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       【摘要】 
       目的测定5个不同厂家（分别以代码A，B，C，D和E表示）三黄片的体外溶出度，为评价和控制药品质量提供依据和参考。方法以水为释放介质，用高效液相色谱法对不同厂家的三黄片的溶出度进行测定和比较。使用SPSS中的一般线性模型(general linear model)对不同厂家三黄片的体外溶出度进行多重比较。结果5个不同厂家相互之间的溶出度有显著差异(Sig.<0.01)，只有厂家A和厂家B之间无显著差异(Sig.=0.945)， 厂家C和厂家E之间无显著差异(Sig.=0.238)。结论有必要对各个厂家的三黄片剂进行溶出度检查，以保证临床用药疗效。
       【关键词】  三黄片 溶出度 高效液相色谱法 一般线性模型
       A Study on in vitro Dissolution of Sanhuang Tablets
       LU Wensheng
       （The Third Affiliated Hospital of Guangxi Medical University, Nanning 530031，China）
       Abstract:ObjectiveTo determine the in vitro dissolution of Sanhuang Tablets from five different manufactures（coded as A,B,C,D and E, respectively）. MethodsThe dissolution rates of Sanhuang Tablets were determined by HPLC，using distilled water as dissolution medium. The multiple comparisons were performed on the in vitro dissolution of Sanhuang tablets using SPSS General Linear Model. ResultsFive manufactures (A,B,C,D and E)differed significantly from one another in their dissolution(Sig.<0.01),except between A and B(Sig.=0.945), between C and E(Sig.= 0.238).ConclusionIt is suggested that the dissolubility of tablets from different manufactures should be tested to control the quality and ensure clinical efficacy.
       Key words:Sanhuang Tablets；  Dissolubility HPLC；  General linear model
       
       三黄片系由大黄、黄芩浸膏、盐酸小檗碱组成的复方制剂，具有清热解毒,泄火通便的作用,是治疗三焦热盛,目赤肿痛,口鼻生疮,痢疾等疾患的常用药物［1］。现在我国已有数家药厂的三黄片投放市场，但临床反映不同厂家三黄片的疗效存在差异，目前还未发现有对该药体外溶出度进行考察的文献，本文采用高效液相色谱法，对该药中的主要成分黄芩苷的溶出度进行测定，从而对5个厂家的三黄片剂做了体外溶出度考察，为评定和控制该药品质量提供依据。
       1  仪器与试药
       1.1  仪器ZRS－4智能溶出试验仪（天津大学无线电厂）；Waters-600E型高效液相色谱仪，Waters-996型PDA二极管阵列检测器，Waters-M32色谱工作站(美国)。
       1.2  试剂三黄片（A：糖衣片，襄樊某药业有限责任公司，批号060601； B：糖衣片，南宁市某制药有限公司，批号061020；C：糖衣片，广西某制药有限公司，批号060901； D：糖衣片，新乡某制药股份有限公司，批号060401；E：薄膜衣片，河南康鑫药业有限公司，批号060306）。
       2   方法与结果
       2.1  色谱条件色谱柱：Nova-PakC18柱（4.0 mm×250 mm，4 μm）；流动相：甲醇-水-磷酸(45∶55∶0.2)；检测波长：276 nm；柱温40℃；流速为0.9 ml·min-1 ，在此条件下色谱图见图1。
       2.2   对照品溶液的制备　　精密称取标准品(80℃，干燥1 h) 6.04 μg，置于10 ml容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，作为对照品溶液。
       2.3  检测波长的选定  经PDA扫描黄芩苷对照品水溶液的吸收光谱（图2），黄芩苷在214 nm和276 nm处有最大吸收峰，考虑到波长(214 nm)接近末端吸收，从检测波长的稳定性方面考虑，为了减小溶剂的短波吸收干扰，选择276 nm作为测定黄芩苷吸光度的测定波长,以便获得更好的检测灵敏度。
       图1  黄芩苷的色谱图（略）
       图2  黄芩苷对照品吸收光谱（略）
       2.4  线性关系的考察　精密吸取黄芩苷对照品储备液（3.608μg /ml）,1，2，4，6，8，10 ml分别置10 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。精密吸取上述溶液各10 μl，注入液相色谱仪，测定峰面积Y。以进样量X（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，并以最小二乘法计算，得回归方程Y＝522 634 1X－264 231，r＝0.999 8。结果表明黄芩苷在0.368～3.608 μg /ml范围内与峰面积有良好的线性关系。
       2.5  精密度实验   在溶出度测定试验完成后，重复测定同一份120 min释放液的吸收度5次，结果峰面积的RSD=0.36%。
       2.6  稳定性实验   在溶出度测定试验完成后，以120 min释放液的吸收度为起点，每隔1 h测定1次，其峰面积RSD=0.13%（n=3）。
       2.7  溶出度测定    使用转篮法，按中国药典2005年版Ⅱ部附录XC溶出度测定项下操作。以脱气蒸馏水 900 ml为溶出介质，温度为(37.0±0.5)℃，转速为100 r·min-1，取三黄片6粒分别置于转篮，转篮降入溶出介质中，立即计时至10，15，20，30，45和60 min时取样约6 ml（同时补充同温介质6  ml），用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，精密吸取各时间点续滤液10 μl注入液相色谱仪，在以上色谱条件下进行测定。另取同一厂家批号片剂10片，除去包衣后，精密称定，研细，精密称取适量（相当于0.55粒的平均裝量），加蒸馏水溶解，超声处理20 min，并稀释至500 ml，滤过，照高效液相色谱法于276 nm波长处测定峰面积，按二者峰面积比值计算溶出度。
       2.8  崩解时限检查   崩解时限按照《中国药典》2005版（附录X）检查。实验结果为：厂家A为12 min；厂家B为13 min；厂家C为12 min；厂家D为13 min；厂家E为8 min。均符合《中国药典》规定。
       2.9  计算各个时间点的累积溶出度结果见表1及图3。
       图3  三黄片平均溶出度-时间曲线（略）
       表1  三黄片的平均累积溶出率（略）
       2.10  溶出度参数的计算结果使用Spss软件的非线性回归，经多种溶出度模型拟合分析,三黄片溶出度数据符合Weibull分布。按Weibull公式拟合以上数据，做分析时在Model Expression对话框直接选用Weibull公式进行计算，得出尺度参数a和形状参数b，继而求出T50和Td。结果见表2。
       表2  各厂家样品的溶出参数（略）
       2.11  不同厂家三黄片的溶出度比较使用SPSS中的General Linear Model分析不同时间点下不同厂家三黄片的溶出度数据，分别比较它们在10，20，30，45和60 min下的溶出度，通过模型生成的方差分析表可知，不同厂家三黄片之间的溶出度有显著差异(F=84.037，Sig.=0.0001<0.05)，见表3。对于有3个或3个以上水平的因素(如本例厂家因素有A、B、C、D和E 5个水平)，在做分析时选择POST HOC对话框，采用SNK法可生成多重比较，通过同类亚群表(homogeneous subsets)可发现任意两组之间的比较结果，厂家A和厂家B之间无显著差异(Sig.=0.945)，厂家C和厂家E之间无显著差异(Sig.=0.238)。结果见表4。
       表3   方差分析（略）
       表4   同类亚群（略）
       2.12   数据处理   所有数据均使用SPSS11.5 软件进行分析［2］，包括非线性回归(按Weibull公式进行拟合)、General Linear Model。
       3  讨论
          
