文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【摘要】 
       目的探讨头穴透刺结合中药清开灵（QKL）对急性脑出血（ICH）模型大鼠脑组织损伤的保护机制。方法采用脑内注入自体血凝块复制实验性脑出血大鼠模型，观察头穴透刺结合QKL注射液对模型大鼠第1天，3天及第7天 时脑组织中内皮素（ET-1）和降钙素基因相关肽（CGRP）含量的影响。结果模型大鼠脑组织ET-1含量第1天升高，第3天尤著(P<0.01)，第7天恢复；CGRP活性各天均显著降低(P<0.01)。结论头穴透刺结合QKL注射液具有调节ET-1和CGRP水平，从而改善脑血管的功能状态，可能是其治疗出血性中风的机理之一。
       【关键词】  头穴透刺； 清开灵注射液； 脑出血； 大鼠； 内皮素； 降钙素基因相关肽
       Effect of Scalp-acupuncture Combined with Qingkailing Iniection on Brain Tissue Endothelin and Calcitonin in Acute Intracerebral Hemorrhage Rats.
        
       ZENG Qingli, WU Xuping, HE Xiaobin, PAN Fengman
       (Medical Institution of Yangtzeu University,Jingzhou 434000,China; Hubei College of Traditional Chinese Medicine,Wuhan 430061,China)
       Abstract：ObjectiveTo explore the protection mechanism of scalp-acupunctrure conbimed with Qimgkailing injection on acute intracerebral hemorrhage rats.MethodsWe dupliacated the intracerebral hemorrhage model of rat by injecting autoblood colt into brain, and brain tissue endothelin and calcitonin gene-related peptide contents were determined on the 1st,3rd,7th days after making the model.ResultsThe content of brain tissue endothelin was increased on the 1st day,and obviously on the 3rd day (P<0.01),however,it was to normal level on the 7st day,the content of brain tissue calcitonin content gene-related peptide was decreased obviously on the 1st,3rd,7th days (P<0.01).ConclusionScalp-acupuncture and injecting“Qingkailing” injection can adjust the contents of brain tissue endothelin and calcitonin,improve the functional status of Cerebrovascular tissue, which may be the possible mechanism of treating intracerebral hemorrhage.
       Key words：Scalp-acupuncture;  Qingkailing injection;  Intracerebral hemorrhage;  ET;  CGRP
       
