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       【摘要】 
       目的研究山楂果的三萜酸类化学成分。方法以制备型高效液相色谱法从山楂果中分离纯化三萜酸类成分，并通过化学方法和波谱分析（IR,MS,1HNMR,13CNMR）进行成分确认。结果共获得4个三萜酸成分，并确定它们的化学结构分别为：山楂酸(Maslinic acid, Ⅰ） ，科罗索酸（Corosolic acid, Ⅱ），齐墩果酸（oleanlic acid,Ⅲ）,熊果酸（ursolic acid, Ⅳ）。 结论化合物Ⅱ为首次从该植物中获得。
       【关键词】  山楂果; 三萜酸; 科罗索酸
       Study on the Triterpene Acids in Fruit of Crataegus pinnatifida    
       CHEN Longsheng,L Yang,XU Shuwen, XIN Yang  
       （Anhui Analysis and Test Center,Hefei 230031,China）
       Abstract：ObjectiveTo study triterpene acids in the fruit of Crataegus pinnatifida . MethodsFour triterpenoidal acids were isolated from the extraction of the fruit of Crataegus pinnatifida by pre-HPLC, which were identified by chemical method and spectroscopic （IR, MS, 1HNMR, 13CNMR）.ResultsThe compounds were identified as: Maslinic acid（Ⅰ），Corosolic acid（Ⅱ），oleanlic acid（Ⅲ）, ursolic acid（Ⅳ）。ConclusionThe compounds corosolic acid is obtained from the fruit of Crataegus pinnatifida for the first time.
       Key words：The fruit of Crataegus pinnatifida;   Triterpene acids;   Corosolic acid
       
       山楂为蔷薇科山楂属植物山里红Crataegus pinnatifida Bge var majcr N.E.Br 或大果山楂C. pinnatifida Bge 及野山楂C.cuneata Sieb. et Zucc的干燥成熟果实。其果实为常用中药，据《本草纲目》记载该品具有“酸甘味温，消食积，补脾”之功效。现代药理学研究其主要功能为消食健胃、行气散淤，用于肉食积滞、胃脘胀满、泻痢腹痛、淤血经闭、产后淤阻、心腹刺痛、疝气淤痛、高血脂症治疗等。近年来的临床和动物实验研究证明山楂有降低血清总胆固醇、甘油三酯，促进心肌收缩和保护心肌不受损害，抗动脉硬化，降低血压血脂，改善血 液流变学等作用［1～2］。其化学成分主要有三萜和黄酮两大类，山楂提取物已经被用于早期充血性心力衰竭和心绞痛等疾病的治疗［3～4］。山楂的化学成分研究主要集中于黄酮类成分，而鲜有对三萜酸类化学成分的研究报道。本文通过高效液相色谱分离得到4种三萜酸，通过与标准物质比照，证实其中Ⅲ、Ⅳ分别为齐墩果酸和熊果酸，经过理化性质及光谱测定方法确定Ⅰ、Ⅱ分别为山楂酸和科罗索酸，其中科罗索酸为首次从该属植物中分离得到。
       1  器材
       1.1  仪器KNAUER 高效液相制备色谱系统（含K-1800输液泵，K-2501紫外可见检测器，Eurochrom for windows 色谱工作站）；创新通恒分析液相系统(P3000输液泵，UV3000紫外可见检测器，CXTH-3000色谱工作站)；显微熔点仪（XT-4，未校正）；红外光谱（KBr压片，Nicolet 670 FT-IR NEXUS）；核磁共振谱（1HNMR,13CNMR，DMSO－d6为内标,BRUKER 500）；质谱(Angilent)。
       1.2   材料山楂片购于合肥同仁堂药店，为干燥切片山楂果，分析色谱用甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为自制蒸馏水，熊果酸与齐墩果酸对照品购置sigma公司。
       2  方法
          
       市售的干燥山楂果切片，95%乙醇回流提取3次，4h/次。回收乙醇得浸膏，浸膏加入适量蒸馏水混匀后依次用石油醚，水饱和正丁醇萃取，分别回收后，得到正丁醇部位，甲醇溶解样品，经过制备色谱分离得到Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ。
       
       色谱条件为制备柱:C18(30 mm×300 mm, 5 μm)；流动相：甲醇∶水∶醋酸＝88∶12∶0.12(V∶V∶V)；流速：20.0 ml/min；进样量：5 ml；柱温：25℃；检测波长：215 nm。
       3  结果
          
