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       【摘要】 
       目的研究黄瓜香水提物对小鼠免疫功能的影响。方法通过小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能测定、免疫器官重量法等方法，评价黄瓜香对小鼠免疫功能的影响。结果黄瓜香水提物０．８，０．４ ｍｇ／ｍｌ 剂量组与生理盐水组比较有显著性差异，能增加免疫器官重量，提高正常小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数，０．０４ ｍｇ／ｍｌ 剂量组无显著性差异。结论 黄瓜香水提物对小鼠非特异性免疫功能有促进作用。
       【关键词】  黄瓜香水提物 免疫功能 吞噬百分率
       Study on the Effect the Aqueous Extract from Viola Diffusa Ging on Immune Function in Mice
       LI Chunyan, LI Xianhui, L Jiangming, GAO Hui
       （Medical School，Jishou University， Jishou, Hunan ４１６０００，China）
       Abstract：ObjectiveＴｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅ ａｑｕｅｏｕｓ ｅｘｔｒａｃｔ ｆｒｏｍ Viola diffusa Ging（ＶＤＧ） ｏｎ ｉｍｍｕｎｅ fｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ．MethodsＴｈｅ ａｑｕｅｏｕｓ ｅｘｔｒａｃｔ ｆｒｏｍ Viola diffusa Ging ｗａｓ ｇｉｖｅｎ ｏｒａｌｌｙ ａｔ ｄｏｓｅｓ ｏｆ ０．８，０．４，０．０４ ｍｇ／ｋｇ ｆｏｒ ７ｄａｙｓ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｗｅｉｇｈｔｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｅ ｏｒｇａｎｓ ａｎｄ ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｍａｅｒｏｐｈｅｇｅ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ ｅｘｐｅｒｉｍenｔ ｗｅｒｅ ｔａｋｅｎ ｔｏ ａｓｓｅｓｓ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｆｕｎcｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｃｅ．ResultsＩｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ａｑｕｅｏｕｓ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ ＶＤＧ ｃｏｕｌｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ｗｅｉｇｈｔｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｅ ｏｒｇａｎｓ，ｅｌｅｖａｔｅ ｐｈａｇｏｃｔｉｃ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ａｎｄ ｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ ｉｎｄｅｘ ｏｆ ｐｈａｇｏｃｙｔｅ （P ＜０．０１）．ConclusionＩｔ ｓｕｇｇｅｓｔｓ ｔｈａｔ ｔｈｅ ａｑｕｅｏｕｓ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ ＶＤＧ ｃａｎ ｅｎｈａｎｃｅ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ．
       Key words：Viola diffusa Ｇｉｎｇ；　Ｉｍｍｕｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ；　Ｐｈａｇｏｃｙｔｅ
       
       近年来， 免疫功能低下日益受到国内外医学专家的广泛关注，其本身及所诱发的各种并发症可对人体健康造成严重的威胁。而我国传统医药在改善人体免疫功能方面具有独到的见解， 中药在调节人体免疫功能方面的作用日益受到人们重视。本研究以小鼠为模型， 观察了湘西民间中草药黄瓜香对免疫功能的影响。
       1  材料
       1.1  动物及分组健康昆明小鼠６０ 只，雌雄各半（６ ～８ 周龄，体重１８ ～２２ ｇ） ，由湘雅医学院实验动物中心提供。将小鼠随机分成空白组、生理盐水组、黄瓜香水提液大、中、小剂量组（以下简称水提大、中、小剂量组） 、香菇多糖组共６ 组，每组１０ 只。
       1.2  用药黄瓜香水提物由吉首大学药理实验室提供，传统方法水提、浓缩，临用时用蒸馏水稀释成所需浓度（实验所用剂量均以生药计）；香菇多糖购自金陵药业股份有限公司福州梅峰制药厂， 产品批号：国药准字Ｈ２００３０１３１。
       2  方法
       2.1  给药方法按人常用剂量，根据人／小鼠体表面积比，计算小鼠用药量。黄瓜香水提物大、中、小剂量分别为０．８，０．４，０．０４ｍｇ／ｍｌ， 香菇多糖０．６ ｍｇ／ｍｌ。灌胃１ 次／ｄ，每次０．１ ｍｌ／１０ ｇ ，连续灌胃７ ｄ。
       2.2  鸡红细胞悬液制备无菌条件下，自鸡翼下静脉采血。置１００ ｍｌ 疫苗瓶中，加入相当于鸡血体积５ 倍的Ａｌｓｅｖｅｒ＇ｓ 溶液混匀，４ ℃冰箱贮存。临用时，用生理盐水洗涤３ 次，前２ 次离心速度为１ ５００ ｒ／ｍｉｎ ，离心５ ｍｉｎ ，弃上清液和界面的细胞层。最后连续２ 次离心（２ ０００ ｒ／ｍｉｎ ，５ ｍｉｎ） 直至细胞压积值恒定，用生理盐水配成体积分数为５ ％的红细胞悬液［１］ 。
       2.3  腹腔吞噬细胞吞噬功能测定第７ 天给药后２ ｈ ，给小鼠腹腔注射鸡红细胞悬液１ ｍｌ ，间隔２ ｈ ，颈椎脱臼处死，仰位固定于鼠板上。中下剪开腹壁皮肤，经腹膜注入生理盐水２ ｍｌ 转动鼠板１ ｍｉｎ ，然后吸出腹腔洗液，平均分滴于２ 片载玻片上。晾干，以丙酮－甲醇溶液固定，晾干，用瑞氏染液染色１５ ｍｉｎ ，洗去染色液，晾干。在油镜下观察巨噬细胞吞噬的鸡红细胞的个数。按下列公式计算吞噬百分率和吞噬指数［２］ 。
       
