文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【摘要】 
       目的观察石荠苧总黄酮抗炎作用并对其机制进行初步研究。方法采用二甲苯致小鼠耳肿胀，冰醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加，角叉菜胶致小鼠足跖肿胀及大鼠气囊炎等炎症模型，观察石荠苧总黄酮对不同炎症模型的抗炎作用，并测定蛋白质、前列腺素Ｅ２ （ＰＧＥ２ ），一氧化氮（ＮＯ），丙二醛（ＭＤＡ）含量及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性。结果石荠苧总黄酮能显著降低小鼠毛细血管通透性，抑制小鼠二甲苯致耳肿胀，减轻小鼠足跖肿胀，降低炎症组织ＰＧＥ２ 含量， 抑制角叉菜胶致大鼠气囊炎模型中渗出液总蛋白质含量，降低血浆ＮＯ，ＭＤＡ 含量，增强血浆ＳＯＤ 活性。结论石荠苧总黄酮具有明显的抗炎作用，其抗炎作用可能与其降低血管通透性、抑制ＰＧＥ２ ，ＮＯ 等炎症介质生成及增强清除氧自由基、抗脂质过氧化能力有关。
       【关键词】  石荠苧 总黄酮 抗炎 作用机制
       Study on the Anti －inflammatory Effect and Mechanism of Flavones in Mosla hangzhowensis Matsuda
       ＮＩＥ Ｂｅｎ，   ＹＵ Ｃｈｅｎｈｕａｎ，ＷＡＮＧ Ｆａｎｇｆａｎｇ，ＸＩＯＮＧ Ｙａｏｋａｎｇ*， ＢＡＩ Ｂｉｎｇｂｉｎｇ
       （Pharmaceutical College， Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine， Hangzhou， Zhejiang ３１００５３， China）
       Abstract：ObjectiveＴｏ ｓｔｕｄｙ the ａｎｔｉ －ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｅｓ ｉｎ Mosla hangzhowensis Ｍａｔｓｕｄａ ａｎｄ ｉｔｓ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ.MethodsＡｕｒｉｃｌｅ edema ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｄｉｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｅｎｅ ， ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｂｌｏｏｄ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｂｙ ＨＡｃ ａｎｄ edema ｉｎ ｆｅｅｔ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ ｉｎ ｍｉｃｅ， Ａｉｒ －ｐｏｕｃｈ ａｃｕｔｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ ｉｎ ｒａｔs ｗｅｒｅ ａｐｐｌｉｅｄ ｆｏｒ ａｎｔｉ －ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ．Aｎｔｉ －ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｅｓ ｉｎ Mosla hangzhowensis Ｍａｔｓｕｄａ were obseved in ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｏｄｅｌｓ， ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ， ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｅ２ （ＰＧＥ２ ）， ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｍｏｎｏｘｉｄｕｍ（ＮＯ）， ｍａｌｏｎａｌｄｅｈｙｄｅ（ＭＤＡ） ａｎｄ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ superoxide dismuitase（ＳＯＤ） were determined．ResultsＦｌａｖｏｎｅｓ ｉｎ Mosla hangzhowensis Ｍａｔｓｕｄａ ｃｏｕｌｄ inhibit ｖａｓｏｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｅｎｇｏｒｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｔｅｘｔｕｒｅ， ｄｅｃｒｅａｓｅ ｔｏｔａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｅｆｆｌｕｓｉｏｎ， ｒｅｄｕｃｅ ＰＧＥ２ ， ＮＯ ａｎｄ ＭＤＡ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ａｎｄ increase ＳＯＤ ａｃｔｉｖｉｔｙ ．ConclusionＴｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍs ｏｆ ａｎｔｉ －ｉｎｆｌａmmａｔｏｒｙ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｅｓ ｉｎ Mosla hangzhowensis Ｍａｔｓｕｄａ ａｒｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｏｐｅｒ ｍｅａｂｉｌｉｔｙ， ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ mediators ａｎｄ ａｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ oxygen free radical seavengirg capacity ａｎｄ ａｎｔｉ －ｌｉｐｉｄ ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ．
       Key words：Mosla hangzhowensis Ｍａｔｓｕｄａ；  Ｆｌａｖｏｎｅｓ；  Ａｎｔｉ －ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ；  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ
       