       结构鉴定：化合物Ⅰ：白色粉末，mp269～271℃, Libermann-Burchard反应为阳性。IRVmaxKBr 3415，2945，1697，1462，1050；1H-NMR（DMSO-d6,500Hz,）δ：0.71(3H，s，H29)，0.75(3H，s，H30)，0.82(3H，s，H29)，0.92(3H，s，H24)，0.92(3H，s，H26) ，0.92 (3H，s，H27) ，1.0(3H，s，H23) ，4.22（1H，d，J=8.7Hz，H-2β），4.33(1H，dd，J=9.0，11.5，H-3α)，5.17（1H，t，J=3.4Hz，H12），3.42(1H，t，J=9.8  H18)，2.74 (1H，t，H19)，2.11 (1H，t，H20)。13CNMR(DMSO-d6,500Hz ) δ：45.6 (C1) , 67.1 (C2), 82.2 (C3), 38.9 (C4), 54.7(C5), 18 (C6), 33.2 (C7), 46.8 (C8), 47(C9), 37.6 (C10), 23.3 (C11), 121.4 (C12), 143.8 (C13), 41.3 (C14), 27.1 (C15), 22.5 (C16), 45.4 (C17), 23.3 (C18), 40.7 (C19), 30.3 (C20), 33.3 (C21), 32 (C22), 28.7 (C23), 16.2 (C24), 16.8 (C25), 17 (C26), 25.6 (C27), 178.5 (C28), 32.8 (C29), 22.9 (C30) ;EI- MS(m/z)：495［M+Na］+。13CNMR与MS数据与文献［5］值一致，故鉴定为山楂酸(Maslinic acid).
       
       化合物Ⅱ：白色粉末，mp253～255℃,Libermann-Burchard反应为阳性。IRVmaxKBr 3415，2927，1691，1458，1050；1H-NMR（DMSO-d6,500Hz,）δ：0.71(3H，s，H29)，0.71(3H，s，H30)，0.88(3H，s，H25)，0.88(3H，s，H24)，0.91(3H，s，H26) ，0.93 (3H，s，H27) ，1.1(3H，s，H23) ，4.33（1H，d，J=9.0Hz，H-2β），4.24 (1H，dd，J=8.9，11.5，H-3α)，5.17（1H，t，J=3.4Hz，H12），3.42(1H， t，J= 9.8 Hz H18)，2.74 (2H，d， H19)；13CNMR(DMSO-d6) δ：46.8 (C1) , 67.1 (C2), 82.2 (C3), 38.8 (C4), 54.7 (C5), 18.0 (C6), 32.6 (C7), 39.0 (C8), 47.0 (C9),  37.5 (C10), 22.9 (C11), 124.4 (C12), 138.2 (C13), 41.6 (C14), 27.4(C15), 23.7 (C16), 46.9 (C17), 52.3 (C18), 38.4 (C19), 38.4 (C20), 30.1 (C21), 36.2C22), 8.8(C23), 17.1 (C24), 16.4 (C25), 16.9 (C26), 23.2(C27), 78.2 (C28), 21.0 (C29), 16.9 (C30); MS：495［M+Na］+, 13CNMR与MS数据与文献［3］值一致，故鉴定为科罗索酸(Corosolic acid)。
       
       化合物Ⅰ，Ⅱ化学结构见图1。
       
       化合物Ⅲ：白色粉末， mp:281～282℃,:Lbermann-Burchar 反应呈阳性, 在改变色谱条件下HPLC保留时间齐墩果酸对照品一致，故鉴定化合物Ⅲ为齐墩果酸（oleanolic acid）.
       
       化合物Ⅳ：白色针状晶体，mp: 272～273℃；Lbermann-Burchar 反应呈阳性, 在改变色谱条件下HPLC保留时间与熊果酸对照品一致，故鉴定化合物为熊果酸。
       图1  化合物I，II的化学结构（略）  
       4  讨论
       
       　　本文通过化学及光谱方法对山楂果的化学成分的研究，利用制备色谱分离提取得到4个三萜酸类成分，其中科罗索酸（Corosolic acid）系该植物中首次分得。结果表明山楂果中三萜酸成分丰富，特别是本次首次分离得到的科罗索酸对肥胖和改善血糖吸收有着明确的作用，因此山楂在降血糖方面的功效可能不仅是黄酮类物质发挥了作用，三萜酸类成分在此功效中的作用有待进一步研究。
       【参考文献】
         ［1］ Max H P,M D,Katja S,et al.Hawthorn extract for treating chronic heartfailure:metar-analysis of randomizes trials［J］.The American Journal of Medicine,2003,14(1):665.
       
       ［2］ 胡长平，陈龙胜，忻 旸.反相高效液相色谱法测定枇杷叶中的科罗索酸［J］.色谱, 2006, 24 (5):492.
       
       ［3］ 任秀莲, 魏琦峰, 周春山,等.沉淀吸附法提取苦丁茶中的熊果酸［J］.中南大学学报（自然科学版）,2004, 35(4): 599.
       
       ［4］ Maris V,Egon K,Shyam S C.Crataegus special exreact WSR1442 improves cardiac function and reduces infarct size in a rat model of prolonged coronary ischemia and reperfusion［J］.Life Sciences,2004,74:1945.
       
       ［5］ William V. Judy, Siva P.. Antidiabetic activity of a standardized extract (GlucosolTM) from Lagerstroemia speciosa leaves in Type II diabetics A dose-dependence study［J］.Journal of Ethnopharmacology,2003,87(4):115.