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       【摘要】 
       目的 研究加味小柴胡汤对醋氨酚所致肝损伤的保护作用。方法以醋氨酚致肝损伤动物为模型，观察小鼠脂质过氧化物（LPO）、谷胱甘肽(GSH)、白介素2（IL2）、白介素6（IL6）及肝组织的病理学检查，探讨加味小柴胡汤保护肝损伤的作用和机理。结果加味小柴胡汤能降低小鼠LPO，IL6，升高GSH，IL2水平，改善肝组织病变。结论加味小柴胡汤对醋氨酚所致肝损伤有明显的保护作用，其机制可能与抗氧化及免疫调节有关。
       【关键词】  加味小柴胡汤 醋氨酚 肝损伤 机制
       Protective Effect of Modified Minor Radix Bupleum Decoction  on Hepatic Injury Induced by Paracetamol
       XIE Bin, YU Dajun,CHENG Shaomin
       (Jiangxi Institute of Traditional Chinese Medicine,Nanchang 330006，China)
       Abstract:ObjectiveTo study the protective effect of Modified minor Radix Bupleuri Decoction on hepatic injury induced by Paracetamol.MethodsWith hepatic injury animal model,we observed LPO，GSH，IL-2，IL-6，liver histopathology of mice to investigate the effect and mechanism of modofied minor Radix Bupleuri Decoction on hepatic injury caused by paracetamol. ResultsModified Minor Radix Bupleuri Decoction could depress levels of LPO and IL-6,and increase the levels of GSH and IL-2，ameliorate pathological changes of hepatic tissue.ConclusionModified  Minor Radix Bupleuri Decoction has obvious protective effect on hepatic injury caused by paracetamol.Its mechanism maybe concerned with antioxidation and immunomodulation.
       Key words:Modified Minor Radix Bupleuri Decoction；  Paracetamol；  Hepatic injury；  Mechanism
       
       小柴胡汤广泛用于临床治疗肝胆、消化、免疫等系统疾病，具有显著的降酶、退黄、增进食欲、恢复肝功能疗效。鉴于肝病中脾虚、阴虚及淤血是常见的病理改变［1～3］，故在原方基础上加入茯苓、白术、白芍、当归、丹参等健脾、养阴及活血中药构成加味小柴胡汤，将其用于醋氨酚所致小鼠肝损伤模型，观察加味小柴胡汤对小鼠肝损伤的保护作用，并探讨其作用机制。现报道如下。
       1  材料与方法
       1.1  动物  NIH小鼠60只，雌雄各半，体重20～22 g，购自广东省实验动物中心，合格证号：SCXK(粤)2003-0002粤监证字2005A011。
       1.2  药物的准备  加味小柴胡汤由柴胡15 g，人参6 g，炙甘草6 g，黄芩10g，半夏10 g，生姜9 g，大枣9 g，茯苓15 g，白术10 g，白芍10 g，当归10 g，丹参10 g组成，药材均购自广州中医药大学第一附属医院药房, 先加蒸馏水浸泡40 min，一煎加药材量的8倍水，沸腾后煎40 min，二煎加药材量的6倍水，沸腾后煎30 min，过滤，两煎所得滤液混合后干燥浓缩至30 ml，-20℃保存备用。
       1.3   试剂  醋氨酚，北京第二制药厂提供；联苯双酯滴丸：为广州星群药业股份有限公司提供，批号AF40046；LPO检测试剂盒，广州威佳科技有限公司提供，批号20050711；GSH检测试剂盒，南京建成生物工程研究所提供，批号20050630；小鼠IL-2，6 ELISA试剂盒均由武汉博士德生物工程有限公司提供，批号分别为EK 0398，EK 0411。
       1.4  分组、造模［4］与给药  小鼠60只随机分6组，每组10只动物，分别为正常对照组、模型对照组、加味小柴胡汤高剂量组、加味小柴胡汤中剂量组、加味小柴胡汤低剂量组、联苯双酯组。治疗组按40，20，10 g/（kg·d）剂量，阳性对照组联苯双酯按0.15 g/（kg·d）分别给小鼠连续灌胃10 d,正常对照组及模型组给予生理盐水，每次0.2 ml/只。正常对照组在最后 1  次灌胃6 h后腹腔注射生理盐水，其余各组在最后 1 次灌胃6 h后腹腔注射醋氨酚0.3 g/Kg复制肝损伤模型,16 h后摘小鼠眼球取血进行生化测试,同时留取肝组织左上叶作组织学检查。
       1.5  指标检测肝组织LPO测定及血清GSH，IL-2，IL-6测定均按试剂盒说明操作。
       1.6   统计学方法  采用spss10.0软件分析。
       2  结果
       2.1   加味小柴胡汤对醋氨酚所致肝损伤LPO，GSH，IL-2，IL-6的影响见表1。模型组小鼠LPO，IL-6较正常对照组明显升高，两者比较差异有显著性意义（P<0.01）。加味小柴胡汤大剂量组、中剂量组LPO，IL-6均明显低于模型组，有显著性差异（P<0.01），与联苯双酯组比较，无显著性差异（P>0.05）。加味小柴胡汤小剂量组LPO与模型组比较，无显著性差异（P>0.05）。
       
