文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【摘要】 
       目的研究黄柏与苍术提取物对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响。方法选择小鼠腹腔注射尿酸生成的前体物质次黄嘌呤(Hypoxanthine)的方法制备高尿酸血症动物模型, 给予黄柏、苍术提取物灌胃（含生药18.75 g/kg·d）,连续1周,采用改良尿酸酶Trinder"s法测定小鼠血清尿酸值。结果黄柏与苍术提取物组与别嘌呤醇组均能显著地降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平(P< 0.01), 二者对正常动物血清尿酸水平仅有一定降低的趋势,但无显著性差异。结论 黄柏与苍术提取物对高尿酸血症小鼠具有明显降低血清尿酸水平作用，是一种有开发前景的降尿酸治疗痛风中药活性成分。
       【关键词】  黄柏 苍术 提取物 高尿酸血症 血尿酸
       Effect of Extract of Cortex Phellodendri and Atractylodes lancea on Hyperuricemia in Mice
       PAN Zhi,DUAN Fujin,WANG Yinghang,ZHANG Jianbin,WEI Xionghui*
       (Department of Applied Chemistry, College of Chemistry and Molecular Engineering, Peking University ,Beijing 100871,China;  Heilongjiang University of Chinese Medicine , Harbin 150040, China; Changchun University of Chinese Medicine , Changchun 100021, China)
       Abstract：ObjectiveTo study the effect of extract of Cortex Phellodendri and Atractylodes lancea on hyperuricemia in mice.MethodsThe hyperuricemia model of mouse was induced by injection of  the pre-substance of uric acid hypoxanthine intraperitoneally.The extract of Cortex Phellodendri and Atractylodes lancea was investigated in the hyperuricemia model of mice after oral administration of  18.75g/kg×d  body weight for seven days .Serum uric acid level was determined by the Trinder"s method.ResultsThe serum uric acid level was obviously decreased in hyperuricemia model of mouse treated with Cortex Phellodendri and Atractylodes lancea(P< 0. 01),they showed the tendency to decrease the uric acid levels in the normal animal only.ConclusionThe extract of Cortex Phellodendri and Atractylodes lancea would have promising prospects as a Chinese medicine of good therapeutic effects on hyperuricemia and gout.
       Key words：Cortex Phellodendri；  Atractylodes lancea；  Extract；  Hyperuricemic；  Uric acid
        
       高尿酸血症可导致痛风、尿酸性肾病与肾功能不全等疾病的发生,且与脂代谢紊乱、糖尿病及心脑血管疾病关系密切［1，2］。近年来,痛风和高尿酸血症的发病率呈上升趋势,发病年龄呈现低龄化,给社会带来巨大的负担,是当今世界尤其是中老年男性的常见病、多发病。目前痛风和高尿酸血症的治疗仍然需要使用抗炎药及排尿酸药物、黄嘌呤氧化酶抑制剂以缓解高尿酸血症, 控制病情发展，其中尤以别嘌呤醇最为常用［3］，但别嘌呤醇所致的如皮肤过敏、药物性肝损害、威胁生命的超敏变态反应综合症等毒副作用限制了其安全使用［4～6］。
       