       石荠苧Mosla hangzhowensis  Ｍａｔｓｕｄａ 为唇形科草本植物，为江浙民间常用中草药，具有清热解毒，理气化湿之功效，主治夏日感冒、腹痛泄泻、湿疹、疖肿、外伤出血、跌打损伤、疮毒和慢性支气管炎等［1］。现代药理研究表明，石荠苧含有１，８ －桉叶油素、侧柏酮、β－石竹烯、香荆芥酚、百里香酚、黄酮类化合物及脂肪酸等成分［2，3］。本课题组前期研究发现，石荠苧中总黄酮类成分具有明显的抗菌、抗流感病毒作用，能明显改善流感病毒感染小鼠肺组织炎症［4，5］。本实验进一步对其抗炎作用及其机制进行系统研究，以期为石荠苧的临床应用和新药开发提供实验依据。
       １  器材
       １．１   　动物ＩＣＲ 小鼠，体重１８ ～２２ ｇ；健康Ｗｉｓｔａｒ 大鼠，清洁级，体重１８０ ～２００ ｇ。均由中国科学院上海实验动物中心／上海斯莱克实验动物有限公司提供，动物合格证号：ＸＹＸＫ（浙） －２００３－０００３。
       １．２  　药品与试剂石荠苧总黄酮（ＴＦＳ），由资源鉴定教研室提供。地塞米松片（批号：０６１２１８），浙江仙居制药厂。阿司匹林肠溶片（批号：０６１１０２），南京白敬宇制药有限责任公司。氢化可的松（批号：０６１２１０），山东新华制药股份有限公司。角叉菜胶（批号：４５Ｆ －０４２７），Ｓｉｇｍａ 公司。伊文思蓝（批号：Ｆ２００４０２１３，进口分装），国药集团化学试剂有限公司。ＳＯＤ 检测试剂盒（批号：２００７０３３１），ＮＯ 检测试剂盒（批号：２００７０３３１），ＭＤＡ 测定试剂盒（批号：２００７０４０２），总蛋白液体试剂盒（批号：２００７０４０３），均购自南京建成生物工程研究所。其他试剂均为分析纯。
       １．３  仪器ＴＵ －１９００ 双光束紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司。ＢＳ１１０Ｓ 电子天平，北京赛多利斯公司。微量移液器，Ｔｈｅｒｍｏ Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ Ｆｉｎｎ Ｐｉｐｅｔｔｅ。
       ２  方法与结果
       ２．１  对冰醋酸致小鼠毛细血管通透性的影响［6］取小鼠５０ 只，雌雄各半，随机分成５ 组，分组及给药剂量见表１（模型组给予同体积生理盐水）。每日灌胃给药，１ 次／ｄ，连续５ ｄ，末次给药后１ ｈ，尾静脉注射０．５％伊文思蓝生理盐水溶液０．１ ｍｌ／１０ ｇ，并同时腹腔注射０．６％醋酸溶液０．１ ｍｌ／１０ ｇ，２０ ｍｉｎ 后处死，用６ ｍｌ 生理盐水冲洗腹腔，洗液离心５ ｍｉｎ（１ ５００ ｒ／ｍｉｎ），取上清液在分光光度计５９０ ｎｍ 处，测定值。
       表1  TFS对小鼠毛细血管通透性的影响（略）
       与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01；n=10
       
       由表１ 结果可知，ＴＦＳ 能显著抑制冰醋酸致小鼠毛细血管通透性，其中ＴＦＳ ２５，５０，１００ ｍｇ／ｋｇ 剂量组与模型组相比较有显著意义。
       ２．２  对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响［6］取小鼠５０ 只，雌雄各半，随机分为５ 组，分组及给药剂量见表２（模型组给予同体积生理盐水）。每日灌胃给药，１ 次／ｄ，连续５ ｄ，末次给药３０ ｍｉｎ 后，于小鼠右耳两面涂二甲苯０．０５ ｍｌ 致炎，左耳不涂为正常耳；１ ｈ 后处死小鼠，沿耳廓基线剪下双耳，用直径６ ｍｍ 打孔器在同一部位取下耳片，称重，以左右耳片重量差值表示炎性肿胀程度。由表２ 结果可知，ＴＦＳ 能显著抑制二甲苯致小鼠耳肿胀，其中５０，１００ ｍｇ／ｋｇ 剂量组与模型组相比较有显著意义。
       
