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       【摘要】 
       目的筛选川芎贴膏体外透皮实验中的最佳接受液。方法利用ＴＰ －５ 型智能透皮扩散仪，以川芎贴膏中亲水性成分盐酸川芎嗪为考察指标，采用分光光度法，比较不同溶媒系统对川芎贴膏的经皮渗透参数的影响以选择最佳接受液，为体外经皮渗透实验的规范化研究奠定基础。结果生理盐水和ｐＨ ７．４ 磷酸盐缓冲液的透皮速率常数Ｊ 最大；１０％乙醇／生理盐水、１０％丙二醇／生理盐水、１０％ＰＥＧ ４００／１０％乙醇／生理盐水、１０％ＰＥＧ ４００／生理盐水的Ｊ 值依次减少。１０％ＰＥＧ ４００／生理盐水透皮时滞最长，ｐＨ ７．４ 磷酸盐缓冲液透皮时滞最短。结论对亲水性成分盐酸川芎嗪而言，生理盐水或ｐＨ ７．４ 磷酸盐缓冲液均可作为其最佳接受液。
       【关键词】  川芎贴膏 体外经皮渗透 盐酸川芎嗪 接受液
       Study on the Selection of Receptor Fluids for Percutaneous Permeability of Chuanxiong Adhesive Plaster In vitro
       LI Jin, ZHAO Xiaoli, ZU Qiang
       （Jiangsu Provincial Hospital of TCM，Nanjing ２１００２９， China； Nanjing University of Chinese Medicine，Jiangsu Nanjing ２１００２９，China）
       Abstract：ObjectiveＴｏ study the ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｌｕｉｄｓ ｏｆ ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｕａｎｘｉｏｎｇ Ａｄｈｅｓｉｖｅ Ｐｌａｓｔｅｒ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｃｈｏｏｓｅ ａ ｇｏｏｄ ｓｏｌｕｔｉｏｎ．MethodsＴＰ －５ ａｕｔｏｍａｔｉｃ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ａｐｐａｒａｔｕｓ was adopted. Ｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ ｉｎ Ｃｈｕａｎｘｉｏｎｇ Ａｄｈｅｓｉｖｅ Ｐｌａｓｔｅｒ was determuined ｂｙ ＵＶ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ ， and ｔｈｅ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｏｆ ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ｖａｒｉｏｕｓ ｆｌｕｉｄｓ were compared．ResultsThe sequence of rate was：ＮＳ ＞ＰＢＳ ＞１０％ＥＴＯＨ／ＮＳ ＞１０％ＰＧ／ＮＳ ＞１０％ＰＥＧ４００／１０％ＥＴＯＨ／ＮＳ ＞１０％ＰＥＧ４００／ＮＳ；ｔｈｅ ｌｏｎｇｅｓｔ lag time was １０％ＰＥＧ４００／ＮＳ；ｔｈｅ ｓｈｏｒｔｅｓｔ was ｐＨ ７．４ ＰＢＳ．ConclusionＳａｌｉｎｅ ｏｒ ｐＨ７．４ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｉｓ ｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄ ｆｏｒ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ Ｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ．
       Key words：Ｃｈｕａｎｘｉｏｎｇ Ａｄｈｅｓｉｖｅ Ｐｌａｓｔｅｒ；  Ｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ；  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｌｕｉｄ ；  Ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ
       