       近年来，从天然资源中寻找新型抗痛风和高尿酸血症药物已成为药学研究的一个热点。临床上以黄柏、苍术为主药组成的方剂如二妙系列方治疗痛风取得了明显的效果［7～9］。本研究以血清尿酸水平为指标,探讨黄柏Cortex Phellodendri）与苍术Atractylodes lancea提取物(ECPAL)对高尿酸血症小鼠血尿酸的影响。
       1  器材与方法
       1.1   动物  健康SPF级昆明种小鼠,雌雄各半，（20±2）g，由北京大学医学部实验动物科学部提供［合格证号：SCXK（京）2002-0001］，在整个实验过程中动物自然饮水和供给饲料。
       1.2   药品与试剂黄柏与苍术中药饮片（北京同仁堂药店提供）；次黄嘌呤（Hypoxanthine，中国医药集团上海化学试剂公司产品批号，991027）；别嘌呤醇片（Allopurinol，上海延安制药厂产品,批号2000201）；尿酸试剂盒（ 上海科华-东菱诊断用品公司出品,批号20040601 ）;其它均为国产分析纯试剂。
       1.3   仪器HH-6数显恒温水浴锅，SHZ-CA型循环水式真空泵，20B型万能粉碎机，VP真空抽滤装置。台式高速离心机(TGL-16G)；Lisa300型全自动生化分析仪。
       1.4   黄柏与苍术提取物制备黄柏与苍术饮片(500 g)，清洗、干燥、粉碎；80%乙醇浸泡12 h, 80%乙醇热回流(85℃)提取3次，2 h/次、合并3次提取液，过滤，减压回收乙醇，浓缩得清膏配制成500 g/L混悬液备用。
       1.5   高尿酸血症模型的建立复制小鼠高尿酸血症模型［10］。取昆明种小鼠20只,体重（20±2）g , 适应性喂养1周后，随机分为2组,每组10只。模型组腹腔注射次黄嘌呤（0.63 g/ kg）造成小鼠高尿酸血症模型。正常对照组给以等体积生理盐水腹腔注射。造模后于30 min，1，2，4，6 h和8 h六个时间点从小鼠眼眶取血,离心（3 000 r/ min）分离血清, 采用改良尿酸酶Trinder"s法测定小鼠血清尿酸值［11］。结果见图1。
       1.6  黄柏与苍术提取物对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响取昆明种小鼠40只,体重（20±2）g , 适应性喂养1周后，随机分为4组,即正常对照组、高尿酸血症模型组、黄柏与苍术提取物组和别嘌呤醇组,每组10只。灌胃给药，给药剂量分别为：黄柏与苍术提取物组（含生药18.75 g ·kg-1·d-1)；别嘌呤醇组（0.01 g·kg-1·d-1)。正常对照组高尿酸血症模型组每天灌胃等体积生理盐水。连续给药7 d。于给药第8天灌后0.5 h ,每只鼠按0.63 g/ kg 腹腔注射次黄嘌呤,正常对照组腹腔注射等体积生理盐水，30min后从眼眶取血,分离血清测定血清尿酸值。结果见表1。
       1.7  黄柏与苍术提取物对正常小鼠血清尿酸水平的影响取昆明种小鼠30只,体重（20±2）g , 适应性喂养1周后，随机分为3组,即正常对照组、黄柏与苍术提取物(含生药18.75 g ·kg-1·d-1) 及别嘌呤醇组(0.01 g ·kg-1·d-1），每组10只，按以上给药剂量灌胃给药，正常对照组灌胃等体积生理盐水,连用7 d。于给药第8天灌胃后0.5 h ,药物组腹腔注射次黄嘌呤，30 min后从眼眶取血,分离血清测定血清尿酸值。结果见表2。
       1.8   统计学处理所有数据经Spss软件处理，采用单因素方差分析，用均数±标准差(±s)表示。
       2  结果
       2.1  次黄嘌呤对小鼠血清尿酸水平的影响次黄嘌呤对小鼠血清尿酸水平的影响见图1。由图1可看出次黄嘌呤能显著地提高小鼠血清尿酸水平,造成小鼠高尿酸血症模型,腹腔注射次黄嘌呤30 min后血清尿酸值达到高峰,4 h后降低到一半，模型组小鼠血清尿酸水平在8 h仍然处于较高的水平。
       图1  次黄嘌呤对小鼠血清尿酸水平的影响（n=10）（略）
       2.2   黄柏与苍术提取物对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响小鼠腹腔注射次黄嘌呤后，血尿酸含量显著高于正常对照组,有极显著性差异( P< 0. 01)，提示造模成功；黄柏与苍术提取物组、别嘌呤醇组与模型组比较血清尿酸含量均低于模型组，差异极显著 (P<0. 01) ;与正常对照组比较也有极显著差异( P< 0. 01)。黄柏与苍术提取物组与别嘌呤醇组无显著性差异。结果见表1。
       表1  黄柏与苍术提取物对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响（略）
       与模型组比较，**P<0. 01；与对照组比较，△P<0. 01；n=10
       2.3   黄柏与苍术提取物对正常小鼠血清尿酸水平的影响黄柏与苍术提取物组、别嘌呤醇组与正常对照组比较, 有降低正常小鼠血清尿酸水平的趋势，但黄柏与苍术提取物组降低正常小鼠血清尿酸水平弱于别嘌呤醇组。结果见表2。
       表2  黄柏与苍术提取物对正常小鼠血清尿酸水平的影响（略）
       3  讨论
          
       尿酸水平升高是痛风的生化基础,无症状性高尿酸血症是痛风发生的前期状态,痛风必伴有高尿酸血症。大量的流行病学及临床资料也显示,高尿酸血症及痛风与肥胖、高血压、高脂血症、冠心病、胰岛素抵抗的发生密切相关,已成为识别代谢综合征的早期标志［12］。
       
