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       【摘要】 
       目的采用不同类型的炎症动物模型评价一枝蒿（AR）提取物的抗炎作用。方法采用二甲苯致小鼠耳肿胀实验，角叉菜胶致大鼠足跖肿胀实验、小鼠气囊肿实验、棉球肉芽肿实验等。结果一枝蒿提取物对急性、慢性炎症及炎性渗出均有明显的抑制作用，抑制炎症介质PGE2的产生，并抑制白细胞游走。结论AR提取物具有明显抗炎作用，其作用与抑制炎症介质PGE2产生有关。
       【关键词】  一枝蒿； 抗炎； 前列腺素E2
       Study on the Anti-inflammatory Effect of the Extract of Artemisia rupestris L.
       XIAO Wei, Sirafil Aibai*, LI Zhijian
       (Pharmacological College of Shihezi University, Xinjiang Shihezi 832000, China；Xinjiang Institute of Traditional Uighur Medicine, XinJiang Urumqi 830002, China)
       Abstract：ObjectiveTo investigate the anti-inflammatory effect of the extract of Artemisia rupestris L.(ARE) .MethodsFour typical inflammatory models were adopted to investigate the anti-inflammatory effect of ARE, namely dimethylbenzene-induced ear swelling in mice, carrageenan-induced paw edema, carrageenan-induced inflammatory exudation in air cyst of mice and cotton pellet granuloma.ResultsARE could obviously reduce the edema of ear and paw induced by dimethylbenzene or carrageenan respectively. It could also inhibit the hyperplasia induced by cotton pellet. ARE could inhibit the generation of PGE2 and reduce the number of WBC in inflammatory exudate.ConclusionARE effectively suppresses inflammatory responses. The mechanism of its anti-inflammatory action is relevant to reducing the generation of inflammation mediators, such as PGE2.
       Key words：Artemisia rupestris L.;  Anti-inflammation；  PGE2
       