       体外经皮渗透实验是经皮给药系统研究中的关键，此实验通过模拟药物的在体透皮过程，以掌握药物的释药和透皮特性，为药物透皮制剂开发的可能性及处方设计和制备工艺的合理性提供依据。实验中接受液的选择是重要的考察因素之一［１，２］，总体来说接受液应具有接受透皮药物的能力，并尽可能的符合类似体内的漏槽条件。常用的接受液有生理盐水、林格氏液和等渗的磷酸盐缓冲液等。本实验利用ＴＰ －５ 型智能透皮扩散仪，以川芎贴膏中水溶性成分盐酸川芎嗪为考察指标，比较不同溶媒系统对川芎贴膏的经皮渗透参数的影响以选择最佳接受液，为体外经皮渗透试验的规范化研究奠定基础。
       1  器材
       1.1  仪器ＴＰ －５ 型智能透皮扩散仪（中国药科大学研制）；７５２紫外分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；数显恒温水浴锅（常州国华电气有限责任公司）；ＡＳ２０５００Ａ 超声仪（天津自动化科学仪器有限公司）；电子天平ＢＰ２１１Ｄ（德国Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ 公司）；ｐＨ 计（ＰＨＳ －３Ｃ 型，上海精密科学仪器有限公司）。
       1.2  试剂与样品氯化钠（ＡＰ，南京化学试剂有限公司）；ＰＥＧ２０００（ＣＰ，广东汕头市西陇化工厂）；甘油（ＡＰ，上海久亿化学试剂有限公司）；尼泊金甲酯（ＣＰ，上海凌峰化学试剂有限公司）；氮酮（广州精细化学工业公司）；冰片（广州化工有限公司）；９５％乙醇（ＡＲ，上海化学试剂有限公司）；ＰＥＧ４００（进口分装，广东光华化学厂有限公司）；１，２ －丙二醇（ＡＲ，上海凌峰化学试剂有限公司）；盐酸（ＡＲ，上海化学试剂有限公司）；氢氧化钠（ＡＲ，上海化学试剂有限公司）；氯化钾（ＡＲ，南京化学试剂有限公司）；磷酸氢二钠（ＡＲ，上海化学试剂有效公司）；磷酸二氢钾（ＡＲ，汕头金砂化工厂）；硅橡胶（膜厚１ｍｍ），由山东济南医用硅橡胶厂提供；盐酸川芎嗪对照品（批号１１０８１７ －２００３０５，购于中国药品生物制品检定所）；盐酸川芎嗪原料药，含量９９．２％，由江苏先声药业有限公司提供；川芎贴膏（自制，批号：０６０５１５）。
       2  方法
       2.1  川芎贴膏的制备方法取２１ｇ ＰＥＧ２０００ 在７０℃水浴熔融，将冰片０．７５ ｇ，尼泊金甲酯０．０５ ｇ，盐酸川芎嗪原料２ ｇ 加入其中使混合融解，不停搅拌到温度降至５０℃以下。再加入甘油０．５ ｇ，氮酮０．５ ｇ，水０．２ ｇ 后继续搅拌。冷凝后，均匀涂布于控释裱背材料上，即得川芎贴膏（每贴含盐酸川芎嗪４０ ｍｇ）。
       2.2  分析方法的建立取盐酸川芎嗪对照品适量，精密称定，加生理盐水（ＮＳ）溶解制成２５０ μｇ· ｍｌ－１ 的对照品储备液。从上述储备液中分别吸取２，４，６，８，１０ ｍｌ 各置１００ ｍｌ 量瓶中，加ＮＳ 配成浓度为５，１０，１２．５，２０，２５ μｇ· ｍｌ－１ 的对照品溶液系列，取浓度为１２．５ μｇ· ｍｌ－１ 对照品溶液在紫外分光光度计上以ＮＳ 为空白对照进行全波长扫描后，结果盐酸川芎嗪在２９４ ｎｍ 处有最大吸收且阴性制剂无干扰，故确定２９４ ｎｍ 为检测波长。对上述对品溶液系列分别进行吸收度测定，每个浓度各平行２ 份，以浓度（X）为横坐标，吸收度的平均值（Y）为纵坐标进行线性回归，得线性回归方程为Y＝０．０２０ ２ ＋０．０３７ ８X，r＝０．９９９ ９。线性范围５～２５ μｇ· ｍｌ－１ 。
       2.3  体外经皮渗透实验
       2.3.1  人工合成膜的预处理取医用硅橡胶，剪成３．５ ｃｍ×３．５ ｃｍ 大小，９５％乙醇浸泡３０ ｍｉｎ，自然沥干备用。
       2.3.2  ＰＢＳ 溶液的制备称取８ ｇ 氯化钠，０．２ ｇ 氯化钾，１．４４ ｇ磷酸氢二钠，０．２４ ｇ 磷酸二氢钾置１ ０００ ｍｌ 容量瓶中，加蒸馏水至刻度，超声使溶解成澄清液。ｐＨ 计用ｐＨ ＝６．８６，ｐＨ ＝４．００ 的标准缓冲液标定后，测所配溶液的ｐＨ 值，再加少许氢氧化钠溶液或盐酸溶液调至ＰＢＳ 溶液ｐＨ 值为７．４ 即可。
       2.3.3  体外经皮渗透性实验方法将硅橡胶膜固定在接受池的下端，上敷川芎贴膏１ｇ，接受池中加入２２ｍｌ 接受液，平行５ 份，保持恒速搅拌和恒温，水浴温度（３７ ±１）℃，转速３００ ｒ· ｍｉｎ－１ ，于１，２，３，４，６，８，１２，２４ ｈ 分别取样５ ｍｌ，同时补加等量的新鲜接受液，再分别从接受液中取一定量的试液置容量瓶中，以ＮＳ 稀释定容到刻度，测定吸光度Ａ，所测吸光度带入回归方程后折算出浓度Ｃｉ，按下式计算单位面积的累积透过量（Ｑ）：
       
