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       【摘要】 
       目的研究岩黄连生物总碱对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用，探讨其疗效机制。方法岩黄连生物总碱予小鼠连续灌胃给药10 d，用CCl4造成小鼠急性肝损伤，测定小鼠血清中谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）的含量，以及肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的含量，观察光镜下小鼠肝组织的病理变化。结果岩黄连生物总碱高、中、低各剂量组均能抑制小鼠腹腔注射CCl4引起的急性肝损伤所致的ALT和AST的升高，同时能升高肝组织中SOD的含量，并能降低MDA的含量；减轻肝组织坏死程度。结论岩黄连生物总碱对四氯化碳所致的小鼠急性肝损伤具有保护作用，其保护机制可能与其抗脂质过氧化有关。
       【关键词】  岩黄连生物总碱； 急性肝损伤； 四氯化碳
       Protective Effect of Corydalis saxicola Alkaloids  (CSA) on CCl4-induced Acute Liver Injury in Mice
       LIANG Yonghong, JIA Jie, Peter S. Spencer, MAO Yuang, QIN Chongju
       (Guangxi Medical University,Nanning 530021,China;Center for Research on Occupational & Environmental Toxicology Oregon Health & Science University Portland, Oregon, USA;Guangxi Hefeng Pharmaceutical Co. Ltd.,Donglan,547400, China)
       Abstract：ObjectiveTo investigate the protective effect of Corydalis saxicola alkaloids (CSA) on CCl4-induced acute liver injury in mice.MethodsAfter intragastric administration of CSA for 10 days, the rats were given CCl4 to induce acute liver injury. The serum levels of ALT，AST, SOD, and MDA in liver were detected. Pathological changes were detected by HE.ResultsCSA could significantly decrease the acitivities of ALT, AST and MDA. The level of SOD was increased. CSA could also protect the liver from pathological injury induced by CCl4.ConclusionCSA can protect liver from acute hepatic toxicity inducecd by CCl4.
       Key words：CSA;  Acute liver injury;  CCl4
       
       岩黄连Corydalis saxicola Bunting系罂粟科紫堇属植物石生黄堇的全草，分布于全国各地，西南部盛产，主要分布于贵州、云南、四川、西藏、广西等地［1］。成分分析表明，该植物所含的化合物主要为生物碱，尚未有其他类化合物的报道［2］。据记载，该植物具有抗肿瘤、增强免疫功能、止痛镇静、抗菌、抗肝炎病毒等作用［3］。
       
       本研究采用CCl4小鼠急性肝损伤模型，运用酶活力测定，抗脂质过氧化物测定以及形态学观察等方法，研究岩黄连生物总碱（Corydalis saxicola alkaloids, CSA）对小鼠急性肝损伤的保护作用并探讨其保护机制。
       1  材料
       1.1  药物广西药材岩黄连全草95 %乙醇提取，采用旋转蒸发浓缩得根浸膏，酸水转溶，碱化，氯仿提取后浓缩最后得到总生物碱，配制成所需各浓度。
       1.2  试剂联苯双酯滴丸（北京协和药厂）；四氯化碳（重庆川江化学试剂厂）；长生纯正花生油；ALT，AST，MDA，SOD试剂盒（南京建成生物工程研究所）。
       1.3  动物昆明种小鼠，体重(20±2) g，雌雄兼用，广西医科大学医学动物实验中心提供。
       2  方法
       2.1  模型建立［4,5］取昆明种小鼠60只，随机分为6组，即空白对照组、联苯双酯组、CCl4模型组及CSA高、中、低剂量组。联苯双酯组灌胃给予联苯双酯混悬液150 mg·kg-1；CSA三个剂量组分别灌胃给予CSA 100,75,50 mg·kg-1。空白对照组和CCl4模型组给予同等量的蒸馏水。连续10 d后除空白对照组外其余各组均腹腔注射0.5% CCl4油溶剂0.1 ml·10 g-1（此即CCl4的给药方式，为一次性给药造成急性肝损）。禁食24 h后摘眼球取血，静置30 min，3 000 r·min-1  离心10 min后分离血清，待测血清中AST及ALT含量。取肝组织，用生理盐水洗去残血并用滤纸滤干，剪成小块。称取100 mg，加预冷生理盐水0.9 ml，制成10％匀浆，待测肝组织SOD和MDA的含量。取肝大叶相同部位的一小块肝组织固定于10％福尔马林，做病理切片检查。
       2.2  生化检测分离得到的各组小鼠血清，按照试剂盒说明测定ALT和AST的活力。10%肝组织匀浆4℃ 3 500 r·min-1 离心10 min后取上清液，按照试剂盒说明测定SOD和MDA的含量。
       2.3  形态学观察所取小鼠肝组织用10%福尔马林固定，制备肝组织切片，HE染色，普通光镜下观察肝组织病理结构改变。
       2.4  统计方法数据处理采用±s表示，各组样本均数间的比较采用单因素方差分析（one way ANOVA）。
       3  结果
       3.1  对血清中ALT和AST含量的影响CCl4模型组与空白对照组比较，血清 ALT及AST均明显增高(P<0.01)。与CCl4模型组比较，CSA高、中、低剂量组均可明显降低肝损伤小鼠血清ALT及AST活力。
       表1  岩黄连生物总碱对小鼠急性肝损伤血清中ALT，AST含量的影响（略）
       与空白对照组比较，▲P<0.01；与模型组比较，**P<0.01,*P<0.05；n=10
       3.2  对肝组织中MDA和SOD含量的影响CCl4模型组与空白对照组比较，肝组织中MDA含量明显增高，SOD含量明显降低（P<0.01）。与CCl4模型组比较，CSA高、中、低剂量组均能明显降低肝损伤小鼠肝组织中MDA含量并能增高SOD的含量。
       表2  岩黄连生物总碱对小鼠急性肝损伤肝组织中MDA、SOD含量的影响（略）
       与空白对照组比较，▲P<0.01；与模型组比较，**P<0.01,*P<0.05；n=10
       3.3  对四氯化碳肝损伤小鼠肝脏病理组织的影响空白对照组小鼠肝脏外观呈红褐色,质地软而富有弹性;在光镜下可以观察到肝小叶结构完整,细胞排列整齐,大小均匀,分界清楚，肝细胞索以中央静脉为中心呈放射状排列，肝窦清晰。模型组小鼠肝脏外观体积增大,质脆,边缘钝而厚,表面呈黄褐色;镜下可见肝小叶结构破坏,肝细胞普遍浊肿,出现以中央静脉为中心的局灶性肝细胞变性、坏死和炎细胞浸润。CSA高、中、低剂量组及联苯双酯组小鼠较模型组肝损伤程度明显减轻，镜下可见CSA高剂量组和联苯双酯组肝小叶结构基本完整,细胞排列较整齐,只有少量的炎细胞浸润,较模型组有明显改善。CSA中、低剂量组较模型组也有所改善,但是不如高剂量组效果好。
       4  讨论
          