       由表２ 结果可知，ＴＦＳ 能显著抑制二甲苯致小鼠耳肿胀，其中５０，１００ ｍｇ／ｋｇ 剂量组与模型组相比较有显著意义。
       表2  TFS对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响（略）
       与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01；n=10
       ２．３  对角叉菜胶引起足跖肿胀及炎症组织中ＰＧＥ２ 的影响［7］取小鼠５０ 只，雌雄各半，随机分为５ 组，分组及给药剂量见表３（模型组给予同体积生理盐水）。每日灌胃给药，１ 次／ｄ，连续５ ｄ，末次给药后３０ ｍｉｎ，于每只小鼠左后肢足跖注射１％角叉菜胶５０ μｌ，４ ｈ 后颈椎脱臼处死小鼠，于踝关节处剪下左右后肢，称重，以左右后肢重量之差作为炎症肿胀程度。将剪下上述致炎足，剥皮，剪碎放入２ ｍｌ 生理盐水中浸泡２４ ｈ，离心，取上清液０．１ ｍｌ，加０．５ ｍｏｌ／Ｌ ＫＯＨ －甲醇溶液２ ｍｌ，在５０℃下异构化２０ ｍｉｎ，用甲醇稀释至４ ｍｌ，于２７８ ｎｍ 处测定OD 值，以每克炎症组织相当的OD 值表示ＰＧＥ２ 的含量。
       表3   TFS对小鼠足跖肿胀及炎症组织PGE2含量的影响（略）
       与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01；n=10
       
       由表３ 结果可知，ＴＦＳ 能显著抑制角叉菜胶致小鼠足趾肿胀及降低炎症组织ＰＧＥ２ 含量，其中ＴＦＳ ５０，１００ ｍｇ／ｋｇ 剂量组与模型组相比较具有显著意义。
       ２．４  对角叉菜胶致大鼠气囊炎的影响［6］取大鼠60只，按体重随机分为６ 组：空白组、模型组、阳性对照组及石荠苧总黄酮高、中、低剂量组。除空白组和模型组给予同等生理盐水外，每组动物均连续灌胃给药。于给药当天在大鼠背部肩胛区皮下注入空气１０ｍｌ，第３ 天及第６ 天再次注入空气各５ ｍｌ，维持气囊的膨胀度，并在末次给药后在大鼠背部气囊内注入２ ％角叉菜胶２ ｍｌ 诱发炎症，空白组注入相应体积生理盐水，３ ｈ 后再给药１ 次，于致炎６ ｈ后麻醉，心脏取血， －２０℃保存待测ＮＯ，ＭＤＡ 含量及ＳＯＤ 活性。处死动物，气囊内注入冰生理盐水（含肝素５０ Ｕ／ｍｌ）进行灌洗，收集灌洗液，测定总蛋白含量。结果见表４ ～５。
       表4  对大鼠气囊炎模型中渗出液总蛋白含量的影响（略）
       与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01；n=8
       
       由表４ ～５ 结果可知，角叉菜胶致炎后，ＴＦＳ 能显著降低炎症介质渗出，其中５０，７５ ｍｇ／ｋｇ 剂量组均能降低大鼠气囊渗出液中总蛋白含量，降低血浆中ＮＯ，ＭＤＡ 含量，增强ＳＯＤ 活性，与模型组相比具有显著性差异，提示ＴＦＳ 具有显著的抗炎作用。
       表5   对大鼠气囊炎模型中血浆SOD活性，NO，MDA含量的影响（略）
       与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01；n=8
       ３  讨论
          