       笔者从药理实验动物造模角度来判断血清尿酸水平的改变，在小鼠腹腔注射次黄嘌呤后，我们观察到小鼠的血清尿酸水平明显升高，说明我们所造的模型是成功的。本实验结果表明，黄柏与苍术提取物治疗组小鼠的血清尿酸水平明显低于模型组。说明黄柏与苍术提取物可以降低小鼠的血清尿酸水平。实验中，我们采取直接注射生成尿酸的前体物质次黄嘌呤以使小鼠尿酸的生成速度远远快于其排泄速度，使得细胞外液的尿酸浓度升高从而可以复制较稳定的高尿酸血症动物模型，模型小鼠血清尿酸在给药0.5 h 后达到高峰,在4 h 后降低到一半,其血清高尿酸状态可持续8 h以上，这与国内的相关报道是一致的［13］。本实验结果表明黄柏与苍术提取物对正常小鼠血清尿酸水平没有产生显著的影响, 却能显著地降低高尿酸血症动物血清尿酸水平, 我们分析这可能与黄柏具有抗氧化、保护肾脏、抗炎、细胞免疫调节等药理作用有关［14～16］，另外和苍术酮强烈地抑制Na+ , K+-ATP 酶活性的利尿作用可能有密切的关系［17］，具体的机制还需进一步探讨。
       【参考文献】
         　　［1］ Iseki K,Ikemiya Y,Inoue T,et al.significance of hyperuricemia as a risk factor for developing ESRD in a screened cohort［J］.Am J Kidney Dis,2004,44 (4):642.
       
       ［2］ Sundstrom J,Sullivan L,D"Agostino RB,et al.Relations of serum uric acid to longitudinal blood pressure tracking and hypertention incidence［J］.Hypertention,2005,45(1):18.
       
       ［3］ 叶任高，陆再英，谢 毅，等. 内科学，第6版［M］.北京：人民卫生出版社. 2004：865.
       
       ［4］ Markel A. Allopurinol-induced DRESS syndrome［J］.Isr Med Assoc J. 2005,7(10)：656.
       
       ［5］ Urban T,Maquarre E,Housset C,et al. Allopurinol hypersensitivity. A possible cause of hepatitis and mucocutaneous eruptions in a patient undergoing antitubercular treatment［J］.Rev Mal Respir，1995, 12( 3)：314.
       
       ［6］ 赵 迎,孙福成.别嘌呤醇致药物性肝损害2 例［J］.中国新药杂志，2003,12（7）：570．
       
       ［7］ 劳献宁，李运兰，刘宝英.四妙散加减治疗药物性尿酸增高症的疗效观察［J］.2005,22(4)：273.
       
       ［8］ 史学军,张立群. 二妙丸与四妙丸的组方及临床合理应用［J］.药物不良反应杂志,2005,6：427.
       
       ［9］ 彭述宪. 二妙散的临床运用［J］.湖南中医药导报，2003,9(7)：10.
       
       ［10］ 陈光亮，徐叔云.高尿酸血症动物模型研究进展［J］.中国药理学通报，2004 ,20 (4) ：369.
       
       ［11］ 刘洪光.氯硝安定对改良Trinder"s法测定尿酸的干扰［J］.实用医技杂志，2004，11（6）：1004.
       
       ［12］ Akkasilpa S,Avihingsanon Y, Hanvivadhanakul P, et al. Clinicalmanifestations of patients with hyperuricemia ［J］.J Med Assoc Thai,2004, 87 ( Suppl 2) : S41 .
       
       ［13］ 唐 灿,杨 奎.高尿酸血症动物模型初探［J］.中药新药与临床药理,2000,11 (5) ：292.
       
       ［14］ Mori H,Fuchigami M,Inoue N,et al.Principle of the bark of phellodendron amurense to suppress the cellular immune response:effect of phellodendrine on cellular and humoral immune responses［J］. Planta Med ,1995 ,61(1)：45.
       
       ［15］ Lee YM,Kim H,Hong EK,et al. Water extract of 1:1 mixture of Phellodendron cortex and Aralia cortex has inhibitory effects on oxidative stress in kidney of diabetic rats［J］.J Ethnopharmacol, 2000,73 (3)：429.
       
       ［16］ 孔令东,杨 澄,仇 熙,等.黄柏炮制品清除氧自由基和抗脂质过氧化作用［J］.中国中药杂志,2001 ,26(4) ：245.
       
       ［17］ Keiichi Suto,Shinichi Kakinuma,Yuji Ito,et al.Determination of atractylon in Atractylodes rhizome using supercritical fluid chromatography on-line coupled with supercritical fluid extraction by the direct induction method. Journal of Chromatography A［J］.1998, 810 (1～2)：252.