芍、冬虫夏草、连翘、当归、紫河车、莪术、党参、黄芪、板蓝根。以上药物在临用时以蒸馏水配成相应浓度的溶液备用。
       
       健康SD大鼠70只，普通级，雌雄各半，3个月龄，190～230g，成都中医药大学实验动物中心提供，动物质量合格证号：川实动管质第11号，温度：20～25℃，湿度：40%～70%。
       
       7530紫外可见分光光度计，Agilent公司产品；TG16-WS高速离心机，湖南赛特仪器厂产品；HANGPING FA1104电子天平，上海良平仪器仪表有限公司产品。
       
       CCl4分析纯，徐州试剂厂产品，批号：00210201。橄榄油溶液，北京芳草医药公司，批号：010315；胆固醇，沈阳济世制药有限公司，批号：020425；ALT试剂盒，四川省迈克科技公司产品，批号：040302；AST试剂盒，四川省迈克科技公司产品，批号：040205；TP试剂盒，四川省迈克科技公司产品，批号：040102；Alb试剂盒，四川省迈克科技公司产品，批号：040404。
       1.2  模型建立及分组70只SD大鼠，除空白对照组大鼠10只外，其余60只第1周（首次）用纯CCl45ml/kg对大鼠背部皮下注射，第2～6周用40%CCl4-橄榄油3ml/kg对大鼠背部皮下注射，每周两次。同时第1～6周内，以高脂玉米粉饲料（79.5%玉米粉、20%猪油、0.5%胆固醇）喂养大鼠，并以20%乙醇作为大鼠的唯一饮水。连续6周，复制大鼠肝纤维化模型［3～5］。从第7周开始，按上述组别灌胃给予相应的药物或蒸馏水，①空白对照组：蒸馏水0.1ml/kg体重；②模型对照组：蒸馏水0.1ml/kg体重；③～⑤HG颗粒高、中、低3个剂量组：6，3，1.5 g生药/kg；⑥复方鳖甲软肝片组：1 g/kg，1次/d，连续4周。
       1.3  指标测定与方法末次给药后24h，从大鼠髂外静脉放血，收集血液分离血清，冷藏待测。改良赖氏法测定血清ALT，AST含量，双缩脲法测定血清TP和Alb含量，计算血清Glob含量。
       1.4   统计学处理所有数据均采用SPSS12.0进行统计学处理，多组间比较用单因素方差分析，多组间两两比较用q检验（SNK法）。各项指标结果均以±s表示。
       2   结果
       2.1   HG颗粒对CCl4复合法致肝纤维化大鼠血清ALT及AST活性的影响结果见表1。从表1可知，肝纤维化模型形成后，模型组大鼠血清ALT和AST活性比空白组大鼠升高77.44%（P<0.01）和56.34%（P<0.01）。HG颗粒治疗4周后，3剂量组使ALT活性分别降低43.2%，40.9%和32.7%（P均<0.01）。HG颗粒高、中剂量组分别降低AST活性27.3%和20.9%（P<0.05）。复方鳖甲软肝片亦能降低模型大鼠血清ALT及AST活性。
       表1  各组大鼠血清ALT及AST活性的变化（略）
       与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；n=10
       2.2   HG颗粒对CCl4复合法致肝纤维化大鼠血清TP，Alb，Glob含量的影响结果见表2。从表2可知，肝纤维化模型形成后，模型组大鼠血清TP含量比空白组增加（P>0.05），模型组大鼠血清Alb含量比空白组降低15.63%（P<0.05），模型组大鼠血清Glob含量比空白组增高10.4%（P<0.01）。HG颗粒治疗4周后，3个剂量组分别使TP含量降低6.9%（P>0.05），10.8%（P<0.01）和1.4%（P>0.05）。高、中剂量组分别使Alb增加21.5%（P<0.05）和30.8%（P<0.01）。高、中剂量使Glob含量分别降低16.7%和25.1%（P<0.01）。复方鳖甲软肝片对模型大鼠TP和Glob含量亦有显著降低作用（P<0.01）。
       3  讨论
          