       新疆一枝蒿Artemisia rupestris L.为菊科蒿属植物。新疆地产药材，维吾尔药名“孜伙爱密尼”。维吾尔医常用药，用于治疗热性感冒、发热、头痛、胃痛、腹胀、肝炎、荨麻疹、毒虫咬伤等［1］。自20世纪80年代以来，多位国内学者对新疆一枝蒿的药理作用做了研究，结果表明，新疆一枝蒿具有抗过敏、抗氧化、抗病毒、保肝降酶、调节免疫及健胃促消化等多种作用，临床应用广泛。本研究选择具有不同代表性的炎症动物模型，首次对新疆一枝蒿提取物的抗炎作用作出评价，并对其作用机制进行初步探讨。
       1  材料与仪器
       1.1  药物与试剂新疆一枝蒿（AR）提取物，新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所提取纯化得到, 按照《中国药典》2000年版Ⅰ部附录V B分光光度法测定，总黄酮及总酮酸含量合计高于50%以上。提取物以蒸馏水溶解稀释成相应浓度。角叉菜胶（Carrageen）,为Sigma产品；吲哚美辛，新疆华康药业有限责任公司提供，批号：070802；地塞米松，地奥集团成都药业股份有限公司提供，批号：070403。
       1.2  仪器GBC紫外分光光度计；数显卡尺（上海九量五金工具有限公司）；TGL-16G冷冻超速离心机。
       1.3  动物昆明种小鼠，18～22 g，♂；Wistar大鼠，180～220 g，♂;SD大鼠，150～180 g，♂。新疆实验动物研究中心提供，许可证号：SYXK (新)2003-0003。
       2  方法
       2.1  二甲苯致小鼠耳肿胀实验［2］昆明种小鼠60只, 体重18～22g，随机分为AR提取物高、中、低3个剂量组（300，200，100 mg·kg-1）、阳性对照地塞米松组（5 mg·kg-1）和模型对照组。AR提取物各剂量组均灌胃给药，1次/d，共3 d；地塞米松组在第3天灌胃给药1次。各组末次给药后1 h，乙醚麻醉，每只小鼠右耳正背面以微量移液器滴涂致炎剂-100%二甲苯0.02 ml/只，左耳不作处理。1h后将小鼠断颈处死，沿耳廓基线剪下双耳，用7 mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片，称重。每鼠的右耳片减去左耳片的重量即为肿胀程度。计算各组肿胀度之均值、标准差与肿胀率。
       肿胀度（%）=右耳片重量-左耳片重量左耳片重量×100%
       2.2  角叉菜胶致大鼠足跖肿胀实验［3］SD大鼠50只，体重150～180 g, 随机分为AR提取物高、中、低（300，200，100 mg/kg）3个剂量组、阳性对照吲哚美辛组(7.5 mg/kg)和模型对照组。分别ig给药，1次/d，共7 d。给药前以数显卡尺测定各组右后足厚度，给药后0.5 h，各鼠在右后足跖中部皮下注射1%角叉菜胶0.1 ml。致炎后1，2，3，4 h测定右后足厚度，计算肿胀率。4 h后处死，将致炎足自踝关节上0.5 cm处剪下，称重，剥皮后剪碎皮肤及除骨骼以外的其它组织，置于装有5 ml冰生理盐水离心管中，浸泡（冰浴），不时振摇，1 h后4℃ 3 000 r/min离心浸泡液15 min，上清液-18℃冷冻备测。取上清液0.3 ml，加0.5 mol/L的KOH甲醇溶液2 ml, 50℃水浴异构化20 min，加甲醇5 ml稀释。紫外可见分光光度法于278 nm处测定A值，以每克组织相当A值表示PGE2含量。
       肿胀度（%）=致炎后足跖厚度-致炎前足跖厚度致炎前足跖厚度×100%
       2.3  小鼠气囊肿实验［2］昆明种小鼠72只，体重18～22 g, 随机分为AR提取物高、中、低3个剂量组（300，200，100 mg/kg），阳性对照吲哚美辛组，模型对照组及空白对照组。各鼠背部皮下注射空气5 ml（事先滤过无菌），分别于3 d及6 d再次注入空气3 ml，维持气囊膨胀。首次注入空气当天，分别ig给药, AR提取物高、中、低剂量组，1次/d。吲哚美辛组致炎前单次给药1次，7.5 mg/kg。第6日，给药2 h后，每鼠气囊内注入1%角叉菜胶0.8 ml，空白对照组注入生理盐水0.8 ml。6 h后处死，气囊内注入冰生理盐水（含肝素50 U/ml）2.5 ml，轻轻按压，吸出渗出液约2 ml，1 600 r/min离心20 min（4℃），上清液分离备用，-80℃冷冻备测。取上清液0.3 ml于一试管中，加入0.5 mol/L的KOH甲醇溶液1.0 ml，50℃水浴20 min异构化，加甲醇2.5 ml，紫外分光光度法，波长278 nm比色，以吸光度值表示PGE2含量。沉淀以生理盐水稀释，作白细胞计数。
       2.4  大鼠棉球植入肉芽肿试验［3］选取雄性Wistar大鼠50只，体重180～220 g,    随机分为AR提取物高、中、低3个剂量组（140，70，35 mg/kg），模型对照组，阳性对照地塞米松组（1.5 mg/kg），ig给药，1次/d，连续7 d。将已称重棉球［（50±1） mg］，经高压灭菌，每个棉球再加氨苄青霉素1 mg/0.1 ml,50℃烘箱烘干。在首次给予受试物后1h，在乙醚浅麻醉无菌条件下作前肢腋下切口，将棉球植入大鼠两侧腋窝部皮下。第8天颈椎脱臼处死，取出棉球肉芽组织。于60℃烘箱内干燥1h称重，减去原棉球重量，即为肉芽肿净重。肉芽肿重量以mg（肉芽肿）/100 g(体重)表示。
       2.5  统计学处理所有数据均用±s表示，应用PEMS3.1统计软件处理，经方差齐性检验，如方差齐性时用t检验，方差不齐时用t"检验。
       3  结果
       3.1  对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响AR提取物的高、中、低剂量均可抑制二甲苯诱导的小鼠耳肿胀（P<0.01或P<0.05）。结果见表1。
       表1  对小鼠耳肿胀的影响（略）
       与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；n=12
       3.2  对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响AR提取物可以抑制角叉菜胶诱导的大鼠足跖肿胀，高、中剂量组作用明显（P<0.01），并呈一定量效关系。同时AR提取物组PGE2的产生明显减少，与模型对照组比较P<0.01。结果见图1，表2～3。
       图1  AR提取物在不同时间对大鼠足跖肿胀度影响（吲哚美辛7.5 mg/kg）（略）
       3.3  小鼠气囊肿实验该动物模型是在角叉菜胶刺激下主要以炎性渗出为主要表现的炎症模型。表现为炎性细胞浸润和前列腺素样炎性介质增加。给予AR提取物可以有效抑制此种炎症反应，高、中剂量组显著降低炎性渗出液中PGE2的含量（P<0.001），同时明显减少气囊渗出液中白细胞数目（P<0.05或P<0.01）。结果见表4。
       表2  AR提取物对大鼠足跖肿胀的影响（略）
       与模型对照组比较，*P<0.05,**P<0.01；n=10
       表3  AR提取物对大鼠足跖PGE2的影响（略）
       与模型对照组比较，**P<0.01;n=10
       表4  AR提取物对小鼠气囊肿渗出液PGE2及白细胞的影响（略）
       与模型对照组比较，**P<0.01，*P<0.05，***P<0.001；n=12
       3.4  对大鼠棉球肉芽肿的影响AR提取物可以抑制大鼠棉球肉芽肿肉芽组织增生，在相对较低的剂量下，仍然显示出较好的抑制炎性增生的作用(P<0.05)。结果见表5。
       表5  AR提取物对大鼠棉球肉芽肿的影响（略）
       与模型对照组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；n=10
       4  讨论
          