       出血性中风是临床常见的危急重症，研究疗效确切的治疗方法，探讨其作用机理，对本病的防治具有重要意义。ET-1和CGRP为近年来发现的内皮源性收缩和舒张因子，它们共同形成一平衡系统，参与脑血管张力调节，在中风病发病中的作用已引起重视。头穴透刺能够调节血管的舒缩功能，使ET-CGRP趋于一种动态平衡，有助于缓解缺血区域的血管痉挛，改善缺血区的供血供氧［1］。QKL注射液是在“七五”“八五”研究基础上研制而成的中药制剂，经实验观察，具有改善脑水肿、抗脂质过氧化等作用［2］。为进一步探讨其对脑血管床功能状态的调节作用，本实验研究清开灵注射液结合头穴透刺方法对ET-1和CGRP变化的影响。现报道如下。
       1  材料与方法
       1.1  动物Wistar纯系大鼠，雄性，体重250～300 g之间，一般状态佳，对齿镊夹尾有逃避及嘶叫反应，购自同济医科大学实验动物中心。
       1.2  药物及试剂中药针剂清开灵10 ml/支，北京中医药大学生产，每支含黄芩苷50 mg，总氮25 mg。ET-1和CGRP试剂盒，由中国人民解放军总医院科技开发中心免疫所提供。
       1.3  动物模型的制作采用脑内注入自体血凝块复制实验性脑出血大鼠模型［3］。
       1.4  动物分组及治疗随机分为5组：①假手术组（n=30）：只给予动脉采血，钻颅打孔。②模型对照组（n=30）：给予动脉采血后，在Pellegrino图谱B坐标系定位，在立体定向仪下定左侧尾状核区部位，以15 μl/min给予40 μl的动脉血，注血时间约3 min。③头穴针刺组（n=30）：按华兴邦等［4］制定的《动物针灸穴位图谱》取穴，取病灶侧百会透悬厘穴，留针30 min，1次/d。④清开灵组（n=30）：QKL腹腔注射1 ml，1次/d。⑤头穴针刺加清开灵组（简称混合组）（n=30）：头穴针刺合QKL腹腔注射，治疗方法同头穴针刺组与清开灵组。
       1.5  标本的收集各组动物分别于第1天，3天及第7天3个时相点处死后，迅速取出脑组织，吸去血迹，放入CO2干冰中冷冻后，置于-40℃冰箱保存，用时从脑正中线切开，取部分脑组织称重后尽快放入0.1 mol/L HAc略做研磨，然后在100℃水浴中煮沸10 min，再次研磨制成匀浆，4℃ 3 000 r/min离心15min，取上清备用。
       1.6  检测方法采用放射免疫分析法测定脑组织ET-1和CGRP浓度。待测脑组织匀浆液3 000 r/min，离心10 min，分别取上清100 μl和ET-1和CGRP标准品各100 μl，分别加入抗ET-1和CGRP血清和125Ⅰ标记的ET-1和CGRP混匀，4℃冰箱24 h，加分离剂(PEG)500 μl，3 500 r/min离心15 min。弃上清液，于γ放射免疫计数器上计数，测定沉淀放射性强度。标准管(样品)沉淀计数率减去仪器本底计数率得B，零标准管沉淀计数率减去仪器本底计数率得B0，以B/B0为纵坐标，以ET-1和CGRP标准浓度为横坐标，根据样品管的B/B0，从标准曲线上求得样品ET-1和CGRP的浓度值，再换算成每毫克湿重脑组织ET-1和CGRP的含量。
       1.7  统计学处理采用方差分析进行统计学处理，数据以均数±s标准差表示，组间进行t检验。
       2  结果
          
       模型组脑组织ET-1含量与假手术组比较，第1天增高(P<0.05)，第3天达高峰，第7天恢复。CGRP含量与假手术组比较第1天降低(P<0.05)，第3天略有降低，第7天恢复。模型组与假手术组比较ET-1含量升高，CGRP含量降低，均有非常显著性差异(P<0.05或P<0.01)，提示ICH在形成过程中缩血管神经肽增高，舒血管神经肽降低，失去二者的平衡。经治疗后均有恢复，其中混合组ET-1含量变化较模型组与假手术组明显降低，有非常显著性差异(P<0.01)；清开灵组与头穴针刺组ET-1含量变化亦较模型组与假手术组降低，有显著性差异(P<0.05)；混合组CGRP含量较模型组与假手术组明显升高，有非常显著性差异(P<0.01), 清开灵组与头穴针刺组CGRP含量亦较模型组与假手术组明显升高(P<0.05)。见表1～2。
       表1  各组大鼠脑组织ET-1含量（略）
       与假手术组比较,△P<0.05，△△P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01；各组在第3天和第7天均有死亡的大鼠
       表2  各组大鼠脑组织CGRP含量（略）
       与假手术组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01；各组在第3天和第7天均有死亡的大鼠
       3  讨论
          
       出血性中风病位在脑，脑为络脉丰富之处，血阻络，络之不通，出入失常，则生内毒，蒙蔽清窍。因此，对出血性中风的救治，改善血管床功能状态是一个重要环节。ET和CGRP是最近几年才发现的器官局部血流调节因子。血管内皮细胞通过释放ET收缩血管和促进内皮细胞增殖，同时释放CGRP松弛血管平滑肌和抑制内皮细胞的增殖。正常情况下，ET和CGRP处于动态平衡状态，维持着脑血管的舒缩功能。两种血管作用物质平衡破坏时导致血管收缩，引起脑细胞损伤。脑血管病的发生发展可能与这种作用的破坏有关［5］。因此，ET和CGRP代谢研究的同时，进一步观察针刺与中药制剂对中风病ET和CGRP释放的影响以及对脑细胞保护作用的研究，就更有其重要性。
       
