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       【摘要】 
       目的确定天山岩黄芪中总黄酮的优选超声提取工艺。方法采用正交实验法，考察溶剂量，提取次数，超声时间，溶剂浓度对提取率的影响，以芦丁为标准品，用紫外分光光度标准曲线法测定含量。结果所考察的因素中，天山岩黄芪总黄酮的提取影响程度为：溶剂浓度＞提取时间＞溶剂量＞提取次数，即乙醇浓度７０％，提取时间３０ ｍｉｎ，体积为４０ ｍｌ，提取次数为３ 次。结论超声乙醇提取法最佳工艺组合Ａ３ Ｂ３ Ｃ３ Ｄ３ ，可为利用天山岩黄芪工业生产黄酮类药用成分提供科学依据。
       【关键词】  天山岩黄芪 总黄酮 正交实验法
       Study on the Ultrasonic Extraction Technologies for Total Flavonoid in Hedysarum semenovii regelt Herd
       Ｈａｉｌｉｑｉａｎ· Ｔａｏｅｒｄａｈｏｎｇ， Ｗｕｌｉｙａ· ｓｈａｗｕｔｉ ， Ａｂｕｄｕｈａｍｉｔｉ· ａｂｕｄｕｋｅｙｉｍｕ
       （School of Pharmaceutical Sciences ，Xinjiang Medical Univesrsity，Urumqi ８３００５４，China）
       Abstract：ObjectiveＴｏ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｔｈｅ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ conditions  ｆｏｒ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ Semenovii regelt Ｈｅｒｄ．MethodsThe total ｆｌａｖｏｎｏｉｄ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ＵＶ －ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ， tｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｏｉｄ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ （ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ， ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｔｉｍｅ， ｓｏｌｖｅｎｔ ｑｕａｎtｉｔｙ ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅｓ） ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ．ResultsＴｈｅ ｏｒｄｅｒ ｏｆ ｆａｃｔｏｒｓ ｔｏ ａｆｆｅｃｔ ｔｈｅ ｆｌａｖｏｎｏｉｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ＞ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅｓ ＞ｓｏｌｖｅｎｔ ｑｕａｎtｉｔｙ ＞ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｔｉｍｅ．ConclusionＴｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ technologies ｗｅｒｅ Ａ３ Ｂ３ Ｃ３ Ｄ３.
       Key words：Hedysarum semenovii rｅｇｅｌｔ Ｈｅｒｄ；  Ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎoid；  Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ
       
       天山岩黄芪Hedysarum semenovii Ｒｅｇｅｌｅｔ Ｈｅｒｄ 为豆科岩黄芪属（Hegysarum Ｌｉｎｎ） 植物，分布于新疆乌鲁木齐、伊犁、阿勒泰、塔城等地区。该属植物具有补气固表，利尿托毒，排脓，敛疮生肌之功能。药理研究证明：有强心、利尿、降压、护肝、抗肾炎作用。
       
       化学成分较复杂，富含黄酮类化合物、木质素类、生物碱类、香豆苯醚类、氨基酸［１ ～６］ 、多糖类等。其中具有生物活性的黄酮类化合物具有显著的预防和治疗心血管疾病，具有抗氧化、抗衰老及增强机体免疫等功能。近年来研究表明黄酮类化合物在食品上的应用也越来越广泛，如天然色素、甜味剂、抗氧化剂等。为综合评价药材质量，本研究首次采用正交实验法考察超声提取天山岩黄芪根中总黄酮的优选提取条件。
       １  　材料与仪器
          
       天山岩黄芪６ 月份采自新疆乌鲁木齐东山区采后洗净、晒干、６０℃烘干粉粹后过６０ 目筛备用。由北京大学药学院天然药物学系杨虎彪教授鉴定为天山岩黄芪根Hedysarum semenovii Ｒｅｇｅｌｔ Ｈｅｒｄ。
       
       ＴＵ －１８００ 型紫外可见分光光度计；ＳＫ８２１０ＨＰ 型超声清洗机；芦丁对照品（中国药品生物品检定所）；电子天平（梅特勒－托利多上海仪器有限公司生产）；所用试剂均为分析纯。
       ２  方法［７］ 与结果
       ２．１  对照品溶液的制备精密称取在１０５℃干燥恒重的芦丁对照品２０ ｍｇ 于１００ ｍｌ 容量瓶中，用６０％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得０．２００ ｍｇ／ｍｌ 标准贮备液备用。
       ２．２  供试品溶液的制备精密称取天山岩黄芪根粉１ ｇ，加７０％乙醇２０ ｍｌ，提取２ 次，超声提取３０ ｍｉｎ，过滤，摇匀。再精密吸取２ ｍｌ 置２５ ｍｌ 容量瓶中，加６０％乙醇稀释至刻度，摇匀，备用。
       ２．３  测定波长的选择分别取对照品溶液及供试品溶液各１ ｍｌ按“２．４”项下依法操作，用紫外可见分光光度计将对照品溶液及供试品溶液在２００ ～７００ ｎｍ 进行扫描，结果发现对照品溶液及供试品溶液在３５７ ｎｍ 附近有最大吸收峰，实验中选择测定波长为３５７ ｎｍ。
       