       Q=C″n22n-1i=1Ci′5A
       
       式中，Ｃｎ：第ｎ 个取样点测得的药物浓度（μｇ· ｍｌ－１ ）；Ｃｉ：第ｉ 个取样点测得的药物浓度（μｇ· ｍｌ－１ ）；Ａ：渗透面积（ｃｍ２ ），以累积渗透量Ｑ 对时间ｔ 进行线性回归所得方程，所得斜率即为透皮速率常数Ｊ（μｇ· ｃｍ－２ · ｈ－１ ）。增透倍数Eｒ＝Ｊ／Ｊ０ ，Ｊ０ 是生理盐水接受液的渗透速率。
       2.3.4  不同接受液对盐酸川芎嗪体外经皮渗透参数的影响分别以生理盐水，ＰＢＳ ７．４，１０％聚乙二醇４００／生理盐水，１０％丙二醇／生理盐水，１０％乙醇／生理盐水，１０％聚乙二醇４００／１０％乙醇／生理盐水为接受液，按“２．２．３”项研究盐酸川芎嗪体外经皮渗透的行为特征，并计算不同接受液的透皮速率常数Ｊ 和增透倍数Eｒ。
       3  结果
       表1  盐酸川芎嗪在不同接受液中的累积渗透量（略）
       表2  盐酸川芎嗪在不同接受液中的体外透皮吸收动力学参数（略）
       由表１ ～２ 可知，对于亲水性成分盐酸川芎嗪，生理盐水和ｐＨ  ７．４磷酸盐缓冲液的透皮速率常数Ｊ 最大；１０％乙醇／生理盐水、１０％丙二醇／生理盐水、１０％ＰＥＧ４００／１０％乙醇／生理盐水、１０％ＰＥＧ４００／生理盐水的Ｊ 值依次减少。透皮速率常数Ｊ 的增大和透皮时滞的缩短并无明显相关关系，１０％ＰＥＧ４００／生理盐水的透皮时滞最长，ｐＨ７．４ 磷酸盐缓冲液透皮时滞最短。
       4  讨论
          
       由于动物皮肤都存在着个体差异，且长时间实验易腐烂，另外皮肤中的某些成分实验过程中溶入接受液后会对药物含量分析造成干扰，难以标准化处理。硅橡胶，又称聚二甲基硅氧烷，是一种非极性、无孔的弹性体扩散膜。本研究在前期实验基础上筛选出硅橡胶等人工合成膜作为体外实验皮肤模型，重现性好，易于操作，可最大限度地避免由于人为或其它因素导致的误差，对于透皮吸收研究的标准化具有重要意义。文献研究结果也表明，目前国外在某些药物透皮吸收的基质筛选、各种体外渗透实验中普遍使用硅橡胶薄膜，证明其是一种有用、有效的皮肤代用品［３］ 。
       
       结合盐酸川芎嗪的性质，本实验对性质较为接近皮下环境的６ 种接受液进行了筛选研究。从各自的Ｑ －ｔ 方程看，以生理盐水和ｐＨ７．４ 磷酸盐缓冲液的透皮速率常数Ｊ 最大，这可能与盐酸川芎嗪在其中的溶解度较高有关，综合考虑到皮下环境与接受液性质的相近性，对亲水性成分盐酸川芎嗪来说，生理盐水或ｐＨ７．４磷酸盐缓冲液均可作为其最佳接受液，该结果初步为体外经皮渗透试验的规范化研究奠定基础。
       【参考文献】
         　　［1］ 张 援，许实波，李向阳，等．不同接受液和动物皮肤对格列美脲体外经皮渗透行为的影响［Ｊ］．中山大学学报，２００４，４３（５）：８６．
       
       ［2］ 潘卫三，李 华，李嘉煜，等．长春西汀体外经皮渗透性实验中接受液的选择［Ｊ］．沈阳药科大学学报，２００２，１９（４）：２３９．
       
       ［3］ Ｄｉａｚ Ｍ．Ｃ，Ｎｏｖａ Ｍ，Ｅｌｏｒｚａ Ｂ，ｅｔ ａｌ．Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ ｐｒｏｔｏｃｏｌ ｏｆ ａｎ ａｕｔｏｍａｔｅｄｉｎ －ｌｉｎｅ ｆｌｏｗ －ｔｈｒｏｕｇｈ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ ｆｏｒ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ ｓｔｕｄｉｅｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ．Ｒｅｌｅａｓｅ，２０００，６９：３５７．