       吞噬百分率（%）=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞总数观察到的巨噬细胞总数×100 %
       
       吞噬指数（%）=被吞噬的鸡红细胞总数观察到的巨噬细胞总数×100 %
       2.4  免疫器官重量实验动物处死后迅速取出胸腺、脾脏，吸去血液，修去脂肪、系膜，用电子天平称取其湿重，然后根据体重计算胸腺、脾脏指数。胸腺指数＝胸腺重量（ｍｇ）／体重（ｇ），脾脏指数＝脾脏重量（ｍｇ）／体重（ｇ） ［３］ 。
       2.5  统计学处理数据以±s表示，进行单因素方差分析，继以组间数据两两比较，检验水平为０．０５ 。以上统计分析采用ＳＰＳＳ１２．０ 软件。
       3  结果
       3.1  黄瓜香水提物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响表１结果显示，黄瓜香水提物大剂量组和中剂量组与空白对照组和生理盐水组比较均能提高巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数（P＜０．０１），小剂量与生理盐水组比较无显著性差异（P＞０．０５）；与香菇多糖组比较，大剂量组没有显著性差异（P＞０．０５）。说明黄瓜香水提物的大剂量和中剂量能够提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能。
       3.2  黄瓜香水提物对免疫器官重量的影响结果见表２。
       4  讨论
          
       黄瓜香为堇菜科蔓茎堇菜Ｖｉｏｌａ ｄｉｆｆｕｓａ Ｇｉｎｇ（匍伏堇）的全草，属多年生草本植物。其化学成分主要为黄酮、糖类、黏液质。植株总黄酮含量为２．３９％，根总黄酮含量为１．０８％，细胞悬浮物总黄酮含量为０．７６％［４］ 。其中，作为蔓茎堇菜的主要有效化学成分的黄酮，具有极大的药用价值，民间应用显示具有良好的提高免疫力、抗衰老的作用，但与药理作用联系较少。而生物类黄酮，是植物次级代谢产物，广泛地存在于植物中，具有保护心脑血管、利胆保肝、抗癌、抗衰老、提高免疫力等多种生物活性。本实验从免疫器官（胸腺和脾脏）、免疫细胞（吞噬细胞）方面探讨了黄瓜香水提物对免疫功能影响的机制。
       表1  腹腔吞噬细胞吞噬功能测定（略）
       与空白对照组比较，★P＜0.01；与生理盐水组比较，☆P＜0.01；与香菇多糖组比较，▲P＞0.05
       表2  免疫器官重量实验结果（略）
       与空白对照组、生理盐水组比较，★P＜0.01,☆P＞0.05,与香菇多糖组比较，▲P＞0.05
       
       脾脏指数和胸腺指数是反映动物机体免疫功能的最基本和最常规的指标，已被广泛用于评价机体的整体免疫状态。药物对动物胸腺、脾脏重量的影响，可作为免疫药理机制的初步指标。本实验结果显示， 黄瓜香水提物可明显增加小鼠胸腺、脾脏的重量，提示具有免疫增强作用。巨噬细胞在非特异性免疫中发挥极为重要的作用，是消除致病微生物的重要效应细胞，具有摄取、处理、加工、清除外来异物、呈递抗原的功效，在调节免疫功能和免疫应答的各环节中起着重要的作用。本实验结果表明， 黄瓜香水提物能明显提高正常小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数，证明黄瓜香水提物对非特异性免疫功能有增强作用。
       
       综上所述，本实验研究从免疫器官、免疫细胞水平探讨了黄瓜香水提物对机体非特异性免疫功能的影响，结果显示黄瓜香水提物能够增加小鼠胸腺、脾脏的重量，提高正常小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数，具有一定的免疫调节的作用。
       
       黄瓜香原植物由吉首大学民族医药研究室提供鉴定，谨致谢意！
       【参考文献】
         　　［1］ 刘训红，陈 彬，王玉玺．太子参多糖抗应激和免疫增强作用的实验研究［Ｊ］．江苏中医，２０００，２１（１０）：５１．
       
       ［2］ 高 峰，陈建萍，谢 婷，等．益苷颗粒剂对小鼠免疫功能的影响［Ｊ］．时珍国医国药，２００４，１５（４）：２０５．
       
       ［3］ ＷｏｎｇＣＫ，ＬｅｕｎｇＫＮ，ＦｕｎｇＫＰ，ｅｔａｌ．Ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ ｅｌｉｃｉｔｉｔｉｎｇ ｆｒａｃｔｉｏｎｓ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｐｓｅｕｄｏｓｔｅｌｌａｒｉａ ｈｅｅｒｏｐｈｙｌｌａ［Ｊ］．Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒ ｍａｃｏｌ１９９４，１６（４）：２７１．
       
       ［4］ 陈由强，林国宇．蔓茎堇菜总黄酮含量的测定［Ｊ］．福建师范大学学报（自然科学版），２０００，４（１６）：６７．