       CCl4是一种毒性很强的化学物质,进入机体后,在肝脏内经肝细胞色素P450激活,生成三氯甲基自由基(CCl3 ·)和氯自由基(Cl·),导致肝微粒体的脂质过氧化。由于脂质过氧化反应增强而抗氧化能力降低导致自由基增多,进而攻击脂质细胞膜,引起肝细胞脂质过氧化性损伤,使肝细胞变性坏死,细胞内ALT,AST大量释放［6，7］。
       
       自由基可引发多价不饱和脂肪酸过氧化而生成过氧化脂质（LPO），其最终产物MDA可使蛋白质、核酸及脂类发生交联，致生物膜发生变性，细胞突变、衰老或死亡。MDA不仅是反映脂质过氧化的敏感指标，还可间接反映出细胞损伤的程度。SOD是超氧阴离子自由基的清除剂，可抑制由自由基启动的脂质过氧化反应。实验结果表明，CSA能降低急性肝损伤小鼠肝组织中的MDA含量，升高SOD含量。提示CSA可能通过抗脂质过氧化，保护酶活性而提高肝细胞膜的稳定性，使肝细胞变性和坏死减轻，减少炎症细胞浸润。
       
       本实验结果证明,CSA能显著降低CCl4引起的急性肝损伤后血清中ALT和AST的水平,明显减轻肝细胞的变性坏死和炎性浸润等病理改变,同时还明显降低肝组织MDA的含量,并且有效提高了SOD的活力。这些结果提示,CSA对CCl4所致小鼠急性肝损伤的保护作用,可能与其提高肝细胞抗氧化能力,对抗CCl4引起的膜脂质过氧化,促进肝细胞的再生和修复有关。更深入的作用机制有待进一步研究。
       【参考文献】
         　　［1］ 蒋水元，胡兴华，赵瑞峰.岩黄连引种栽培研究［J］.广西植物，2002，22(5)：469．
       
       ［2］ 韦记清,蒋水元,蒋运水，等.药用植物岩黄连研究概述［J］.广西科学院学报,2006,22(2):108.
       
       ［3］ 孙宁玲，陆国才，袁伯俊，等.岩黄连研究进展［J］.中药新药与临床药理，2006，17(1)：78.
       
       ［4］ 陈奇．中药药理研究方法学［M］．北京：人民卫生出版社，1993：724．
       
       ［5］ 徐叔云，卞如濂，陈修．药理实验方法学,第3版［M］．北京：人民卫生出版社，2002：1346.
       
       ［6］ 巫协宁.急性肝损伤的细胞学机制［J］.国外医学·消化系统分册，1998，18：14.
       
       ［7］ 卢林耿，王中民，张永群,等．对四氯化碳所致大鼠肝脏损伤机制的研究［J］．中西医结合肝病杂志，1996，6(2)：24.