       炎症是机体对各种损害的防御性反应，炎症过程中的细胞组织损伤对机体也可造成损害，现代医药中抗炎药物的研究非常重要。急性炎症主要以渗出、肿胀为特征，亚急性期主要以白细胞和吞噬细胞的浸润为特征，慢性炎症以组织变性和纤维化为特征。而PGs具有广泛的生物活性，参与了炎症、血栓形成和速发型过敏反应等多种病理过程，其中PGE2可致血管扩张，诱发炎症。本实验根据炎症发展不同阶段选取不同动物模型，并围绕AR提取物对PGs的影响，首次对一枝蒿提取物的抗炎作用及作用机制进行探讨研究。
       
       首先采用小鼠耳肿胀实验对抗炎作用进行常规筛选，结果表明，AR提取物对该种急性炎症具有明显的抑制作用，差异显著。在经典的角叉菜胶致大鼠足跖肿胀实验中，其对急性炎症的抑制作用再次得到证实，并且研究结果表明在致炎后3h时其抗炎作用最强。炎性渗出是炎症最具特征性的变化，角叉菜胶刺激的小鼠气囊肿实验结果表明，一枝蒿提取物对白细胞游走具有抑制作用。足跖渗出液及气囊肿渗出液中PGE2测定的结果可以得出，一枝蒿的抗炎作用与抑制炎症介质PGs的生成有关。大鼠棉球肉芽肿实验是以炎性增生为特征的慢性炎症动物模型，研究结果表明一枝蒿提取物在相对较低的剂量可以抑制炎性增生。综合以上研究结果，表明一枝蒿提取物具有明显的抗炎作用，且其抗炎作用机制与抑制炎性介质PGs生成有关。
       
       在研究过程中，对影响实验结果的关键环节进行了比较考察研究。小鼠耳肿胀实验，二甲苯造模效果在1～2 h持续稳定，造模后0.5～1 h测量肿胀度较为适宜，4 h后可能造成假阳性。且采用微量移液器滴涂鼠耳，剂量准确，操作迅速，模型均一。大鼠足跖肿胀实验，采用周长法费时，且结果不准确；容积法，鼠足浸入深度控制是关键。采用自制容积测定仪，鼠足的标记不当及浸泡液的损耗都会造成误差，故不采用专业容积检测仪，结果并不理想；厚度法采用螺旋测微器存在耗时，测量跨度长，在炎症发展过程中，时间的一致性较难保证，采用数显卡尺，测量鼠足同一部位，迅速而准确，相较而言可行而简便。阳性对照药的选择上，吲哚美辛抗炎作用强大，但是10 mg/kg小鼠持续ig给药，小鼠出现死亡情况，在文献报道中，有大鼠吲哚美辛9 mg/kg给药，死亡严重，不能完成实验的情况［4］，故而采用末次单次给药避免该问题。本研究基于预实验的结果，确定给药剂量及实验采用方案，以取得可靠的实验结果。
       
       本实验研究结果表明一枝蒿提取物对急性、慢性炎症均有明显抑制作用，并且作用机制与抑制PGs生成有关。这对解释一枝蒿的多方面临床应用具有重要意义，其抗炎作用的机制还有待进一步深入研究。
       【参考文献】
         　［1］ 易沙克江·马合穆德，阿不都热依木·卡地尔，阿布拉克·热木都拉,等.中国医学百科全书维吾尔医学［M］.上海：上海科学技术出版社，2005:287.
       
       ［2］ 徐叔云.药理实验方法学,第3版［M］.北京：人民卫生出版社，2002:911.
       
       ［3］ 李仪奎.中药药理实验方法学，第2版［M］.上海:上海科学技术出版社，2006:770.
       
       ［4］ 欧云生,安 洪.长期应用塞来昔布、布洛芬、吲哚美辛对大鼠骨关节炎关节软骨胶原代谢的影响［J］.中国老年学杂志，2007，27（21）:2070.