       GSH结果：模型组小鼠GSH，IL-2较正常对照组明显降低，两者比较差异有显著性意义（P<0.01，0.05）。加味小柴胡汤大剂量组、中剂量组GSH均明显高于模型组，有显著性差异（P<0.01），与联苯双酯组比较，无显著性差异（P>0.05）。加味小柴胡汤小剂量组GSH与模型组比较，无显著性差异（P>0.05）。
       表1  加味小柴胡汤对醋氨酚所致肝损伤LPO，GSH，IL-2，IL-6的影响（略）
       与正常组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01；n=10
       2.2  肝脏病理组织学检查见图1。正常组肝组织无明显病变，肝细胞清晰，细胞核为圆形或卵圆形，无畸形改变等异常现象。模型组肝细胞损伤非常明显，胞浆疏松化，明显气球样变，肝小叶中央区周围细胞可见核浓缩、破碎，甚至消失，肝窦淤血。
       
       加味小柴胡汤高剂量组，肝组织无明显病变，肝细胞清晰，未见明显肝细胞浊肿。中剂量组，组织轻度破坏，轻度肝细胞浊肿，轻度围管浸润。低剂量组肝细胞气球样变，围管浸润，淤血明显，未见明显核浓缩破碎。联苯双酯组，肝内小片坏死灶，染色质加深，肝窦淤血，有炎性细胞浸润。
       图1  各组肝组织病理检查结果比较（HE,×400）（略）
       
       醋氨酚肝损伤模型是药物性肝损伤的代表性模型。研究发现,醋氨酚可使小鼠肝脏过氧化增强,产生自由基而引起肝细胞膜脂质过氧化造成细胞损伤［5］。正常情况下氧自由基被内源性清除剂如过氧化变位酶分解,但在病理情况下,氧自由基产生超过了组织抗氧化能力,从而产生过氧化应激。LPO是生物膜中的多价不饱和脂肪酸自由基作用的产物,可严重损伤肝细胞膜结构,导致肝细胞的肿胀坏死,反映体内自由基水平。肝损伤程度越重,LPO的含量则越高［6］。GSH是一种低分子清除剂，它可清除O2-·，H2O2，LOOH。GSH是蛋氨酸、甘氨酸和半胱氨酸组成的一种三肽，是组织中主要的非蛋白质的巯基化合物，并且是GSH-PX和GST两种酶类的底物，为这两种酶分解氢过氧化物所必需，它并且能稳定含巯基的酶和防止血红蛋白及其它辅因子受氧化损伤，因而GSH的量的多少是衡量机体抗氧化能力大小的重要因素,也是机体的一种防御机制［7］。
       
       IL-2主要由TH细胞产生，其免疫调节作用是多方面的，无论在体内还是体外，IL-2均具有促进T细胞增殖、增强杀伤T细胞、NK细胞的活性等广泛的免疫调节作用［8］，可以降低炎性介质水平利于减轻炎性介质的损伤程度。IL-6是体内许多细胞产生的一种具有多种生物学活性的刺激因子，可诱导中性粒细胞向肝细胞浸润,促进肝窦状隙内皮细胞的粘附作用;增强血管内皮的促凝活性,引发血管内凝血影响肝微循环,促进肝细胞的损害［9］，是参与机体炎症、免疫反应和一系列病理生理过程的重要介质,且与疾病的活动性有关。小柴胡汤属和解剂，动物实验研究反映它对实验性肝损伤有保护作用，与祖国医学认为它具有“调肝散邪”的提法相符［10］，能保护肝细胞、抑制肝细胞损伤、促进肝细胞再生，从而改善肝功能、增强肝脏的修复能力［11］。
       
       鉴于肝损伤中，脾虚、阴虚及淤血是常见的病理改变，但方中健脾、养阴及活血的药力却显不足，故本实验在原方基础上加入茯苓、白术、白芍、当归、丹参等健脾、养阴及活血中药构成加味小柴胡汤，并将其用于醋氨酚所致肝损伤小鼠。
       
       研究结果显示，加味小柴胡汤高、中剂量组均有降低肝损伤小鼠LPO，IL-6及升高GSH，IL-2，改善肝组织病变的作用，提示加味小柴胡汤高、中剂量具有一定保护醋氨酚致药物性肝损伤的作用，其作用机理可能通过抗氧化及免疫调节起作用。
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