       固体口服制剂的崩解与溶出实际在很多情况下并不具有相关性［3，4］，特别是溶出性较差的药物就更突出，因此药物溶出度测定正越来越多地取代崩解时限检查作为质控手段。本文采用高效液相色谱法对5个厂家的三黄片的体外溶出性能进行了考察。利用本法测定三黄片的体外溶出度精确，稳定，重现性好,可作为该制剂溶出度测定的检测方法。
       
       实验结果表明5个不同厂家相互之间的溶出度有显著差异(Sig.<0.05)，厂家A和厂家B之间无显著差异(Sig.=0.945)，厂家C和厂家E之间无显著差异(Sig.=0.238)，厂家E产品具有较好的溶出。
       
       各厂家的溶出参数之间存在着显著性差异，可能由于三黄片的生产工艺尚不稳定所致。笔者发现，薄膜衣片比糖衣片的溶出要好，E厂家为薄膜衣片。中药的提取物多易吸潮，如果不包薄膜衣，就必须进行隔离层包衣，而隔离层（明胶浆）的溶解缓慢，势必会影响药物的释出；同是糖衣片，所用原、辅料来源不同，处方的组成、生产工艺等各方面存在差异，也会导致溶出度有较大差异。
       
       这5个厂家供试品的崩解时限测定结果与其溶出度试验结果并不相关，缓慢的溶出速率会影响药物的吸收和临床疗效，因此，有必要对三黄片的溶出度进行考察。
       【参考文献】
         　　［1］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：328.
       
       ［2］ 张文彤.Spss11统计分析教程基础篇［M］.北京：北京希望电子出版社，2002：6.
       
       ［3］ 黄良永,郑江萍,甘春英. 高效液相色谱控制三黄片生产质量的研究［J］.时珍国医国药，2004， 15（12）：839.
       
       ［4］ 蔡为群，顾雪中. 高效液相色谱法测定三黄片中黄芩苷的含量［J］.时珍国医国药， 2003，14（3）：136.