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       【摘要】 
       目的研究葎草提取物抗结核菌活性及有效部位。方法以体外抑菌实验筛选葎草抗结核活性部位，采用试管倍比稀释法测定葎草提取物最低抑菌浓度（ＭＩＣ），评价其体外抗菌活性。结果葎草的正丁醇萃取部位对结核分枝杆菌标准株Ｈ３７ ＲＶ 及临床分离的敏感菌株具有较明显的抗菌作用，粗提物的ＭＩＣ 为１２５ μｇ· ｍｌ－１ ，高浓度１ ｍｇ· ｍｌ－１ 时有杀灭作用。结论葎草提取物对结核杆菌具有明显的抗菌活性，有进一步研究开发的价值。
       【关键词】  葎草 结核分枝杆菌 抗菌活性
       Inhibitory Effects against Tuberculous Bacillus of Extracts from Humulus scandens
       CHEN Weiguang, LIN Xia, SUI Fengying, YIN Xiu, TU Jiehong, SHENG Jing, HUANG Jia
       （Medical School of Jiaxing University， Jiaxing， Zhejiang ３１４００１，China； Medical College，Zhejiang University，Hangzhou ３１０００６，China）
       Abstract：ObjectiveＴｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｓ from Humulus scandens ａｇａｉｎｓｔ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｕｓ ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｄ ｔｏ ｆｉｎｄ ｏｕｔ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ．MethodsＴｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｓｉｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ iｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ａｇａｉｎｓｔ tｕｂｅｒｃｕｌｏｕｓ bａｃｉｌｌｕｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｆｒｏｍ Humulus scandens．ＭＩＣ ｏｆ ｔｈｅ extracts ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｍｅａｎｓ ｏｆ double ｄｉｌｕｔｉｏｎ ．ResultsTｈｅ Ｎ －ｂｕｔａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔ ｈａｄ ｏｂｖｉｏｕｓ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｔｏ Ｈ ３７ ＲＶ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｓｔｒａｉｎ ｗｈｉｃｈ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｃｌｉｎｉｃ ．ＭＩＣ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｗａｓ １２５ μｇ· ｍｌ－１ ａｎｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈ ｌｅｖｅｌｓ （１ ｍｇ· ｍｌ－１）ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｈａｄ ａ ｋｉｌｌｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ．ConclusionThe ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｆ H．scandens ｈａve ｏｂｖｉｏｕｓ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｉｔ ｉｓ worthy ｔｏ ｂｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｆｕｒｔｈｅｒ．
       Key words：Humulus scandens （Ｌｏｕｒ．） Ｍｅｒｒ．；  Ｔｕｂｅｒｃulous ｂａｃｉｌｌｕｓ；  Ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｓｉｓ
       