       炎症是在致炎因素作用下，由炎症细胞及其释放的炎症介质参与引起的一系列病理生理过程。在炎症反应中，致炎因素引起毛细血管扩张，通透性增加，中性粒细胞趋化、游走至炎症反应灶，释放炎症介质参与炎症反应［8，9］，并发生呼吸暴发，产生Ｏ２．－等活性氧自由基。这些氧自由基不仅能增加血管通透性， 而且攻击生物膜磷脂中的多聚不饱和脂肪酸，引起脂质过氧化，造成生物膜损伤，尤其脂质过氧化产物ＭＤＡ 毒性更强，能进一步加重炎症反应，而体内自由基清除剂如ＳＯＤ 可通过清除自由基，抑制脂质过氧化反应。ＰＧＥ２ 作为一种炎症因子，存在于炎症组织中，可与缓激肽、白三烯等炎症介质起协同作用，引起血管扩张，加强组胺和缓激肽升高血管通透性的作用。通过抑制ＰＧＥ２的合成，可以减轻炎症反应［10，11］。ＮＯ 是一种重要的信使物质，同时也是一种重要的炎症介质，在炎症反应的许多环节发挥复杂的调节作用，其促炎症反应包括促进血管扩张，增强血管通透性，激活前列腺素合成酶等，研究认为急慢性炎症的发生均与ＮＯ 有关系［12］。本实验结果显示，石荠苧总黄酮可明显抑制二甲苯致小鼠耳肿胀和角叉菜胶致小鼠足趾肿胀，降低炎症组织ＰＧＥ２ 含量，降低冰醋酸致小鼠毛细血管通透性，减少角叉菜胶致大鼠气囊炎模型中渗出液总蛋白质含量，降低血浆ＮＯ，ＭＤＡ 含量，增强血浆ＳＯＤ 活性。提示石荠苧总黄酮具有显著的抗炎作用，其抗炎作用可能与其降低血管通透性，抑制ＰＧＥ２ ，ＮＯ 等炎症介质生成及增强清除氧自由基、抗脂质过氧化能力有关。
       【参考文献】
         　　［1］ 浙江省卫生局．浙江民间常用草药第３ 集［Ｍ］．杭州：浙江人民出版社，１９７２：６９．　
       
       ［2］ 江苏新医学院．中药大辞典［Ｍ］．上海：上海科学技术出版社，１９８６：６０９．
       
       ［3］ 吴翠萍，吴国欣，陈密玉，等．石荠苧精油的ＧＣ －ＭＳ 分析及其抑菌活性的研究［Ｊ］．植物资源与环境学报，２００６，１５（３）： ２６．
       
       ［4］ 曾晓艳，吴巧凤，程东庆．石香薷、苏州荠苧不同提取物体外抑菌作用的比较研究［Ｊ］．中国中医药科技，２００７，１４（１）：３５．
       
       ［5］ 吴晓宁，吴巧凤，陈 京．浙江产石荠苧属植物研究进展［Ｊ］．浙江中医学院学报，２００５， ２９（４）：９２．
       
       ［6］ 陈 奇．中药药理学实验［Ｍ］．上海：上海科学技术出版社，２００１：４３．　
       
       ［7］ 邢建峰，侯家玉，邹节明，等．溃结康胶囊的抗炎作用机制［Ｊ］．中国医院药学杂志， ２００５， ２５（９）：８１７．
       
       ［8］ 吴 萍，张 力，张代娟．抗炎中药的药理机制与其促炎症缓解作用的关系研究［Ｊ］．中国病理生理杂志， ２００５，２１（８）：１６５８．
       
       ［9］ Ｅｎｄｏ Ａ．Ｔｈｅ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ｄｅｖｏｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ＨＭＧ －ＣｏＡ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ［Ｊ］．Ｊ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ，１９９２，３３（１１）：１５６９．
       
       ［10］ 阳　洁，刘华钢．中药抗炎作用分子机制研究进展［Ｊ］．广西科学，２００５，１２（３）：２０８．
       
       ［11］ Ｄｅｗａｒ ＣＬ，Ｈａｒｔｈ Ｍ．Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｃｙｔｏｋｉｎｅ －ｔｒｅａｔｅｄ ａｄｈｅｒｅｎｔ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ Ｍｅｄ，１９９４，１７：５２．
       
       ［12］ ＤｉｎａｒｅＵｏ ＣＡ．Ｒｏｌｅ ｏｆ ｐｒｏ － ａｎｄ ａｎｔｉ －ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｄｕｒｉｎｇ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎ ｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｆｉｎｄｉｎｇｓ［Ｊ］．Ｊ Ｂｉｄ Ｒｅｇｌｌｌ Ｈｏｍｅｏｓｔ Ａｇｅｎｔｓ，１９９７，ｌｌ（３）：９１．