       ET是目前已知最强的血管收缩肽，其缩血管作用持久，广泛分布于神经系统的一些内皮细胞和神经细胞内，在脑内主要集中于丘脑、纹状体、大脑皮层及侧脑室中［6］。CGRP对ET的生物效应能产生拮抗作用，能抑制病理条件下ET的大量释放。脑出血时CGRP水平增高是一种代偿机制。CGRP可扩张血管，显著提高脑血流量，减轻缺血、缺氧，有利于侧支循环的开放，减轻脑组织损伤。因此，对CGRP活性的测定是深入研究的重要环节。本文模型组脑组织ET含量升高，以第3天为著，第7天下降，而CGRP活性各天均显著降低，亦以第3天明显。说明了出血性中风时脑组织ET含量的升高及CGRP的活性变化与脑损伤程度相一致，表明ET和CGRP的活性作用也参与了出血性中风的病理生理过程。出血性中风时ET升高可能与下列因素有关:①脑出血时红细胞破坏释放氧合血红蛋白，刺激血管内皮细胞产生ET；②脑出血时颅内压增高，灌注压降低，缺血缺氧使ET释放合成增多；③全身应激反应；④局部因素如肾上腺素、凝血素增多等加速ET合成。有报道神经系统损害越严重，血浆ET含量越高，血浆ET含量与疾病严重程度呈正相关［5］。本文CGRP活性降低，可能对血管收缩作用亦有一定的影响。所以调整ET和CGRP的水平，改善脑血管床功能状态，是研究中风病治疗机理的重要途径之一。QKL注射液具有化淤解毒、清心开窍之功效。本实验发现QKL注射液能降低ET水平，提高CGRP活性，表明QKL注射液通过调节ET和CGRP平衡，改善血管床功能状态，减轻脑水肿，促进血肿吸收，从而达到其治疗作用。同时，QKL较其他通络药物作用显著而持久，推测QKL除通过活血化淤作用外，更能清热解毒、化痰开窍协同治疗，表明解毒开窍等方药在出血性中风治疗中亦具有重要作用。
       
       本研究通过头穴透刺加清开灵观测ET，CGRP的变化与有关文献报道基本相同［7］，且比单用头穴透刺在神经功能缺损恢复中更有优越性。同时针刺治疗改善了ET与CGRP的动态平衡，发挥了针药结合的治疗优势。混合组与模型组脑组织ET，CGRP比较，均有显著性差异（P＜0.01）；混合组较之头穴针刺与QKL对血浆ET、CGRP的调节作用更显著。表明头穴透刺结合QKL能够调节血管的舒缩功能，使ET-CGRP趋于一种动态的平衡。其作用机制可能头穴透刺的刺激加中药清开灵的醒脑开窍作用，调节血浆活性肽一内皮素和降钙素的水平，改善脑血流，减轻脑水肿，增加供血供氧，从而减轻血肿对周围脑组织的损害，改善神经功能。
       【参考文献】
         ［1］ 鲍春龄，东红升，东贵荣，等．头穴透刺对急性高血压性脑出血患者血浆ET、CGRP的影响［J］.中国针灸，2005，25（10）：717.
       
       ［2］ 严 华，杨洪军．清开灵治疗脑血管疾病实验研究进展［J］．中国中医药信息杂志，2002，9（4）：89.
       
       ［3］ 邹 伟，王茉蕾，于学平，等.针刺对急性高血压脑出血大鼠血浆ET和CGRP调整作用［J］.针灸临床杂志，2003，19（2）：50.
       
       ［4］ 华兴邦，李辞蓉，周浩良，等.大鼠穴位图谱的研制［J］.实验动物与动物实验，1991，1：1.
       
       ［5］ 王中卿，郭晓红．高血压脑出血患者血浆内皮素与发病关系的研究［J］．中风与神经疾病杂志，2000，17（6）：189.
       
       ［6］ 吴苏宁.内皮素与脑血管疾病的治疗研究进展［J］.国外医学·老年医学分册,1999,20(3):97.
       
       ［7］ 黄世敬，黄启福，孙塑伦，等.救脑宁注射液对实验性脑出血大鼠脑组织内皮素含量及一氧化氮合酶的影响［J］.中国中医基础医学杂志，2000，8：16.