       近年来，全球结核病疫情再度上升，受到了世界各国的关注。全球１／３ 人口（约２０ 亿）感染过结核菌，全世界现有结核病人２ ０００万，每年还会新发生８００ ～１ ０００ 万肺结核病人，死亡约２００万人。２０００ 年全国结核病流行病学调查的结果显示，我国有４～５ 亿人受到过结核杆菌的感染，有各类肺结核病人约８００ 万，每年新增传染性肺结核患者１５０ 万人，有１３ 万人死于结核病。目前临床上常用的抗结核药物大多对肝、肾脏有较大的毒性，且易产生耐药性。因此，近年来从天然资源中寻找安全有效的抗结核药物，已引起越来越广泛的重视。葎草是一种民间草药，为桑科植物Humulus scandens （Ｌｏｕｒ．） Ｍｅｒｒ．的全草。含青兰苷、天门冬素、挥发油、鞣质及树脂、木犀草素葡萄糖苷、大波斯菊苷、牡荆素等黄酮类成分，具清热解毒、利尿消肿等功效，民间用于肺结核潮热、胃肠炎、痢疾、淋证、痔疮等证［１］ 。早期曾有关于葎草用于治疗结核病的报道［１］ 。为探索抗结核中药，我们对葎草中的成分进行了初步的分离，并进行了葎草提取物对结核分枝杆菌的体外抑菌活性研究。现报道如下。
       1  材料与方法
       1.1  材料葎草采自嘉兴郊区，由嘉兴学院生药、天然药物化学教研室陈伟光副教授鉴定。采回后切成长２ ｃｍ 的小段，在阴凉处用风扇吹干备用。
       1.2  菌株结核菌标准株Ｈ３７ ＲＶ，由杭州市预防保健门诊部检验科提供（购自北京疾控中心）。临床分离结核菌株由嘉兴市第一医院提供。
       1.3  药液的制备取葎草段（２ ｃｍ 长）５００ ｇ，７５％乙醇回流提取，提取液回收溶剂至无醇味，加适量蒸馏水溶解，分别依次用石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇萃取，上述各萃取部位回收溶剂后得各提取物。将各提取物定量溶于２５０ ｍｌ 容量瓶中，加５０％乙醇至刻度，超声助溶，制成每毫升含相当于２ ｇ 生药的供试药液。剩余的水溶液挥去正丁醇，调节至同样浓度，置冰箱中备用（６℃）。
       1.4  含药培养基的制备按常规方法配制罗氏培养基，取上述各种葎草提取液１ 份，加入培养基５ 份混匀，即成１∶５ 稀释度的含药培养基，分装中号试管，每管６ ｍｌ。每种药液做３ 个复管，灭菌后备用。空白管加１ ｍｌ ５０％乙醇代替葎草提取液。
       1.5  操作步骤分别取培养３ 周的结核菌标准株Ｈ３７ ＲＶ 和临床分离菌株斜面生长物适量，用比浊法稀释成１０６ 个／ｍｌ 菌浓度，用吸管反复吸打均匀［２］ 。在每支含药和空白对照培养液管中分别加入０．１ ｍｌ 上述Ｈ３７ＲＶ 或临床分离菌株菌液，置３７℃恒温培养箱培养６ 周，２ 周后开始观察结核分枝杆菌的生长情况，以后每周观察。记录结果。
       2  结果
       2.1  葎草不同提取部位的抑菌作用葎草的５ 种不同提取部位对结核杆菌生长的抑制作用见表１。由表１ 可知，石油醚、正丁醇和水提取部位有抑菌作用，而以正丁醇提取部位最强。因此，又对正丁醇提取部位做进一步的抗菌活性研究。
       表1  葎草不同提取部位对结核杆菌生长的抑制作用（略）
       “-”无菌落生长;“+”有菌落生长2.2  不同浓度的正丁醇提取物对结核杆菌生长的影响正丁醇提取物用５０％乙醇配制成１２ ｍｇ· ｍｌ－１的供试药液，再用生理盐水以２ 倍稀释法制成１∶１，１∶２，１∶４，１∶８，１∶１６ 等５ 个浓度，按上述方法制备不同浓度含药培养基，同时设不含药液之空白对照管。分别接种结核杆菌标准株和临床分离菌株，每株结核菌和每个药物浓度均各设３ 个复管。结果见表２。
       表２  正丁醇提取物对结核杆菌的抑菌作用（略）
       “ －”未见菌落生长；“ ＋”有个别菌落；“ ＋＋”有少量菌落；“ ＋＋＋”菌落数较多； *未做
       
       由表２ 可知，葎草的正丁醇提取物对结核分枝杆菌标准株Ｈ３７ ＲＶ 及临床分离的敏感菌株都具有较明显的抗菌作用，粗提物的ＭＩＣ 为１２５ μｇ· ｍｌ－１，高浓度时１ ｍｇ· ｍｌ－１，第６ 周也未发现菌落，对结核分枝杆菌有较强的抑制或杀灭作用。
       3  讨论
          
       上述实验研究结果表明，葎草的提取物中以正丁醇萃取物的抗结核分枝杆菌作用最强，且有明显的剂量－效应关系，粗提物在１ ｍｇ· ｍｌ－１就能完全抑制结核分枝杆菌的生长。０．１２５ μｇ·ｍｌ－１时，在早期也有抑制作用。但本实验所用药物还是粗提物，有待于进一步分离追踪有效成分。此外，由于时间关系，耐药菌株事先未做活化培养，效果不理想而未收入本文，还需进一步验证。葎草是一种常用中草药，大剂量应用也未见毒副作用。而且分布广泛，资源丰富，是一种很有希望的抗结核中草药，值得进一步研究开发。
       【参考文献】
         　　［1］ 尹海波，王 颖，郑太坤，等．中国葎草属植物的研究进展［Ｊ］．辽宁中医学院学报， ２００１，３ （１）：６０．
       
       ［2］ 匡铁吉，董 梅，宋 萍， 等．黄连素对结核分枝杆菌的体外抑菌作用［Ｊ］．中国中药杂志，２００１， ２６ （１２）：８６７．