       ２．４  线性关系考察精密量取对照品溶液０．１，０．２，０．４，０．５，０．６，０．８ ｍｌ 置５ ｍｌ 容量瓶中加乙醇稀释至刻度，摇匀，制成含芦丁４ ～３２ μｇ／ｍｌ 的系列标准溶液。以乙醇为空白，在３５７ ｎｍ 波长处测定其吸光度，结果表明芦丁在４ ～３２ μｇ／ｍｌ 范围内符合Ｂｅｅｒ 定律，吸光度与浓度呈良好的线性关系，其回归方程为：
       
       A ＝１７．６３C ＋０．０４６ ９， r ＝０．９９９ ６
       ２．５  提取物中总黄酮含量的测定精密吸取供试品约１０ ｍｌ 于离心试管中，离心４ ０００ ｒ／ｍｉｎ，１０ ｍｉｎ，取上清液５．０ ｍｌ 按“２．４”项下方法处理，测定吸光度值，代入回归方程，计算总黄酮含量。
       ２．５．１  不同乙醇浓度对提取效果的影响以分别以３０％，５０％，７０%，９０％乙醇溶液15 ml对1 g天山岩黄芪根提取两次，20 min/次，结果所得总黄酮的浓度为０．２３１ ０％ ，０．２６５ ４%，０．４２４ ７%，０．４５６ ５%，表明天山岩黄芪根在７０%乙醇溶液提取效果较好。
       ２．５．２  不同时间对提取效果的影响溶剂量为１５ ｍｌ，乙醇浓度为７０％，提取两次，分别用１０ ，２０，３０，４０ ｍｉｎ， 结果所得总黄酮的浓度为０．３７５４％，０．３８５１％，０．４２１２％，０．４３２８％，表明天山岩黄芪在提取时间３０ ｍｉｎ 效果好。
       ２．５．３   不同体积的乙醇对提取效果的影响分别用２０，３０，４０，５０，６０ ｍｌ 浓度为７０％乙醇溶剂提取天山岩黄芪，２０ ｍｉｎ／次，提取两次，结果所得总黄酮的浓度为０．４５２ ８％，０．４９１ ２％，０．５８２３％，０．４１２ ３％，０．３８７ ２％，表明天山岩黄芪在提取溶剂为３０ ｍｌ效果较好。
       2.5.4   不同提取次数对提取效果的影响乙醇浓度为70%，20 min/次，溶剂量为15 ml来提取，提取次数分别为1 次，2 次，3 次，4 次。结果所得总黄酮的浓度为0.215 8％，0.226 0%，0.373 3%，0.385 2%， 表明天山岩黄芪在提取次数3 次时效果较好。
       ２．６  正交实验优化由于各因素之间相互交叉影响，因此为全面考察乙醇提取法的工艺参数，根据单因素实验的结果及在单因素实验的基础上选取乙醇浓度、提取时间、乙醇的体积、提取次数等4 个对提取天山岩黄芪根中的总黄酮含量效果影响的主要因素（表2），选用L9 （34 ）进行正交实验表（见表２）设计实验，并对结果进行直观分析。方差分析见表３。
        
       表1  因素水平（略）
       表2  L9（34）正交实验设计结果（略）
       从表２ 中Ｒ 分析得到：乙醇浓度、提取时间、乙醇的体积、提取次数对黄酮的提取量影响的主次顺序为乙醇浓度、提取时间溶剂体积、提取次数，并且最佳的提取工艺条件为乙醇浓度７０％，提取时间３０ ｍｉｎ，溶剂体积４０ ｍｌ，提取次数３ 次，即Ａ３ Ｂ３ Ｃ３ Ｄ３ 。
       表3  正交实验结果的方差分析（略）
       3  讨论
          
       通过实验研究得到的最佳提取工艺条件为：乙醇浓度７０％，提取时间３０ ｍｉｎ，溶剂体积４０ ｍｌ，提取次数３ 次，即Ａ３ Ｂ３ Ｃ３ Ｄ３ ，在最佳提取工艺条件下测得天山岩黄芪根中总黄酮含量为０．６３１ ２％。本研究为进一步开发利用天山岩黄芪黄酮类化合物奠定了坚实基础。为开发利用该资源提供有益的参考。
       【参考文献】
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       ［2］ 海力茜，梁 鸿，赵玉英，等．多序岩黄芪化学成分研究［Ｊ］．中国中药杂志，２００２，２７（１１）：８４３．
       
       ［3］ 海力茜，张庆英，赵玉英，等．多序岩黄芪化学成分研究［Ｊ］．中国中药杂志，２００４，２９（５）：４３２．
       
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       ［7］ 殷 红，胡永洲，杨金骥，等．杭白菊总黄酮的超声提取工艺研究［Ｊ］．中国中药杂志，２００４，２９（５）：４２４．