       中医药治疗肝纤维化有悠久的历史，肝纤维化属中医“胁痛”范畴，中药复方治疗是祖国医学的特点所在，复方的疗效往往优于单味药物。中医中药治疗肝纤维化，具有疗效显著、费用相对低廉、且毒副反应少的特点［6］。肝纤维化的病机关键是热毒瘀结，肝脾损伤［7］。
       表2  各组大鼠血清TP，Alb，Glob含量的变化（略）
       与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；n=10
       
       CCl4诱导的大鼠肝纤维化动物模型在形态学、病理生理学的某些方面与人的肝纤维化十分相似。但单一因素注射CCl4造模虽然操作简单，但制备的周期长，成模比例低，且死亡率较高，因此，我们采用CCl4、高脂食物、酒精复合因素制作肝纤维化模型，此种模型可靠且复制时间短、形成率高、死亡率低、肝纤维化进展稳定，适合于以引起肝细胞损伤为始动机制的肝纤维化发生发展过程的动态研究［8］。
       
       HG颗粒由丹参、桃仁、白芍、柴胡、黄芪、汉防己、冬虫夏草药物组成。丹参、桃仁活血养血，化瘀止痛为君；白芍、柴胡柔肝养肝为臣；佐以黄芪益气健脾；冬虫夏草益精补肾；汉防己行水消肿，清利湿热。全方配伍，共奏活血化瘀、软坚散结、补养正气之效。与复方鳖甲软肝片相比，HG颗粒减少了化积通络的药物如鳖甲、莪术等，减少了补益药物紫河车，增加了柔肝养肝止痛的白芍、柴胡。如此组方，是因为肝纤维化属于肝硬化起始阶段，正气不甚虚弱，瘀结不甚顽固，故药味有别于治疗肝硬化疗效良好的复方鳖甲软肝片。
       
       HG颗粒可以显著降低肝纤维化大鼠血清ALT 和AST的活性。ALT 和AST是反映肝细胞膜损伤的最敏感指标，肝细胞膜的损伤，导致ALT 和AST大量溢入血液中，导致血清中ALT 和AST急剧升高。血清中ALT 和AST水平高低可以敏感地反映肝细胞损伤的程度［9］。提示HG颗粒通过保护肝细胞膜，改善肝损伤，对肝功能有着良好的保护作用，从而防止肝纤维化的发生和发展。
       
       肝纤维化模型形成后，肝纤维化大鼠血清TP，Alb和Glob的代谢发生了异常变化，血清TP含量略升高，Alb含量显著降低，Glob含量显著升高，HG颗粒对其有着良好的调节作用，表明HG颗粒能有效改善肝纤维化大鼠的血清蛋白紊乱状况。
       【参考文献】
         ［1］ 肝脏病学会肝纤维化学组.肝纤维化诊断及疗效评估共识［J］.中华肝脏病杂志,2002,10(5):327.
       
       ［2］ Friedman SL.Hepatic fibrosis.in:Schiff ER,Sorrell MF,Maddrey WC,eds.Schiffs Diseases of Liver.8thed［M］.Philadelphia:Lippncott-Raven,1999:371.
       
       ［3］ 付沛藩.小儿乙肝胶囊对大鼠肝纤维化的防治作用［J］.中国中西医结合肝病杂志,1999,9(3):25.
       
       ［4］ 杨彦芳.王氏抗肝纤方治疗肝纤维化的实验研究［J］.中国中西医结合肝病杂志,2000,10(3):19.
       
       ［5］ 王慧芳,曾 林.肝纤维化动物模型的研究进展［J］.实用医药杂志,2002,19(6):475.
       
       ［6］ 汪少林,芦秀琴,汪培玲,等.中医药抗肝纤维化研究概况［J］.甘肃中医学院学报,2005,22(2):50.
       
       ［7］ 薛博瑜,顾学兰.肝纤维化的病机认识和辨证论治［J］.南京中医药大学学报(自然科学版) ,2000,17(2):76.
       
       ［8］ 孙敬方.动物实验方法学［M］. 北京:人民卫生出版社, 2001:475.
       
       ［9］ 武谦虎,樊一桥,洪 敏,等.空心莲子草醇提取物对化学性肝损伤的影响［J］.南京中医药大学学报,2006,22(1):38.